QuEChERS凈化GC/ECD測定蘋果和柑橘中4種常用殺螨劑殘留

徐國鋒，聶繼云，李海飛，閆　震，李　靜

(中國農業科學院果樹研究所，農業部果品質量安全風險評估實驗室(興城)，遼寧　興城　125100)

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QuEChERS凈化GC/ECD測定蘋果和柑橘中4種常用殺螨劑殘留

徐國鋒，聶繼云*，李海飛，閆震，李靜

(中國農業科學院果樹研究所，農業部果品質量安全風險評估實驗室(興城)，遼寧興城125100)

摘要：采用QuEChERS 方法凈化，建立了氣相色譜法/電子捕獲檢測器(GC/ECD) 同時檢測蘋果和柑橘中四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈殘留的分析方法。蘋果和柑橘樣品用乙腈提取，適量C18填料和無水MgSO4凈化提取液，GC/ECD檢測，基質匹配標準溶液外標法定量。四螨嗪、噠螨靈在0.02～2.0 mg/L濃度范圍內，蟲螨腈、溴螨酯在0.004～0.5 mg/L濃度范圍內的線性關系良好，相關系數(r)均大于0.99，定量下限(LOQs)為0.001～0.02 mg/kg。蘋果和柑橘樣品中4種殺螨劑的平均加標回收率(n=6)為76.4%～111.8%，相對標準偏差(RSDs) 不超過13.4%。該方法簡便、快速，能夠滿足蘋果和柑橘中上述4種殺螨劑殘留同時檢測的需要。采用該方法測定了4種殺螨劑在蘋果和柑橘中的殘留量，結果滿意。

關鍵詞：QuEChERS;GC/ECD；蘋果；柑橘；殺螨劑；殘留分析

在我國危害嚴重的農業害螨約有40余種[1]，主要為葉螨類、癭螨類等。農業害螨具有體積小、繁殖快、代數多、適應性強以及易產生抗藥性等特點，是公認的最難防治的有害生物群落。植食性螨類是危害我國蘋果和柑橘的主要害蟲之一，使用殺螨劑是防治螨類危害的主要手段，而四螨嗪、噠螨靈、溴螨酯和蟲螨腈是目前蘋果和柑橘上使用較為普遍的殺螨劑，其檢測方法有氣相色譜法(GC)[2]、高效液相色譜法(HPLC)[3]、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)[4-5]、氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)[6-7]和高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MS)[8-9]。與GC-MS、LC-MS相比，GC/ECD具有儀器價格低、對技術人員要求不高等特點，因此，GC/ECD法具有更大的使用空間和普遍的推廣應用價值。國內外尚未見QuEChERS結合氣相色譜法(GC)同時檢測蘋果和柑橘中四螨嗪、噠螨靈、溴螨酯和蟲螨腈殘留的分析方法。本文采用QuEChERS法對蘋果、柑橘基質進行凈化，GC/ECD檢測，建立了蘋果和柑橘中 4 種殺螨劑殘留快速簡便、省時可靠的分析方法。

1實驗部分1.1儀器與試劑

島津GC2010氣相色譜儀，配ECD檢測器；PL-602L電子天平(感量0.01 g 和0.000 1 g，美國梅特勒-托利多公司);Vortex-genie 2 渦旋振蕩器(美國Scientific Industries 公司)；CF16RXⅡ立式大容量高速離心機(日本 Hitachi公司)。

四螨嗪、噠螨靈、溴螨酯和蟲螨腈標準品(質量濃度為100 mg/L，國家標準物質中心的有證標準物質)；丙酮、乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、三鍵鍵合硅膠C18(C18)、石墨化炭黑(GCB)均為40～60 μm(天津博納艾杰爾科技有限公司)；弗羅里硅土(Florisil)、中性氧化鋁(Al-N)、硅膠(Silica gel)均為40～60 μm(美國Agilent Technologies公司)；氯化鈉、無水硫酸鎂(優級純，天津市科密歐化學試劑有限公司)。

