肺炎支原體的快速液體培養與血清法的聯合應用探討

李　新，岳興華

(天津中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科，天津　300193)

肺炎支原體的快速液體培養與血清法的聯合應用探討

李新，岳興華

(天津中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科，天津300193)

[摘要]目的：探討肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia，MP) 快速液體培養及藥敏與肺炎支原體抗體檢測的聯合應用的臨床價值。方法：對同一患者分別取呼吸道標本及靜脈血進行MP快速液體培養和血清中肺炎支原體抗體的測定，然后對進行快速法、血清法及快速加血清法進行統計學分析與比較。 結果：512例肺炎支原體快速培養標本中，陽性87例 ，檢出率是16.99%。血清學抗體檢測中，陽性138例，檢出率26.76%。將這兩種方法差異有統計學意義。但聯合使用兩種方法與血清法比較差異無統計學意義。結論：MP快速液體培養法無需特殊設備，操作簡單，陽性者帶有藥敏結果，是目前比較理想的早期診斷方法之一，但要注意取材質量，適合各級醫院推廣，尤其社區醫院。血清法特異性強，如能將快速培養與血清學檢測聯合應用則更加準確，減少假陽性和假陰性率的發生。

[關鍵詞]肺炎支原體的快速液體培養；藥敏；肺炎支原體抗體

Abstract：ObjectiveTo investigate the clinical value of fast liquid culture of Mycoplasma pneumonia (MP) and drug sensitivity combined with Mycoplasma pneumoniae antibody.MethodFor the same patient respiratory tract specimens of MP fast liquid culture and venous blood of mycoplasma pneumoniae antibody in serum were taken，and then compared by statistical analysis of the fast method，serum method and combinate method.Results512 cases of Mycoplasma pneumoniae rapid culture specimens，87 were positive，the detection rate was 16.99%.Serological antibody detection，138 cases were positive，the detection rate of 26.76%.These two methods were significant difference. But a combination of the two methods and serum were compared，the difference wasn′t statistically significant.ConclusionMP rapid liquid culture method without special equipment，simple operation，positivewith the drug sensitivity results，but pay attention to material quality.Is one of the ideal method for early diagnosis，suitable for all levels of hospitals，especially in community hospital.Method serum specificity，such as can be quickly combined application of culture and serological detection is more accurate，reduce the incidence of false positive and false negative rate.

[收稿日期：2015-02-12編校：鄭英善]

Investigate of the serum method combined with fast liquid culture of Mycoplasma pneumoniaeLIXin，YUEXing-hua(DepartmentofClinicalLaboratory，TheFirstAffiliatedHospitalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193,China)

Key Words:Fast liquid culture of Mycoplasma pneumoniae；Drug sensitivity；Mycoplasma pneumoniae antibody

近年來關于肺炎支原體MP,感染的報道日益增多,大環內酯類抗菌素在使用過程中出現了日趨嚴重的耐藥性。由肺炎支原體引起的呼吸道感染的臨床診斷基本上依賴于臨床癥狀，因其病史和臨床表現常常缺乏特異性，因此病原學的診斷非常困難。肺炎支原體的各種實驗室檢測手段不夠特異、敏感、快速，因而臨床價值有限。培養分離病原體被認為是診斷感染的金標準， 但分離培養肺炎支原體難度大、 耗時長、 不適用于肺炎支原體的感染診斷[1]。近年來MP快速液體培養已有商品試劑供應，但其臨床應用價值文獻報道差別較大。本研究將2013年對我院住院及門診患者使用快速培養和血清抗體檢測進行對比分析，現報告如下。

1資料與方法

1.1標本來源：所有標本均來自本院住院及門診呼吸道感染的患者 ，嚴格按照標準操作規程采集質量合格的咽拭子和痰液及靜脈取血。

1.2儀器與試劑：肺炎支原體快速液體鑒定與藥敏試劑盒由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供。電熱恒溫箱一臺。 肺炎支原體抗體檢測試劑盒為日本富士瑞必歐株式會社產品。

1.3方法

1.3.1MP快速液體培養法：按使用說明書進行操作，用無菌咽拭子在被檢測患者口腔喉部捻轉數次或用無菌棉簽在被檢測患者痰標本捻轉數次采集標本，置培養基瓶內攪動數次，擠壓去除拭子。置于37℃孵箱中培養24 h后觀察結果。培養基顏色由原紅色變成清亮的淡黃色判為陽性 。如液體已渾濁即使變色也視為污染而不判為陽性，可用接種環蘸取一快速液體培養渾濁生長的標本于清潔玻片上，干燥后進行革蘭染色，用顯微鏡下觀察來證實是細菌或真菌污染。 培養基顏色不變色判斷為陰性。

