艾灸足三里穴對衰老大鼠學習記憶及抗疲勞能力的影響

譚　杏　楊茜蕓　林亞平

(湖南中醫藥大學針灸推拿學院，湖南　長沙　410208)

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艾灸足三里穴對衰老大鼠學習記憶及抗疲勞能力的影響

譚杏1楊茜蕓林亞平

(湖南中醫藥大學針灸推拿學院，湖南長沙410208)

摘要〔〕目的觀察艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠學習記憶及抗疲勞能力的影響。方法健康青年雄性SD大鼠36只，按完全隨機設計分為3組：空白對照組、衰老模型組、艾灸組，每組各12只。模型組及艾灸組大鼠按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射10%D-半乳糖，連續6 w，每天1次，空白對照組每天注射等量的生理鹽水；艾灸組造模后每穴每天灸5壯，每次25 min左右，隔天1次，共治療15次，空白對照組及衰老模型組大鼠捆綁固定25 min，隔天1次，共15次。采用Morris水迷宮實驗檢測各組大鼠的學習記憶能力，動物跑臺實驗檢測各組大鼠的抗疲勞能力。結果造模后，衰老模型組及艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前明顯延長(P<0.01)；實際跑步時間較造模前明顯減少(P<0.01)、電擊次數顯著增加(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異(P<0.01)。艾灸治療后，艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前顯著縮短(P<0.05)、實際跑步時間較造模前明顯增加(P<0.05)、電擊次數顯著減少(P<0.05)；與衰老模型組比較有明顯差異(P<0.01)。結論艾灸足三里穴能夠明顯改善衰老大鼠的學習記憶及抗疲勞能力。

關鍵詞〔〕艾灸；足三里穴；D-半乳糖；學習記憶；抗疲勞能力

1湖南中醫藥大學研究生院

第一作者：譚杏(1986-)，女，碩士，助教，主要從事針灸治病的臨床與實驗研究。

衰老是隨著年齡增長到成熟期后所出現的生理性退化。對于衰老研究有助于進一步延續生命，增加壽限，提高生活質量，認識生命本質。衰老是生命進程中必然的客觀規律，學習記憶和抗疲勞能力的減退是衰老的重要標志之一，在衰老進程中出現較早且明顯〔1〕。因此改善學習記憶及抗疲勞能力是延緩衰老的一個重要環節。本實驗采用D-半乳糖致衰老大鼠模型，以衰老大鼠的一般狀況、學習記憶及抗疲勞能力為效應指標，觀察艾灸足三里穴延緩衰老的作用。

1材料與方法

1.1實驗動物健康清潔級雄性SD大鼠36只，體重250 g左右，由湖南中醫藥大學實驗動物中心提供。飼養于12 h光照/12 h黑暗的環境下，自由攝食和飲水，標準大鼠顆粒飼料喂養，室溫控制在23℃～27℃，濕度保持在75%左右。

1.2藥品及試劑施灸材料為蘇州東方艾絨廠生產的“神灸300灸”艾炷(型號：東方一型),直徑0.5 cm，高0.8 cm。D-半乳糖由美國Sigma公司生產，用生理鹽水配成10%的濃度。

1.3主要儀器Morris水迷宮，BI2000圖像分析系統(成都泰盟公司產品)。動物跑臺(上海欣軟信息科技有限公司產品)。

1.4動物分組及D-半乳糖致衰老大鼠模型的建立〔2〕健康清潔級SD雄性大鼠36只，適應性飼養1 w后，將大鼠編號、稱重，隨機分為空白對照組、衰老模型組、艾灸組，每組12只。空白對照組大鼠按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射0.9%的生理鹽水，連續6 w，每天一次；衰老模型組按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射10%的D-半乳糖，連續6 w，每天1次。

1.5選穴及處理方法穴位定位根據《實驗針灸學》中“動物針灸穴位圖譜”所定〔3〕，“足三里”在膝關節下方，腓骨小頭下3 mm處的肌溝中。艾灸組用鼠板將大鼠仰臥位捆綁固定，剪去穴區毛發，將艾炷貼附于穴位處，用線香從上將其點燃，燃盡后更換1壯，每穴5壯，每次25 min左右，隔天1次，共治療15次。空白對照組、衰老模型組大鼠捆綁固定25 min，隔天1次，共15次。