1.2實驗方法

1.2.1色譜條件色譜柱：Rtx-1 石英毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm) ；柱溫程序：初始溫度 60 ℃，以6 ℃/min升至150 ℃，再以10 ℃/min升至250 ℃，保持10 min；進樣口溫度：260 ℃；不分流進樣；進樣量：1 μL；檢測器溫度：320 ℃；載氣：氮氣(99.999%)；流速：1.0 mL/min；尾吹氣：30 mL/min。

1.2.2標準溶液的配制與標準曲線以質量濃度均為100 mg/L 的四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈標準品作為標準儲備液，于-20 ℃下保存。

取4種殺螨劑的標準儲備液，用乙腈和空白樣品提取液分別稀釋成7個不同濃度的混合標準溶液和基質匹配混合標準溶液，其中四螨嗪和噠螨靈的濃度為2.0，1.0，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02 mg/L，蟲螨腈和溴螨酯的濃度為0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01，0.004 mg/L。每個濃度用GC/ECD 進樣測定3次，以質量濃度為橫坐標(x,mg/L),對應峰面積平均值為縱坐標(y),獲得4種殺螨劑的溶劑標準曲線、基質標準曲線與相關系數。

1.2.3樣品的提取與凈化稱取粉碎均勻的水果樣品10.0 g(精確至0.1 g)于100 mL 聚四氟乙烯管中，加入10 mL乙腈溶液與2.0 g氯化鈉，劇烈振蕩2 min，5 000 r/min 低溫(4 ℃)高速離心5 min，移取上清液2 mL加至裝有100 mg C18和300 mg無水MgSO4的10 mL 塑料離心管中，2 500 r/min渦旋混合2 min，5 000 r/min 低溫(4 ℃)高速離心3 min，過 0.22 μm有機相濾膜，轉移至GC進樣瓶進樣測定，基質匹配外標法定量。

1.2.4加標回收率與精密度分別稱取經測定不含四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈的空白水果樣品10.0 g，四螨嗪和噠螨靈添加1.0，0.1，0.05 mg/kg，蟲螨腈和溴螨酯添加0.2，0.02，0.01 mg/kg濃度水平的 4 種殺螨劑混合標準溶液，渦旋混勻后，放置過夜以便更接近于實際樣品農藥的殘留情況，然后按照“1.2.3”方法進行提取、凈化，每個加標水平重復6次；同時將處理后的空白樣品溶液加入相應濃度的混合標準溶液定容，作為基質標準溶液，進樣測定，計算得到加標回收率、相對標準偏差與定量下限。

圖1　不同凈化填料對乙腈中4種殺螨劑的回收率Fig.1　Recoveries of four acaricides in acetonitrile after adsorbed by different kinds of adsorbents

2結果與討論

2.1分散吸附劑的選擇

本研究選用GCB,PSA,C18,Florisil,Silica gel,Al-N等6種凈化填料來考察不同凈化填料對4種殺螨劑的吸附作用，以乙腈為介質配制100 μg/L的混標溶液15 mL，取2 mL混標溶液分別加入裝有200 mg不同吸附劑粉末的離心管中，2 500 r/min渦混2 min，5 000 r/min 低溫(4 ℃)高速離心3 min，過0.22 μm有機相濾膜，裝樣品瓶中，每組6個平行樣(n=6)，回收率結果見圖1。由圖1可知，GCB 對四螨嗪的吸附性最強，回收率只有7.1%，對噠螨靈和溴螨酯也有一定的吸附性，回收率為62.5%和37.9%，對蟲螨腈無吸附性，回收率為97.5%；PSA對四螨嗪具有吸附性，回收率為64.6%，對蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈無吸附性，回收率為99.7%～100.2%；Florisil對四螨嗪和溴螨酯具有一定的吸附性，回收率分別為81.7%和77.1%，對蟲螨腈和噠螨靈無吸附性，回收率分別為101.1%和100.1%；Silica gel對四螨嗪有一定的吸附性，回收率為83.2%，對蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈無吸附性，回收率介于96.9%～102.5%之間；Al-N對溴螨酯具有吸附性，回收率為60.4%，對四螨嗪、蟲螨腈和噠螨靈無吸附性，回收率介于96.0%～103.0%之間；C18對四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈均無吸附性，回收率為95.5%～100.4%。為保證分散吸附劑能夠對提取液進行有效地凈化，同時又能保證檢測方法的準確性，本研究最終采用C18結合無水MgSO4對提取液進行凈化。

