ITP患者激素治療前后血清IL-18、CXCL10表達水平的變化及意義探討

張興利　吳鵬飛　邱宏春　孔榮

ITP患者激素治療前后血清IL-18、CXCL10表達水平的變化及意義探討

張興利吳鵬飛邱宏春孔榮

【摘要】目的 研究原發免疫性血小板減少癥（primary immune thrombocytopenia，ITP）患者血清中白細胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）、CXC趨化因子配體10（CXC chemo-kine ligand-10，CXCL10）的表達水平，探討其在ITP發病中的臨床意義。方法 采用酶聯免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）定量檢測45例ITP患者、20例健康者（正常對照組）血清IL-18、CXCL10的水平。結果 激素治療前ITP患者血清IL-18、CXCL10的表達水平均高于正常對照組（t=5.126，6.576，P＜0.05），治療后兩者與治療前比較均有統計學差異（t=10.616，7.399，P＜0.05）。激素治療有效組IL-18、CXCL10的表達水平與正常對照組比較無統計學差異（q = 0.521，0.871，P＞0.05），而無效組IL-18的表達水平仍高于有效組和正常對照組（q=6.137，5.867，P＜0.05）；無效組CXCL10的表達水平同樣高于有效組和正常對照組（q=8.933，7.642，P ＜ 0.05）。初發未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10表達呈正相關性（r=0.539，P＜0.05）。結論 ITP患者不同時期血清中IL-18、CXCL10的表達水平不同，且兩者具有顯著相關性，提示其可能在ITP的發病及治療過程中發揮一定的作用，聯合檢測有望在ITP的病情監測、預后判斷等方面提供依據。

【關鍵詞】原發免疫性血小板減少癥；白細胞介素18；CXC趨化因子配體10

作者單位：215300 江蘇省昆山市第三人民醫院血液腫瘤科

Changes and Significance of Serum IL-18 and CXCL10 Levels in Patients With ITP Before and After Hormone Therapy

ZHANG Xingli WU Pengfei QIU Hongchun KONG Rong, Department of Hematology and Oncology, the Third People's Hospital of Kunshan, Kunshan 215300, China

[Abstract]Objective To study the expression of Interleukin-18(IL-18)and CXC chemo-kine ligand-10(CXCL10)in primary immune thrombocytopenia(ITP)and clarify their clinical significance. Methods Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the expression of IL-18 and CXCL10 in serum samples from 45 ITP patients, 20 volunteers(normal control group)served as controls. Results The expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group were significantly higher than normal control group(t=5.126, 6.576, P<0.05). Both IL-18 and CXCL10 of post-treatment group were significantly different with untreated group(t=10.616, 7.399, P<0.05). Additionally, the levels of IL-18 and CXCL10 in effective-treatment group were not significantly different with normal control(q=0.521, 0.871, P>0.05). However, the levels of IL-18 in ineffective-treatment group were still significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=6.137, 5.867, P<0.05). The levels of CXCL10 in ineffective-treatment group were also significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=8.933, 7.642, P<0.05). There was positive correlation between serum expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group(r=0.539, P<0.05). Conclusion Different expressions of serum IL-18 and CXCL10 were found in ITP patients, which reflected they may play an important role in pathogenesis and therapy of ITP. United detection of serum IL-18 and CXCL10 may be used as reference indexes of ITP’ clinical stages and prognosis.

