HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊中的有關(guān)物質(zhì)含量

趙莉莉

HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊中的有關(guān)物質(zhì)含量

趙莉莉

目的建立泮托拉唑鈉腸溶膠囊的測定方法,科學(xué)測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊相關(guān)物質(zhì)含量。方法選用國內(nèi)3個廠家生產(chǎn)的10個批次的泮托拉唑鈉腸溶膠囊,以20 μl為進樣量,采用高效液相色譜法(HPLC)、梯度洗脫法(色譜柱為Kromasil C1,流動相為0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-乙腈,柱溫40℃,流速1.0ml/min,波長290 nm),檢測有關(guān)物質(zhì)含量。結(jié)果泮托拉唑鈉能被氧化、酸堿以及加熱破壞,而不受輔料干擾,濃度0.56～50.50 μg/ml與峰面積具有良好線性關(guān)系,5 h內(nèi)供試品穩(wěn)定性良好,樣品平均標示含量為99.8%,相對標準差(RSD)=1.09%,精密度較高,本實驗中主峰與雜質(zhì)峰分離度良好。結(jié)論HPLC梯度洗脫法具有操作簡單、專屬性好、精確度高以及靈敏度佳的優(yōu)點,可以作為泮托拉唑鈉腸溶膠囊相關(guān)物質(zhì)測定的科學(xué)方法。

高效液相色譜法；梯度洗脫法；泮托拉唑鈉腸溶膠囊；有關(guān)物質(zhì)

泮托拉唑作為臨床常用的質(zhì)子泵抑制劑之一,其作用效果與奧美拉唑、蘭索拉唑相似,主要應(yīng)用在胃潰瘍、返流性食管炎、十二指腸潰瘍以及卓–艾氏綜合征等疾病的治療中［1］。藥物有關(guān)物質(zhì)檢測對于保障藥物應(yīng)用的安全性具有重要意義,國內(nèi)外目前檢測藥物物質(zhì)含量多采用HPLC洗脫法進行［2］。本實驗中應(yīng)用HPLC法測定泮托拉唑有關(guān)物質(zhì)含量,旨在建立泮托拉唑鈉腸溶膠囊物質(zhì)測定方法的同時,檢測其藥物穩(wěn)定性和安全性,為臨床應(yīng)用提供參考。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫生產(chǎn)),泮托拉唑鈉腸溶膠囊(規(guī)格：以泮托拉唑計40mg/粒,生產(chǎn)廠家分別為大連美羅大藥廠、華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司以及杭州中美華東制藥有限公司),磷酸氫二鈉,磷酸二氫鈉,乙腈(Merck 公司),超純水(二次重蒸水)以及泮托拉唑鈉對照品(來自于中國食品藥品檢定研究院) 。

1.2 實驗條件

1.2.1 色譜條件參數(shù) 磷酸氫二鈉以及磷酸二氫鈉作為分析純,乙腈作為色譜純,色譜柱：Kromasil C18,即(250mm×4.6mm,5 μm),流動相：經(jīng)磷酸調(diào)節(jié)后pH=7.0的0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-乙腈,線性梯度洗脫： 90：10起始(即0 min)→60：40進行30 min→15：85進行45 min；檢測波長: 290 nm；流速：1.0ml/min；色譜柱溫度：40℃；進樣量體積：20 μl。

1.2.2 配置溶液 將泮托拉唑鈉腸溶膠囊的內(nèi)容物取出后研成細粉,取適量細粉,添加0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-乙腈(1：1) 溶液,待細粉溶解后,稀釋到每1毫升溶液中含泮托拉唑0.4mg,經(jīng)過濾、離心處理之后,取上清液用作供試品溶液。供試品溶液精密量取1ml,置入100ml量瓶之中,添加0.001 mol/L氫氧化鈉溶液混合乙腈溶液(1：1)稀釋至刻度,充分混勻后用作對照溶液。本實驗中所配置的溶液單個雜質(zhì)均為＞0.5% ,總雜質(zhì)＜1.5%,在溶液色譜圖分析中,未計入供試品溶液＜0.05倍對照溶液主峰面積的色譜峰。

1.3 實驗方法

1.3.1 破壞性實驗 ①氧化破壞。取適量泮托拉唑鈉腸溶膠囊內(nèi)容物(約相當(dāng)于20mg泮托拉唑) 放置在50ml量瓶之中,添加10ml的0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-乙腈(1：1)使內(nèi)容物溶解,在加入1ml的30%過氧化氫溶液,靜置,第2天取出,再次添加氫氧化鈉溶液-乙腈溶劑,直至達到刻度,混勻后,精確量取20 μl樣品,應(yīng)用高效液相色譜儀分析并記錄色譜圖。②加熱破壞量取適量內(nèi)容物放置在稱量瓶之中后,在60℃條件下靜置10 d后,從中稱取約20mg泮托拉唑,加入50ml量瓶,添加氫氧化鈉溶液-乙腈溶劑10ml,內(nèi)容物溶解后,再稀釋至50ml,搖勻,量取20 μl樣品注入到液相色譜儀,分析記錄色譜圖。③酸堿破壞分別取相當(dāng)于20mg泮托拉唑的內(nèi)容物分別裝入50ml量瓶中,分別添加10ml分析純?nèi)軇┦蛊淙芙?酸破壞實驗量瓶添加0.1ml濃鹽酸后放置1 min再添加1 mol/L氫氧化鈉溶液,堿破壞瓶中添加5ml的1 mol/L氫氧化鈉溶液后再添加1 mol/L鹽酸,之后分別加入分析純稀釋至50ml,充分混勻后,分別取20 μl樣品液進行液相色譜分析。