圖2　蘋果基質中兩種不同提取溶劑回收率比較Fig.2　Comparison of recoveries using two different solvent extraction methods in applematrix

圖3　柑橘基質中兩種不同提取溶劑的回收率比較Fig.3　Comparison of recoveries using two different solvent extraction methods in citrus matrix

2.2提取溶劑的選擇

以蘋果和柑橘為基質，對比研究了乙腈提取、無水硫酸鎂及氯化鈉鹽析；以及1%乙酸乙腈提取、無水硫酸鎂及乙酸鈉鹽析兩種QuEChERS前處理方法的提取效果，結果見圖2～3。研究顯示，采用乙腈提取、無水硫酸鎂及氯化鈉鹽析的QuEChERS前處理方法，蘋果的回收率為95.7%～106.8%，柑橘中為94.4%～106.7%；采用1%乙酸乙腈提取、無水硫酸鎂及乙酸鈉鹽析的QuEChERS前處理方法，蘋果中回收率為87.9%～93.1%，柑橘中為85.5%～101.6%。兩種提取方式均能取得良好的提取效果，本著簡便、易操作的原則，本文采用加乙腈的QuEChERS提取方法。

2.3基質效應

按“1.2.3”方法進行前處理，配制濃度分別為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 mg/kg的純溶劑標準溶液和基質匹配標準溶液，通過測定目標物在純溶劑中的平均響應值(A，n=6)和基質匹配標準溶液的平均響應值(B，n=6),得到基質效應(Matrix effect，ME)，ME=B/A×100%[10-11]。若ME大于115% 則具有基質增強效應，ME小于85%則具有基質抑制效應，ME介于85%～115%之間，則無基質效應。結果表明，蘋果基質中四螨嗪的ME在86.8%～94.2%之間，無基質效應；蟲螨腈在低濃度時表現為基質增強效應，濃度為0.05 mg/kg時，ME為228.1%，隨著濃度的增加，基質效應逐漸減弱，濃度達到0.5 mg/kg以上時，不表現基質效應；溴螨酯和噠螨靈均表現為基質增強效應，隨著濃度的增加，基質效應逐漸減弱，溴螨酯的ME由529.1%下降到244.4%，噠螨靈的ME由321.3%下降到159.9%。柑橘基質中四螨嗪的ME在128.7%～111.6%之間，低濃度時為基質增強效應，隨著濃度的增加，基質效應逐漸消除；蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈均為基質增強效應，隨著濃度的增加基質增強效應逐漸減弱，蟲螨腈的ME由243.1%下降到137.2%，溴螨酯的ME由636.8%下降到274.2%，噠螨靈的ME由471.3%下降到194.9%。 研究結果顯示，不同殺螨劑在同一基質中具有不同的基質效應，同一殺螨劑在不同的基質中也具有不同的基質效應，同時基質效應與濃度具有一定的關系，隨著濃度的變化，基質效應也有一定的變化，本文研究的 4 種殺螨劑隨著檢測濃度的增加，基質效應逐漸減弱。應用基質標準曲線校準能夠減小基質效應對檢測結果的影響。

