固相萃取
--氣相色譜法測定茶葉中的角鯊烯

袁新躍 陳瑜 張培洪 胡路平 周陽元 袁燕村

（浙江省杭州市富陽區食品安全檢驗檢測中心，311400）

角鯊烯最初是從鯊魚的肝油中發現的，1914年被命名為Squalene，其化學名稱為2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，屬開鏈三萜，又稱魚肝油萜，也稱鯊烯。角鯊烯具有抗氧化、抗輻射、抗疲勞和增強人體免疫的作用，可用于肝病治療，并具有一定的抗癌、防癌及保溫養顏作用。角鯊烯最早發現于深海鯊魚肝臟中，后研究人員從植物中提取得到不同含量的角鯊烯，近年來研究人員發現糯米香茶中含有豐富的生物活性物質角鯊烯，使得糯米香茶成為提取角鯊烯的潛在植物資源，有待進一步開發利用。此外，鄭德勇等研究了角鯊烯在茶籽中生長成熟過程中含量的變化規律。大量的研究發現，茶葉籽中含有豐富的角鯊烯。本文建立一種固相萃取-氣相色譜法來準確測定茶葉中角鯊烯含量的方法，為進一步研究茶葉中角鯊烯工作奠定了基礎。

一、材料與方法

1.儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent 7890A，美國），配火焰離子化檢測器（FID）；HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.25mm×0.25μm），旋轉蒸發儀（IKA RV10）；氮吹儀；超聲波（2kw）。

正己烷（色譜純，默克公司）；乙腈（色譜純，默克公司）；石油醚（分析純，30～60℃沸程）等。

2.標準溶液的配制

（1）標準儲備液的配制

準確稱取100.0mg角鯊烯標準品于100mL容量瓶內，加適量正己烷，振搖，使角鯊烯完全溶解后，再加正己烷，定容至刻度，搖勻，即配成1000μg/mL儲備液。

（2）標準工作液的配制

分別吸取 1000μg/mL 儲備液 1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL于100mL的容量瓶中，加正己烷定容至刻度，得到濃度分別為 10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的標準工作液。

3.儀器條件

進樣口溫度：300℃；

檢測器溫度：330℃；

進樣體積：1μL;

升溫程序：160℃（保持2min），15℃/min升到280℃（保持5min），然后5℃/min升到300℃（保持2min）;

分流方式：不分流;

柱流速：2.5mL/min（恒流模式）;

尾吹氣：30mL/min;

載氣:高純氮氣(99.99%)。

4.樣品制備

稱取茶葉樣品10.00g，加入50mL石油醚浸泡，超聲提取1h，過濾，濾渣用10mL石油醚淋洗2次，合并濾液，于35℃水浴中旋轉蒸發濃縮至近干，加入5mL正己烷溶解，過經10mL乙腈甲苯溶液（乙腈∶甲苯=3∶1）活化，5mL正己烷平衡的Cleanert TPT小柱，再用10mL正己烷洗脫小柱，收集洗脫液，氮吹濃縮至近干，加入5mL正己烷溶解，過0.45μm膜，待上機檢測。

二、結果與分析

1.標準曲線及檢出限

以1000μg/mL的標準儲備液，分別配制成濃度為10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100 μg/mL的標準溶液，進樣體積為1μL。以濃度為縱坐標，峰面積為橫坐標，得到線性方程:y=23.5414x+3.2128，線性相關性R2=0.9999。取3倍信噪比（S/N=3）時，角鯊烯的檢出限為1mg/kg。

2.方法回收率

取茶葉樣品為對照（CK），分別添加濃度為10.0mg/kg、20.0mg/kg、50.0mg/kg的角鯊烯，按前述方法進行樣品前處理，測定不同添標濃度和對照茶樣中的角鯊烯濃度，每個添標濃度和參照茶樣均做3份平行，所得添標回收率及相對標準偏差見表1。

表1 回收率實驗結果

表2 精密度實驗結果

表3 不同茶葉樣品中角鯊烯含量mg/kg

3.方法精密度

取茶樣樣品，按前述方法進行樣品前處理，做6份平行，所測濃度及相對標準偏差見表2。由表2可以看出，茶葉中角鯊烯測定結果的相對標準偏差為1.5%，說明方法具有良好的重復性。

4.樣品分析

應用所建立的分析測定方法，對3種不同種類的茶葉樣品進行了分析，所得檢測結果見表3。圖2為烏龍茶茶樣中角鯊烯色譜圖。

三、討論

實驗結果表明：固相萃取-氣相色譜法測定茶葉中角鯊烯含量的方法，重現性好，目標峰分離效果好，通過Cleanert TPT小柱脫色處理后，可以有效的去除干擾峰。方法在10～50 mg/kg的添標水平，方法回收率在94.0%～100.6%，最低檢出限達到1mg/kg，可以滿足茶葉中角鯊烯含量測定的要求。實驗還對綠茶、紅茶和烏龍茶中的角鯊烯含量進行了檢測，發現在綠茶、紅茶和烏龍茶中均有檢出角鯊烯，且烏龍茶中角鯊烯含量達到233.8mg/kg，這對進一步開發茶葉應用價值，提高資源利用率有一定的意義。關于茶葉中角鯊烯含量測定國內外還沒有文獻報道，因此本方法的建立將對以后茶葉中角鯊烯的研究提供一定的指導意義。

圖1 角鯊烯標樣色譜圖（50μg/mL）

圖2 烏龍茶茶樣中角鯊烯色譜圖