1.6觀測指標及實驗步驟

1.6.1一般狀況觀察觀察大鼠的精神狀態、皮毛色澤，掉毛情況，行為活動，飲食情況、大小便等，并在實驗過程中每周測1次體重，觀察體重的變化。

1.6.2Morris水迷宮法學習記憶能力測試Morris水迷宮圓形水池：為一圓形鐵皮水桶，直徑100 cm，高50～60 cm，水深30～40 cm，其中內置1個直徑9 cm圓形平臺，藏匿于2 cm的水面之下，水池內部不得有任何標記。水中適量加入二氧化鈦，使其成為不透明的乳白色。在圓桶的上緣等距離地設置東、南、西、北4個標記點，作為動物進水池的入水點，這4個入水點在水面和水桶底部的投影點，將水面和水桶部分均等的分為4個象限。按實驗要求，可任意將平臺設置于某一象限的中間，水溫保持在23℃～25℃。先對動物進行學習訓練5 d，訓練時，將大鼠面向池壁從4個入水點分別放入池中，記錄大鼠從入水到找到水下隱藏平臺并站立于其上所需要的時間，作為潛伏期，用(s)表示，大鼠找到平臺后，讓其在平臺上站立10 s，若入水后120 s大鼠未能找到平臺，則將其輕輕從水中拖上平臺，并停留10 s，然后進行下一次訓練。每只大鼠從四個入水點分別放入水池中為一次訓練，兩次訓練相隔30 s。每次訓練完成后，迅速將動物洗凈擦干，置于加熱器旁，以防動物低體溫。于造模前、造模后、治療后每只大鼠訓練3 d，每天測量4次，取其平均值〔4〕。

1.6.3動物跑臺法抗疲勞能力測試跑臺有三個跑道主體，中間有兩個隔離板將其隔開，跑道長度為580 mm，寬度為85 mm，高度為120 mm，電刺激量為0.8～4.2 mA，刺激電壓100 V范圍內，跑道速度可調范圍0～40 m/min，跑臺傾角±35°范圍可調，實驗結果可通過與之相連的熱敏打印機打印出來。大鼠按順序編號，動物跑臺的每個通道分別放入一只大鼠，時間設置為5 min(300 s)，速度為30 m/min，電刺激為4.2 mA。觀察大鼠運動速度、測試時間、刺激次數、運行距離，以了解大鼠抗疲勞能力。于動物給藥前、給藥后、治療后各測1次。

1.7統計學方法符合正態分布和方差齊性者，行配對t檢驗及方差分析，不符合正態分布者采用秩和檢驗，全部數據用SPSS17.0軟件。

2結果

2.1艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠一般狀態及體重的影響空白對照組大鼠毛色白且光澤，無掉毛現象，精神狀態佳，活動自如，反應靈敏，飲食正常，尿液和糞便色形正常；衰老模型組大鼠個體大，毛色枯黃卷曲，掉毛現象嚴重，光澤度欠佳，精神不振，活動減少，反應遲鈍，飲食不佳，大便溏浠臭穢，小便次數多騷臭；艾灸組大鼠的精神狀態明顯改善，行動相對靈活，毛發較潤澤，食欲、大小便情況均有所改善。與空白對照組比，衰老模型組大鼠體重增長明顯緩慢(P<0.05)，艾灸足三里穴后，衰老大鼠體重顯著增長，差異無統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠學習記憶能力的影響造模后，衰老模型組及艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前明顯延長(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異(P<0.01)。治療后，艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前顯著縮短(P<0.05)；與衰老模型組比較有明顯差異(P<0.05)。見表2。

表1各組大鼠體重變化(g,n=12)

組別1w2w3w4w5w6w7w8w9w10w空白對照組233.75250.21275.58306.41335.21351.15366.78374.53391.41421.58衰老模型組240.581)275.181)272.041)260.921)270.081)279.461)289.31)294.411)298.671)308.421)艾灸組240.552)265.582)286.922)314.162)338.732)351.262)367.652)374.422)382.772)416.762)

與空白對照組比較：1)P<0.05，與衰老模型組比較：2)P<0.05

組別潛伏時間(s)造模前造模后治療后探索總路程(cm)造模前造模后治療后空白對照組47.89±29.5042.65±39.3742.01±18.71515.70±172.56391.81±155.40340.21±128.37衰老模型組46.56±15.6198.13±30.53)113.75±21.81)3)526.70±88.252885.0±105.203)3190.90±355.701)3)艾灸組44.29±16.6379.72±38.053)32.24±7.671)2)4)600.18±56.471867.30±90.543)641.83±53.821)2)3)

與造模前比較：1)P<0.01；與治療后比較：2)P<0.05;與空白對照組比較：3)P<0.05；與衰老模型組比較：4)P<0.05,5)P<0.01，下表同

2.3艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠抗疲勞能力的影響造模后，衰老模型組及艾灸組實際跑步時間較造模前明顯減少，差異有統計學意義(P<0.01)，電擊次數顯著增加，差異有統計學意義(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異，差異有統計學意義(P<0.01)。治療后，艾灸組實際跑步時間較造模后明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05)，電擊次數顯著減少，差異有統計學意義(P<0.05)；艾灸組大鼠實際跑步時間較衰老模型組明顯延長、電擊次數明顯減少(P<0.01)。見表3。

