三合激素在奶牛乳中的降解規律

盧春霞++劉長彬++唐宗貴等

摘要：研究三合激素在奶牛乳中的降解規律，試驗選擇卵巢靜止的9頭泌乳奶牛，隨機分為2組，5頭為試驗組，注射治療三合激素后，4頭為對照組不注射激素，間隔不同的天數采集每頭牛的乳樣品。分別采用液相色譜-串聯質譜法和氣相色譜-質譜法檢測乳中激素的殘留量。結果表明，14 d后3種激素在奶牛乳中的濃度降至0.5 ng/g 以下，表明奶牛注射三合激素后14 d可降解完全，確定苯甲酸雌二醇的棄奶期為 14 d。

關鍵詞：苯甲酸雌二醇；孕酮；丙酸睪酮；生鮮乳；降解規律

中圖分類號： TS201.2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）11-0378-02

收稿日期：2015-04-22

基金項目：國家科技支撐計劃（編號：2012BAD43B03）。

作者簡介：盧春霞（1978—），女，河南虞城人，博士，副研究員，主要從事食品質量安全研究。E-mail：shzlcx2002@163.com。

通信作者：羅小玲，研究員，主要從事食品質量安全研究。Tel：（0993）6683009；E-mail：LXL62 622@126.com。 三合激素注射液（tristerone injection）為復方制劑，主要成分包括苯甲酸雌二醇1.5 mg/mL、孕酮12.5 mg/mL、丙酸睪丸酮25 mg/mL，在奶牛養殖業中主要用于誘導奶牛發情[1-2]。雌二醇可在動物組織內殘留，通過食物鏈危害人類健康，使女性兒童提前發育，男性兒童乳腺發育呈女性化，男性生殖系統發育異常或引起病變，并導致女性乳腺癌和子宮內膜異位癥發生率上升[3-4]。中華人民共和國農業部公告第235號規定，丙酸睪酮和苯甲酸雌二醇允許作治療用，但不得在動物性食品中檢出，孕酮沒有限制使用，也無限量標準[5]。通過測定丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇和孕酮在牛奶中的殘留，可對藥物安全性作出評價，為休藥期的制定和提高原料乳質量安全水平提供科學依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗動物選擇卵巢發育靜止、正常泌乳的荷斯坦奶牛9頭。

1.1.2試劑與藥品Oasis HLB固相萃取柱（60 mg /3 mL，Waters公司）；丙酮、正己烷（色譜級，美國J. T. Baker公司）；乙腈、甲醇、乙酸乙酯、吡啶、異辛烷（色譜級，德國Merck公司）；甲苯（色譜級，德國CNW公司）；苯甲酸雌二醇、孕酮、丙酸睪酮標準品購自中國國家標準物質中心；三合激素注射液（2 mL/支，寧波第二激素廠生產）。其他試劑均為分析純，試驗用水為超純水。

1.1.3儀器設備Agilent 1200高效液相色譜儀，6460 Triple Quad LC/MS電噴霧串聯四極桿質譜儀（美國Agilent公司）；7000B Triple Quad GC/MS四極桿質譜儀（美國Agilent公司）；MS3 basic渦旋混合器（德國IKA公司）；3-30K高速臺式冷凍離心機（德國SIGMA公司）；R-210旋轉蒸發儀（瑞士步琦公司）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）；優普超純水制造系統（成都超純科技公司）。

1.2方法

1.2.1給藥方法試驗牛頭每頭肌肉注射4支三合激素，注射后1、2、3、5、9、14 d采集牛奶。奶樣置-20 ℃冰箱中保存待測。

1.2.2檢測方法孕酮和丙酸睪酮參照農業部1031 號公告[6]檢測。苯甲酸雌二醇檢測參考GB/T 22967—2008方法[7]稍作修改。

2結果與分析

2.1丙酸睪酮的殘留

從圖1可以看出，5頭試驗牛丙酸睪酮的降解規律基本一致，于注射藥物后2～3 d在體內殘留達到高峰，然后逐漸降解，基本在第9天完全降解。但是每頭牛在不同日期殘留量差異較大，可能與個體差異有關。對照組丙酸睪酮含量基本在1 ng/g以下。

2.2孕酮的殘留

與丙酸睪酮比較，孕酮降解較快（圖2），基本于第5天完全降解，但E牛在第5天的降解呈非規律性。對照組孕酮含量基本為0 ng/g。

2.3苯甲酸雌二醇的殘留

從圖3可以看出，試驗組牛苯甲酸雌二醇的降解規律基本一致，于藥物注射后2～3 d在體內殘留達到高峰，然后逐漸降低，基本在第14天降解完全。對照組苯甲酸雌二醇含量基本在0 ng/mL。

從以上3種激素的體內降解規律來看，在處理后14 d內完全降解，三合激素的安全間隔期為 14 d，與黃凍的研究結果[8]一致。

2.4激素風險因子監測結果

利用以上檢測方法對新疆天山北坡6個規模化牛場的生鮮奶進行監測，每個牛場抽取樣品5份。從圖4可以看出，丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇殘留量較低（<1 ng/g），而孕酮激素殘留量較高，可能與懷孕牛本身產生的孕酮有關。

3結論

采用液相色譜-串聯質譜法和氣相色譜-質譜法研究了三合激素在奶牛乳中的降解規律。結果表明，奶牛注射三合激素后，乳中3種激素在14 d內均可降解完全，確定丙酸睪酮、孕酮、苯甲酸雌二醇的安全間隔期為 14 d。同時對6個規模化牛場生鮮乳進行監測，結果表明，生鮮乳中孕酮激素含量較高，丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇均無殘留。

參考文獻：

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[3]Hügel S，Horn M，Remkes H，et al. Preservation of cardiac function and energy reserve by the angiotensin-converting enzyme inhibitor quinapril during postmyocardial infarction remodeling in the rat[J]. Journal of Cardiovascular Magnetic Resonance，2001，3：215-225.

[4]楊杏芬. 環境雌激素污染與毒效應研究的現狀與展望[J]. 廣東衛生防疫，2001，27（1）：20-24.

[5]中華人民共和國農業部年第235號公告：動物性食品中獸藥最高殘留限量[Z]. 北京：中華人民共和國農業部，2002.

[6]中華人民共和國農業部第1031號公告[Z]. 北京：中華人民共和國農業部，2008.

[7]GB/T 22967—2008牛奶和奶粉中β-雌二醇殘留量的測定氣相色譜-負化學電離質譜法[S].

[8]黃凍. 苯甲酸雌二醇注射液穩定性試驗及其在奶牛體內藥動學和牛奶中殘留試驗[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2009.史娟，李江. 微波輔助消解火焰原子吸收光譜法測定茶葉中的微量元素[J]. 江蘇農業科學，2015，43（11：380-382.