[Key words]Primary immune thrombocytopenia, Interleukin-18, CXC chemo-kine ligand-10

原發免疫性血小板減少癥（primary immune thrombocytopenia，ITP）是一種獲得性自身免疫性出血性疾病。研究表明，Th1/Th2細胞的平衡在自身免疫病的發生發展過程中起重要作用，其平衡失調與ITP的發生發展有關[1]。目前，在多種疾病中發揮重要作用的IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表達水平方面的研究還很少。為此，我們檢測了45例ITP患者的血清IL-18、CXCL10在激素治療前后表達水平的變化，現報道如下。

1　資料和方法

1.1 一般資料

45例ITP患者均為江蘇省昆山市第三人民醫院血液腫瘤科2012年1月～2014年6月新診斷的ITP患者，根據《成人原發免疫性血小板減少癥診斷與治療中國專家共識（2011年版）》的診斷標準確診。其中男性11例，女性34例，年齡12～91歲，平均年齡（46.78±19.49）歲。選取20例健康體檢者，近期均無局部及全身感染性疾病，均排除肝、心、腎、肺及其他惡性疾病，也無其他慢性疾病史。本研究通過昆山市第三人民醫院倫理委員會批準并經入組者知情同意。

1.2標本采集

抽取正常對照組和實驗組（激素治療前及治療至血小板正常后）清晨靜息狀態下空腹靜脈血3～5 ml，標本靜置2 h后，3 000 r/min離心15 min，分離血清，于-80℃凍存待測，避免反復凍溶。

1.3主要試劑及儀器

IL-18 ELISA試劑盒、CXCL10 Elisa試劑盒均購自上海藍基生物公司。酶標儀器：型號：MK3，Thermo公司。-80℃超低溫冰箱：中國海爾有限公司。

1.4治療方法

對所有入組患者均采用地塞米松靜滴[劑量按潑尼松1 mg/（Kg·d），以潑尼松：地塞米松=5 mg：0.75 mg換算]，至血小板達正常水平后改潑尼松口服。結果：45例ITP患者在運用激素治療后有40例患者血小板水平在一周內升至正常（平均6.18天），有5例患者在運用激素治療兩周后血小板仍＜30×109/L或者血小板計數增加不到基礎值的兩倍，視為治療無效。

1.5檢測方法

采用ELISA檢測每份血清中待測因子的水平，檢測步驟嚴格按照說明書進行。

1.6統計學處理

采用SPSS13.0軟件包分析，所有數據處理前行正態性檢驗。計量資料符合正態分布，采用（均數±標準差）（x-±s）表示，治療前后組均數比較采用配對t檢驗，多組間均數比較采用單因素方差分析進行組間兩兩比較，行SNK法q檢驗。兩變量關聯性

分析采用線性相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1ITP患者激素治療前、后血清IL-18、CXCL10表達水平

ITP患者激素治療前血清IL-18、CXCL10水平均高于正常對照組（t=5.126，6.576，P＜0.05）；治療后血清IL-18、CXCL10水平與治療前比較均有統計學差異（t=10.616，7.399，P＜0.05），見表1。

表1　各組血清IL-18、CXCL10表達水平（x-±s）

2.2ITP患者激素治療后不同療效組血清IL-18、CXCL10表達水平

激素治療有效組患者的血清IL-18水平與正常對照組比較無顯著性差異（q=0.521，P＞0.05）；無效組患者的血清IL-18水平高于正常對照組和有效組（q=6.137，5.867，P＜0.05）。激素治療有效組患者的血清CXCL10水平與正常對照組比較無顯著性差異（q=0.871，P＞0.05）；無效組患者的血清CXCL10水平高于正常對照組和有效組（q=8.933，7.642，P＜0.05）。見表2。

表2　ITP患者激素治療后不同療效組血清IL-18、CXCL10表達水平（x-±s）

2.3初發未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10的相關性

運用SPSS13.0軟件包對45例初發未治療ITP患者的血清IL-18、CXCL10值繪制散點圖（圖1），結果顯示IL-18、CXCL10值之間具有線性相關趨勢。進一步做線性回歸與相關分析，結果顯示兩者具有正相關性（r =0.539，P＜0.05）。