組別實際跑步時間(s)造模前造模后治療后電擊次數(次)造模前造模后治療后空白對照組286.08±9.56262.08±36.49251.00±33.166.00±6.628.20±6.6210.20±3.76衰老模型組297.92±2.4385.75±41.631)3)25.42±24.113)6.50±2.8327.80±11.011)3)36.40±7.573)艾灸組294.00±7.67102.00±39.581)2)3)251.92±32.085)7.10±3.0730.90±12.961)2)3)10.20±2.975)

3討論

中醫對于延緩衰老的研究及實踐有著悠久的歷史，早在《素問·上古天真論》中就有關于衰老的精辟論述，“上古之人，其知道者，法于陰陽，和于術數，食飲有節，起居有常，不妄作勞，故能形與神俱，而盡終其天年，度百歲乃去”。灸療法是傳統醫學中針灸學重要組成部分，具有溫通氣血、扶病祛邪和防病保健等功效。《醫學帛書》中就提出“灸則強食產肉”。《扁鵲心書》提出：“保命之法，灼灸第一.人于無病時常灸關元、氣海、命門、中脘.雖未得長生，亦可保百余年壽矣”。《類經圖翼》：“神闕行隔鹽灸，艾灸至三五百壯，不惟疾愈，亦且延年”。可見抗衰老的艾灸療法在傳統中醫理論實踐中具有悠久歷史，古代醫家認為艾灸不僅可以益壽延年，還可無病先防，有病早治。現代研究也表明，艾灸具有鎮痛、改善血循環、調整代謝紊亂、調節免疫功能、調整臟腑功能、抗感染等作用〔5〕。足三里穴是多氣多血足陽明胃經之合穴,為氣血百川歸海之穴,有調脾胃、養氣血、扶正壯陽之功,為中醫傳統的強壯保健要穴。通過在具有保健功效作用的足三里穴上施灸，逐漸積累灸效，以達到防病保健的目的。常灸之能溫中散寒、宣通氣機、延年益壽〔6,7〕。《針灸真髓》日：“灸三里可使之氣不衰，故稱長壽之灸”。《外臺秘要》曰：“三里養后天之氣，灸三里可使元氣不衰。”《資生經》云：“若要安,丹田三里不曾干”。“三里灸” 自古為歷代醫家所推崇，且在延緩衰老及保健防病方面的作用更是得到了國際公認〔8〕。現代研究表明，王淑娟等〔9〕艾灸關元、足三里穴可以提高不同月齡大鼠的學習及記憶能力；韋良玉等〔10〕艾炷灸、電針能夠改善D-半乳糖衰老小鼠學習記憶能力。

學習是指接受外界環境的信息而影響自身行為的過程；而記憶是指對獲得的信息在腦內進行儲存、加工和提取的過程。腦為元神之腑，為精髓匯聚之處，具有統領全身的作用。而學習、記憶是腦的高級神經活動，既是認知活動的組成部分，也是重要的智力因素〔11,12〕。《靈樞·海論》說：“髓海有余，則輕勁多力，自過其度；髓海不足，則腦轉耳鳴，脛酸眩冒，目無所見，懈怠安臥”。現代研究證實衰老首先從大腦開始，繼而遍及全身各組織器官。疲勞是機體復雜的生理生化變化所體現的綜合反應。機體在代謝過程中，如果自由基產生過多或清除速度減慢，都會對組織細胞造成損傷，使運動耐力下降，最終產生體力疲勞〔13〕。

學習記憶力及抗疲勞能力下降是衰老重要標志之一,本實驗提示其學習和記憶的獲得與鞏固過程提高；在動物跑臺實驗中，艾灸組大鼠的實際跑步時間長于衰老模型組、電擊次數顯著少于衰老模型組，提示其抗疲勞能力提高。

總之，艾灸足三里穴可以明顯改善D-半乳糖致衰老模型大鼠的一般狀況、學習記憶力及抗疲勞能力，能在一定程度上延緩衰老，為臨床延緩衰老、防治老年疾病選穴及治療方法提供理論依據。

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〔2014-02-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

通訊作者：林亞平(1956-)，女，教授，博士生導師，主要從事針灸治病的臨床與實驗研究。

基金項目：湖南省中醫藥管理局課題(No.201132)

中圖分類號〔〕R749〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-6976-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.005