某規模豬場豬瘟抗體水平的監測與分析

趙永前　左建新　孫華偉等

摘要：為監測分析生產母豬群的豬瘟抗體水平，合理制定豬瘟疫苗免疫方案，對某規模豬場1棟29頭斷奶母豬在豬瘟疫苗免疫前、免疫后30 d的血清樣品進行檢測。結果表明：免疫前、后的抗體陽性率分別為75.9%、93.1%，大部分生產母豬在疫苗免疫30 d后抗體水平有所提升，但仍有6.9%的生產母豬在加強免疫后，抗體水平仍為陰性；對采樣血清進行豬瘟病原檢測，PCR檢測結果表明：加強免疫后抗體為陰性的2份血清為陽性，其余血清全部為陰性。

關鍵詞：豬瘟抗體；免疫；監測

中圖分類號： S858.285文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）11-0299-02

收稿日期：2014-12-09

基金項目：江蘇省農業科技自主創新資金[編號：CX（13）3075]。

作者簡介：趙永前（1973—），男，江蘇東臺人，碩士，副研究員，主要從事動物疫病的診斷和檢測研究及臨床技術服務工作。 E-mail：13951933416@139.com。豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種高度接觸性傳染病[1]。近年來隨著養豬規模的不斷擴大，飼養管理水平的參差不齊，豬瘟在各地的發病率呈上升趨勢，臨床表現以影響繁殖性能和隱形帶毒為主[2]。2014年6月份江蘇省淮安市某存欄300頭生產母豬的規模豬場，種母豬群中有 5%～10% 的豬出現后背毛根有鐵銹色出血點，眼角有膿性分泌物，后肢運動不協調癥狀，疑似非典型豬瘟，遂對其中1棟29頭斷奶母豬進行豬瘟抗體的跟蹤監測及病原檢測，以期對種母豬群的疫苗免疫水平進行評估，結合存在問題提供針對性的防控措施。

1材料與方法

1.1血清樣品

血清采自江蘇省淮安市某存欄300頭生產母豬的規模豬場的29頭斷奶母豬，分3次采集：第1次采集在豬瘟疫苗免疫前1 d通過前腔靜脈采集，血清樣品29份。第2次采集在豬瘟疫苗免疫后30 d通過前腔靜脈采集，血清樣品29份。第3次采集，先對第2次采集中豬瘟抗體陰性豬進行豬瘟疫苗的加強免疫，加強免疫后30 d通過前腔靜脈采集，血清樣品2份；其余27頭豬隨機抽取6頭豬，采集血清樣品6份。全部血清樣品按常規方法凝血處理，并及時送至實驗室進行檢測。

1.2主要試劑及儀器

1.2.1檢測試劑盒豬瘟抗體檢測試劑盒（CSFV Ab）購自美國IDEXX公司；PCR及RT-PCR試劑盒購自北京博邁德生物技術有限公司。

1.2.2主要儀器酶標儀型號為寶特ExL 800，美國寶特公司生產；高速冷凍離心機型號為Centrifuge 5424R，產自德國；各種規格移液器，購自德國Eppendorf公司；恒溫箱水浴鍋等。

1.3檢測方法

1.3.1抗體檢測首先將待檢血清和豬瘟抗體檢測試劑盒恢復至室溫（18～25 ℃），將待檢血清用樣品稀釋液作1 ∶2倍稀釋后加入到ELISA板內，然后嚴格按照試劑盒說明書要求進行孵育和操作。試驗中設2孔陰性血清和2孔陽性血清對照，設定標準為當陰性對照孔的平均D450 nm>0.50、陽性對照孔的阻斷率≥50%，檢測結果方為有效。樣品阻斷率≥40.0%，判為豬瘟抗體陽性，阻斷率≤30.0%判為豬瘟抗體陰性，兩者之間為可疑。

1.3.2抗原檢測將第3次采集的8份血清樣品，應用PCR試劑盒進行RNA和DNA的抽提、擴增并經瓊脂糖電泳，檢測豬瘟病原。

2檢測結果

2.1抗體檢測結果

從表1可以看出：疫苗免疫后30 d，有93.1%的斷奶母豬（27頭）抗體水平均有一定水平的提升，6.9%的斷奶母豬（2頭）在疫苗免疫后抗體為陰性，對這2頭母豬進行疫苗加強免疫后，抗體水平仍為陰性。