1.3.2肺炎支原體抗體檢測：采用被動凝集法，按使用說明書進行操作，其利用MP細胞膜成分mac株致敏人工明膠粒子與人血清中存在的肺炎支原體抗體發生凝集反應， 其檢測抗體效價結果以≥1∶40判斷為陽性。

1.3.3聯合檢測陽性結果的判斷：針對同一患者分別使用快速培養與血清法檢測，其中一項為陽性者則視為聯合檢測結果陽性。

1.4統計學分析：采用SPSS13.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

不同方法檢測肺炎支原體感染測定結果對比，見表1。

表1不同方法檢測肺炎支原體感染測定結果比較

方法陽性數陰性數陽性率(%)快速培養8742516.99①②血清學檢測13837427.09②聯合檢測15635630.47

注：與血清學檢測比較，①P<0.001；與聯合檢測比較，②P>0.05

3討論

國內外大多數研究顯示，下呼吸道感染(包括社區和獲得性肺炎CAP，慢性阻塞性肺疾病加重AECOPD以及支氣管擴張急性加重AEB)嚴重威脅人類健康[2]，其發病率和死亡率也一直居高不下，其中由非典型病原體所致的感染不斷增加，MP等非典型病原體已取代了肺炎鏈球菌的重要位置。故MP的診斷尤為重要。可肺炎支原體感染具有其臨床癥狀不典型的特點，雖然傳統MP分離培養是診斷的金標準，但其難度大，不能普及。PCR法具很高的特異性、 敏感性，但其要求操作技術高，儀器設備昂貴，不適合一般實驗室開展。

選擇血清法檢測肺炎支原體抗體比培養法更簡單且敏感，2 h即出結果。但是由于IgM抗體在發病5~7 d才產生[3]，早期患者假陰性率會較高，同時檢測結果也因受患者年齡、免疫力等因素的影響造成嬰幼兒及免疫力低下的患者易被漏檢。當然也會有一部分已康復的患者因IgG在體內尚存被測出陽性。

肺炎支原體快速培養基是人工合成專為MP快速培養鑒定的液體培養介質，培養基中按照支原體的成長要求科學配置了支原體繁殖所需的蛋白質、糖類等營養成分及促進MP快速成長的生長因子。 其次，還加入了抑制其他微生物成長的抗生素， 在一定時間內控制其他微生物的繁殖。其原理就是利用由于繁殖的過程中其代謝物會改變培養基的pH值，在培養基中的指示劑會隨著pH值的改變而呈現顏色的變化。快速液體培養法由于其操作簡單無需特殊設備，24 h基本解決問題[4-5]。此方法的特點是屬于無創檢測，患者沒有痛苦，尤其為早期確診提供便利，可提早對癥治療，從而控制病程發展。為驗證是否真能抑制細菌和真菌的生長，本人曾將純培養的白假絲酵母菌、大腸埃希菌、干燥奈瑟氏菌、草綠色鏈球菌、不動桿菌和表皮葡萄球菌分別放入液體培養基的小瓶中，經37℃ 24 h培養后發現不動桿菌和表皮葡萄球菌的小瓶渾濁變色，其他小瓶僅僅渾濁沒變色。同時也將做快速培養渾濁的小瓶加以驗證，結果相符。經實驗觀察可通過對液體顏色及渾濁情況來判斷陰陽性。

從總體結果來看，快速法陽性率還是低于血清法，原因之一就是培養法標本取材質量還應再提高。快速法是2013年新開設的實驗方法，通過比較可以總結出快速培養法優點是對發病早期或不易產生抗體的有優勢，同時可得到藥敏結果。為臨床醫生提供幫助，患者屬于無創檢測。檢測MP抗體的優點是敏感、特異，可通過觀察抗體梯度的變化了解病情。缺點是兩種方法都不是金標準，存在一定的假陰性和假陽性。所以最好將兩種方法聯合檢測。

參考文獻4

[1]袁應華，劉瑾，成潔，等.快速液體培養法檢測呼吸道標本中的肺炎支原體[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34(3)：343.

[2]熊諱虹，鄧銳，付榮榮，等.非典型病原菌致成人社區獲得性肺炎患者的臨床特點分析[J].中華結核和呼吸病雜志， 2010， 33(5)： 646.

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