3　討論

圖1　初發未治療ITP患者的血清IL-18、CXCL10值散點圖

也包括細胞免疫的失調，T細胞的異常在ITP的發生發展過程中起到的作用越來越受到重視。一般認為ITP多傾向于 Th1細胞反應[2]。Th1細胞主要分泌TNF、IFN-γ等細胞因子，這類細胞因子能清除胞內病原體，介導細胞免疫應答。在活動期ITP患者中，一些T淋巴細胞基因上調，其中與Th1優勢有關的IFN-γ等因子水平顯著升高[3]。近年來，有關IL-10、TNF-α等細胞因子在ITP中的表達情況研究較多[4-5]，但是IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表達水平方面的研究卻很少。我們的研究發現，ITP患者激素治療前血清IL-18、CXCL10的表達水平高于正常對照組，提示IL-18、CXCL10在ITP患者的疾病發生過程中可能起到一定的作用。

IL-18最初被命名為“IFN-γ誘生因子”，具有強大的誘生IFN-γ能力，能夠加強FasL介導的Th1類細胞毒效應，是Th1和Th2細胞分化的重要決定因子。作為T細胞炎癥介質的強力誘導者，IL-18在類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、再生障礙性貧血等疾病的患者中已經檢測出其表達失衡。任敏[6]等檢測了34例類風濕性關節炎（RA）患者外周血清IL-18水平，RA活動組的表達水平顯著高于正常對照組，高度活動組顯著高于低度活動組，提示血清中IL-18作為信號轉導的下游致炎因子，在RA發病機制中起重要作用。單寧寧[7]等分析29例再生障礙性貧血（AA）患者血清IL-18水平，結果顯示AA患者血清IL-18較正常對照組明顯升高，其中重型AA患者升高更為明顯，提示其在AA患者的免疫紊亂和發生、發展中起著一定作用。

CXCL10能趨化招募活化的T細胞和巨噬細胞等炎性細胞遷移，主要介導Th1型炎癥反應，通過一系列信號轉導途徑介導免疫細胞的遷移、活化，參與多種疾病的免疫調控。許多研究表明，CXCL10參與自身免疫性疾病的發生發展。孟鳳苓[8]等采用雙抗夾心ELISA法檢測不同臨床階段Graves病（GD）患者和正常對照者血清CXCL10水平，發現GD未治療組及復發組高于緩解組及正常對照組，提示其可以作為評估GD患者疾病免疫狀態外周血的標志物。黃海峰等[9]檢測35例尋常型銀屑病患者血清CXCL10的表達情況，研究發現患者血清CXCL10的表達水平明顯高于正常對照組。張銘明[10]等檢測96例系統性紅斑狼瘡（SLE）患者血清CXCL10表達水平并對亞組進行分析，結果顯示CXCL10的表達水平與SLE疾病活動性密切相關，尤其對狼瘡腎炎及疾病活動的早期檢測具有重要意義。

本研究結果顯示，ITP患者在經過激素治療后血清IL-18、CXCL10表達水平與治療前相比均顯著下降，其中有效組IL-18、CXCL10的表達水平與正常對照組比較無統計學意義，而無效組的表達水平無明顯下降，顯著高于有效組及正常對照組。這提示IL-18、CXCL10在ITP的發展過程中可能發揮一定的作用，其表達水平的變化可能與預后有關。同時，對初發未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10的表達水平進行相關性分析表明，兩者具有正相關性。分析原因，IL-18具有強大的誘生IFN-γ能力，而在IFN-γ的刺激下CXCL10分泌增加，兩者共同作用，調控Th1型炎癥反應。因此，上述結果表明，在ITP的發病及治療過程中IL-18、CXCL10可能相互作用，共同發揮免疫調節作用。聯合檢測IL-18、CXCL10有望在ITP的病情監測、預后判斷及治療方案的選擇等方面提供依據。

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基金項目：昆山市社會發展科技計劃項目，項目編號KS1334

通訊作者：張興利，E-mail：zhangxingli2013204@163.com

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.24.029

【文章編號】1674-9308（2015）24-0045-03

【文獻標識碼】B

【中圖分類號】R558