2.2抗原檢測結果

第3次采集的血清PCR檢測結果如圖1。圖1表明：疫苗免疫后抗體為陰性的2頭豬抗原檢測為陽性，存在豬瘟野毒的感染；隨機抽取的疫苗免疫后抗體為陽性的6頭豬抗原檢測為陰性。

3分析與討論

根據監測結果可以發現，部分豬瘟抗體陰性母豬即使對其進行疫苗加強免疫，抗體水平仍不能轉陽，通過病原檢測均存在豬瘟野毒感染的現象，這與胡杰等的檢測結果[3]是一致的。因此，豬場在不具備病原檢測的條件下，可通過定期檢測抗體水平來淘汰無抗體反應或抗體反應低下的母豬，從而達到凈化豬群的目的。

種豬的健康狀況是豬場能否持續經營的關健，也是決定豬場生產成本的主要因素，豬瘟抗體水平的高低和抗體均勻度直接反映了豬群免疫系統的健康程度以及飼養管理水平的高低，因此有計劃地開展豬瘟抗體水平的監測對于提高規模化豬場的經濟效益具有重要意義，也是十分必要的管理措施。豬瘟抗體水平監測在規模化豬場有以下幾方面的應用：（1）掌握豬群的免疫狀態。ELISA方法是檢測豬瘟抗體的有效方法，具有高通量、質控高的優點[4]，同時美國IDEXX公司生產的豬瘟抗體檢測試劑盒采用阻斷ELISA模式，所用的單抗針對E2囊膜結構糖蛋白，檢測E2抗體，其抗體與中和抗體具有很好的相關性，是評估豬抵抗力的良好方法[5]。（2）控制入群后備母豬的質量。后備母豬在入群前應進行豬瘟抗體的篩查，對豬瘟抗體不合格的后備豬不予入群，保證入群后備母豬的質量，進而達到控制和凈化種豬群的目的。（3）制定科學合理的免疫程序：通過疫苗免疫后抗體水平的監測，了解母豬群豬瘟抗體的消長規律，制定科學的、個性化的豬瘟免疫程序；通過對仔豬豬瘟母源抗體的監測，分析豬瘟母源抗體的消長曲線，可合理制定仔豬豬瘟疫苗的首免日齡。 通過建立合理、科學的免疫程序，選用高質量的豬瘟疫苗，輔以科學規范的生物安全防控措施，才能確保豬場不發生豬瘟疫情，并逐步實現豬瘟的凈化。

重視豬場疫苗免疫后抗體的監測，需要借助一定的技術平臺和技術手段。目前國內的一些超大規模豬場都建有設備先進的檢測實驗室，可自行進行監測，對檢測結果進行分析應用；但一些中小規模豬場尚沒有相應的實驗室或技術人員，需借助科研院校的實驗室或專業的檢測機構進行檢測監測、疫病咨詢、結果分析，一旦有疫情應及時溝通送診[6-7]。

參考文獻：

[1]甘孟侯，楊漢春. 中國豬病學[M]. 北京：中國農業出版社，2005：440-460.

[2]謝移權，李進鋒. 規模化豬場豬瘟抗體水平監測的應用[J]. 中國畜禽種業，2011（4）：102-104.

[3]胡杰，磨龍春，黃夏，等. 豬瘟間接血凝抗體與豬瘟病毒感染的相關性分析[J]. 中國動物檢疫，2008，25（8）：40-41.

[4]方先珍，胡慧，鄭立運，等. 不同豬瘟抗體檢測技術的應用比較[C]. 中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會.第四次豬病學術研討會論文集.鄭州，2010：311-314.

[5]張險朋，潘杰，溫清萍，等. 豬瘟間接血凝試驗與ELISA試驗結果的相關性探討[J]. 中國畜牧獸醫，2007，34（6）：89-90.

[6]朱學鋒，陸昌華，陳學法，等. 規模化豬場疫病防控的經濟學評估[J]. 江蘇農業學報，2014，30（4）：896-900.

[7]張振東，胡東方，呂傳位，等. 某規模化豬場主要疫病血清抗體檢測結果與分析[J]. 養豬，2014（2）：115-116.李貴蕭，朱宗濤，康燕青，等. 雞大腸桿菌的血清抗性與致病性檢驗[J]. 江蘇農業科學，2015，43（11

：301-303.