結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin表達變化及意義

于婧，王鳳琴，姚文娟，張偉強(中國石油天然氣集團公司中心醫院，河北廊坊065000)

結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin表達變化及意義

于婧，王鳳琴，姚文娟，張偉強
(中國石油天然氣集團公司中心醫院，河北廊坊065000)

摘要:目的觀察結直腸癌組織中3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1( PDK1)、Bcl-2、survivin表達變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測52例份結直腸癌組織(癌癥組)及癌旁正常腸黏膜組織(對照組)、38例份腺瘤組織(腺瘤組)中的PDK1、Bcl-2、survivin蛋白，分析其與結直腸癌臨床病理特征的關系及三者表達的相關性。結果癌癥組PDK1、Bcl-2、survivin蛋白陽性表達率均明顯高于腺瘤組和對照組，P均＜0.05。PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達均與結直腸癌T分期、淋巴結轉移有關( P均＜0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤分級等因素無關( P均＞0.05)。結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達兩兩互為正相關( P均＜0.05)。結論結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin呈高表達，三者可能在結腸癌的發生發展過程中具有一定的協同作用。

關鍵詞:結直腸癌; 3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1; B淋巴細胞瘤/白血病2基因;生存素

3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1( PDK1)是蛋白激酶B ( PKB)、核糖體蛋白S6激酶、蛋白激酶C ( PKC)等AGC激酶活化環的上游激酶之一［1］，具有促進細胞增殖、遷移及抗凋亡作用［2］。目前，Bcl-2 和survivin均為研究比較成熟的細胞凋亡抑制因子，與多種惡性腫瘤的發生發展密切相關。2014年7～10月，我們采用免疫組化法檢測了結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin蛋白的表達情況，探討其在結直腸癌發生、發展中的作用。

1　材料與方法

1.1臨床資料收集我院2013年2月～2014年6月存檔的診斷明確、臨床資料完整的結直腸癌標本52例份(癌癥組)，患者中男30例、女22例，年齡( 59.38±9.72)歲，術前均未行化療或放射治療;腫瘤分級為高分化7例，中分化34例，低分化11例; T分期( AJCC，第7版) T1～T2期17例，T3期26例，T4期9例;無淋巴結轉移35例，淋巴結轉移17例。隨機選取同期收治的結直腸腺瘤標本38例份(腺瘤組)，患者中男22例、女16例，年齡( 54.63± 10.54)歲。收集癌癥組癌旁正常腸組織52例份作為對照組。三組年齡、性別具有可比性。

1.2 PDK1、Bcl-2、survivin表達檢測采用免疫組化SP法。PDK1、Bcl-2、survivin抗體均以1∶50稀釋后，按照SP-9000免疫組化試劑盒、ZLI-9017濃縮型DAB試劑盒說明進行。用PBS代替一抗作陰性對照，以已知PDK1、Bcl-2、survivin陽性表達的組織切片為陽性對照。PDK1蛋白陽性信號位于細胞質和(或)細胞膜內，Bcl-2、survivin蛋白陽性信號位于細胞質，呈棕黃色顆粒樣。每張切片于高倍鏡下隨機觀察10個視野，每視野細胞數不少于100個。采用半定量計分法，陽性細胞比例0、≤25%、25%～50%、50%～75%、＞75%分別計0～4分，染色強度無、弱、中、強分別計0～3分，兩項分數相加≥2分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。各組陽性率比較采用χ2檢驗及連續性校正的χ2檢驗，蛋白表達相關性采用Spearman等級相關分析。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

2.1各組PDK1、Bcl-2、survivin陽性表達率比較癌癥組、腺瘤組和對照組PDK1陽性表達率分別為69.23%( 36/52)、21.05% ( 8/38)、7.69% ( 4/52)，Bcl-2陽性表達率分別為63.46% ( 33/52)、23.68% ( 9/38)、9.62%( 5/52)，survivin陽性表達率分別為78.85% ( 41/52)、18.42% ( 7/38)、14.58 % ( 7/52)。癌癥組PDK1、Bcl-2、survivin陽性表達率均明顯高于腺瘤組和對照組，P均＜0.05。

2.2 PDK1、Bcl-2、survivin表達與結直腸癌臨床病理參數的關系見表1。

表1　 PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達與結直腸癌臨床病理參數的關系［例( %)］

2.3直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin表達的關系相關性分析顯示，結直腸癌組織中PDK1與Bcl-2蛋白表達同時陽性率為53.85% ( 28/52)，同時陰性率為21.15% ( 11/52)，二者呈正相關( r = 0.446，P＜0.05) ; PDK1與survivin蛋白表達的同時陽性率為61.54% ( 32/52)，同時陰性率為13.46% ( 7/52)，二者表達呈正相關( r = 0.369，P＜0.05) ; survivin與Bcl-2蛋白同時陽性率51.69% ( 30/52)，同時陰性率為15.38% ( 8/52)，二者呈正相關( r = 0.389，P＜0.05)。

3　討論

PDK1是一種63 kD的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，包括C端的血小板—白細胞C激酶底物同源性結構域和N端的激酶結構域［3］，PH結構域結合P13K產物三磷酸肌醇，使PDKl靶向胞膜并激活Akt，從而作用于下游的多種底物如NF-кB、Caspase-9、內皮型一氧化氮合酶等［4］，繼而影響細胞生長、遷移、抗凋亡和血管生成等生物學效應［5］。由PDK1介導的PI3K/Akt信號通路異常已被證明與多種惡性腫瘤有關［6～9］。本研究結果顯示，癌癥組PDK1蛋白陽性表達率高于腺瘤組、對照組，且與腫瘤T分期及淋巴結轉移有關，與文獻報道一致。

Bcl-2是發現較早的凋亡抑制因子，是線粒體膜滲透性改變的內源性抑制物，在增殖狀態的細胞中表達，對維持細胞代謝有重要作用。染色體易位可導致Bcl-2過量表達，通過阻止線粒體釋放細胞色素C從而阻斷蛋白酶連鎖反應的激活，延長細胞生存期，使細胞增殖與凋亡平衡紊亂，促使腫瘤發生發展［10］。survivin基因是迄今發現最強的凋亡抑制因子，定位于人類染色體17q25。有研究發現，survivin直接與Caspase-9結合抑制其促凋亡功能，或通過結合線粒體釋放的Caspases激活物間接抑制細胞凋亡［11，12］。細胞凋亡的過程較為復雜，已有大量文獻證實，Bcl-2與survivin表達在胃癌［13］、結腸癌［14］、宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中呈正相關，具有協同抗凋亡作用。Kawasaki等［15］檢測171例結腸癌組織中survivin、Bcl-2的表達，發現二者顯著相關，二者均可被缺少TATA而富含GC的啟動子調控，在增生活躍的細胞中轉錄。提示它們有著共同或相似的轉錄激活機制，并協同發揮抗凋亡作用。Rajput等［16］研究顯示，PDK1的磷酸化激活，通過影響線粒體損傷以及Bcl-2、Bcl-xL、survivin的調節，誘導細胞凋亡過程。本研究結果顯示，癌癥組Bcl-2、survivin蛋白陽性表達率高于腺瘤組及對照組，與腫瘤分期及淋巴結轉移有關，且二者與PDK1表達互為正相關。因此，結直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin高表達，三者可能在結腸癌的發生發展過程中具有一定的協同作用。

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收稿日期:( 2015-02-01)

文章編號:1002-266X( 2015) 30-0034-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R735.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.013