1.3.2 干擾試驗 取不同生產(chǎn)企業(yè)的處方比例僅混合輔料配置,按照處方精確稱取泮托拉唑鈉制劑所用輔料200mg,放置在100ml 量瓶中,加流動相溶解稀釋至刻度,搖勻,過濾,取 20 μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。

1.3.3 線性試驗 取20mg泮托拉唑鈉對照品置于50ml量瓶中,添加流動相待對照品溶解后,稀釋至50ml,混勻,精密量取1、3、5、7ml溶液,分別置于4個10ml量瓶,添加流動相稀釋至10ml,混勻,1.2.1色譜條件下,將樣品濃度作為橫坐標,色譜峰面積作為縱坐標,建立回歸方程并算出相關(guān)系數(shù)。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗 取200mg泮托拉唑鈉細粉,置入100ml量瓶,加入適量流動相后進行超聲溶解后,再次流動相稀釋至100ml,搖勻后,過濾取濾液,每隔1 h取1次樣品(均為20 μl)注入色譜儀,記錄5 h的色譜圖。

1.3.5 精密度試驗 取同一批次的泮托拉唑鈉腸溶膠囊供試品溶液,分別裝入5個量瓶中,在不同日期由不同分析人員對樣品進行測定,計算5次測定結(jié)果的平均值和相對標準偏差。

2 結(jié)果

破壞性實驗結(jié)果顯示,在氧化、酸堿以及加熱情況下,雜質(zhì)峰與主峰基線均能夠明顯分離,而不用比例混合的輔料對于原料藥物測定物無明顯干擾,說明泮托拉唑鈉原料能夠被酸堿、氧化及加熱破壞。對峰面積(A)和泮托拉唑鈉進樣濃度進行線性回歸方程分析后發(fā)現(xiàn),相關(guān)性系數(shù)r=0.9994,進樣處于濃度為0.56～50.50 μg/ml,峰面積之和具有良好線性關(guān)系。穩(wěn)定性實驗顯示5 h內(nèi)峰面積的RSD=0.99%,說明5 h內(nèi)樣品供試品溶液穩(wěn)定性良好。精密度實驗顯示平均標示含量99.8%,RSD=1.09%,顯示精密度較高。本實驗中,主峰與雜質(zhì)峰均能良好分離,說明HPLC色譜系統(tǒng)能夠有效檢測藥物有關(guān)物質(zhì),具有良好專屬性和耐用性。

3 討論

質(zhì)子泵是胃酸分泌最終環(huán)節(jié),泮托拉唑能夠特異性結(jié)合質(zhì)子泵(H+-K+-ATP酶),而發(fā)揮抑制胃酸分泌的作用。雖然泮托拉唑鈉臨床較為廣泛,但是國內(nèi)外藥典均未將其載入其中。目前泮托拉唑鈉腸溶膠囊的執(zhí)行標準為國家藥品標準WS1-( X-198) -2004Z和經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局審批的相關(guān)注冊標準,因此改進檢測有關(guān)物質(zhì)方法以及提高雜質(zhì)限度對于提高泮托拉唑鈉質(zhì)量、保證藥品安全性和可靠性具有十分重要的意義［3,4］。

綜上所述,通過應(yīng)用HPLC梯度洗脫法對于泮托拉唑鈉腸溶膠囊的有關(guān)物質(zhì)進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然輔料并不干擾藥物性質(zhì),但是酸堿度改變、加熱以及氧化均能夠破壞藥物有效性,應(yīng)用HPLC梯度洗脫法能夠?qū)⒅鞣搴碗s質(zhì)有效分離,其具有專屬性強、耐用性好、精密度高、操作簡便等優(yōu)點,可以作為藥物檢測的科學(xué)方法。

［1］郭麗.泮托拉唑鈉腸溶片的非臨床生物等效性分析.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘(電子版),2013,19(21):34-35.

［2］張舒,張昀.HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊的有關(guān)物質(zhì).中國藥師雜志,2015,18(6):943-945.

［3］王婧斯,李桂龍,王成港,等.泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)分析方法的比較.藥物評價研究,2012,35(2):109-112.

［4］陳玉玲.HPLC法測定泮托拉唑鈉腸溶微丸膠囊的含量.科技創(chuàng)新與應(yīng)用,2012,1(上):38.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.05.227

2015-11-03］

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