2.4標準曲線、相關系數、加標回收率、精密度與定量下限

取配制好的四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈系列基質標準溶液分別進行GC/ECD進樣測定，4種農藥的保留時間分別為：四螨嗪9.04 min，蟲螨腈24.92 min，溴螨酯27.42 min，噠螨靈30.98 min。結果表明，不同基質中，四螨嗪和噠螨靈在0.02～2.0 mg·L-1，蟲螨腈和溴螨酯在0.004～0.5 mg·L-1范圍內線性關系良好，相關系數(r)均大于0.99。由于基質效應隨著濃度的變化而不同，為保證檢測結果的科學準確，當實際樣品殘留量超過此線性范圍時，應對樣品溶液進行適當稀釋后再進行定量測定。本實驗以10倍信噪比(S/N=10)進行計算，得各待測物的方法定量下限(LOQ)為0.001～0.02 mg/kg(見表1)。

按“1.2.4”方法進行加標回收率實驗，每個加標水平重復6次，基質外標法定量，計算平均回收率與相對標準偏差(RSD)。由表1可知，4種殺螨劑的平均回收率為76.4%～111.8%，RSD(n=6)為2.1%～13.4%，圖4為空白樣品和加標樣品的色譜圖。

表1　4 種殺螨劑的線性方程、相關系數、加標回收率、相對標準偏差及定量下限

2.5實際樣品的測定

采用本文所建立的方法對市售10個蘋果樣品和10個柑橘樣品進行檢測，在1個蘋果樣品中檢出0.067 mg/kg噠螨靈，其余19個樣品均未檢出上述4種殺螨劑殘留。

3結論

本文將QuEChERS凈化方法與GC/ECD結合應用于蘋果和柑橘中四螨嗪、蟲螨腈、溴螨酯和噠螨靈4種殺螨劑的同時檢測，并成功應用于實際樣品的測定。方法簡便快速，能夠滿足我國[12]、歐盟[13]和CAC[14]對殘留限量的要求，且符合農藥殘留分析從繁瑣的傳統方法向快速、簡便方法發展的趨勢，具有一定的實際應用價值。

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Residue Analysis of Four Acaricides in Apple and Citrus by GC/ECD after QuEChERS Clean-upXU Guo-feng,NIE Ji-yun*,LI Hai-fei,YAN Zhen,LI Jing

(Research Institute of Pomology,Chinese Academy of Agricultural Sciences;China Laboratory of Quality & Safety

Risk Assessment for Fruit(Xingcheng),Ministry of Agriculture,Xingcheng125100,China)

Abstract：A GC/ECD method was developed and validated for the simultaneous analysis of clofentezine,bromopropylate,chlorfenapyr,and pyridaben residues in apple and citrus.The apple and citrus samples were extracted with acetonitrile,and purified by QuEChERS method using C18and MgSO4as adsorbents,then determined by GC/ECD and quantified by the matrix-matched standards solution.The result showed that the calibration curves were linear in the ranges of 0.02-2.0 mg/L for clofentezine and pyridaben,and 0.004-0.5 mg/L for bromopropylate and chlorfenapyr,with correlation coefficients more than 0.99.The limits of quantitation(LOQs) for four acaricides were between 0.001 mg/kg and 0.02 mg/kg.The average recoveries(n=6) of the four analytes in apple and citrus at three spiked levels were between 76.4% and 111.8% with RSDs not more than 13.4%.This method is simple,rapid,effective and safe,and could meet the requirements for the simultaneous determination of clofentezine,bromopropylate,chlorfenapyr and pyridaben residues in apple and citrus samples．

Key words：QuEChERS;GC/ECD;apple;citrus;acaricide;residue analysis

中圖分類號：O657.71；S482.5

文獻標識碼：A

文章編號：1004-4957(2015)12-1387-05

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2015.12.010

通訊作者：*聶繼云,博士,研究員,研究方向：果品質量安全,Tel:0429-3598178,E-mail:jiyunnie@163.com

基金項目：國家農產品質量安全風險評估計劃(GJFP2014002，GJFP2015002)；中國農業科學院科技創新工程

收稿日期：2015-07-07；修回日期：2015-08-10