加味當(dāng)歸補(bǔ)血方對(duì)環(huán)磷酰胺模型小鼠免疫功能的影響

楊忠光

(遵義市中醫(yī)院，貴州　遵義　563000)

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加味當(dāng)歸補(bǔ)血方對(duì)環(huán)磷酰胺模型小鼠免疫功能的影響

楊忠光

(遵義市中醫(yī)院，貴州遵義563000)

摘要〔〕目的研究加味當(dāng)歸補(bǔ)血方對(duì)環(huán)磷酰胺(CTX)模型小鼠免疫功能的影響。方法選擇昆明小白鼠36只，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、治療組，對(duì)照組給予0.5 ml/d生理鹽水灌服，模型組給予CTX 80 mg/kg腹腔注射；治療組給予CTX腹腔注射時(shí)，同時(shí)給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯灌服。檢測(cè)血常規(guī)指標(biāo)、免疫球蛋白含量以及T淋巴細(xì)胞亞群含量。結(jié)果(1)模型組小鼠血液中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM含量以及T淋巴細(xì)胞亞群Th1、Th17細(xì)胞比例均低于對(duì)照組，Th2、Treg細(xì)胞比例高于對(duì)照組(P<0.05)；(2)治療組小鼠血液中WBC、RBC、Hb、IgA、IgG、IgM含量以及Th1、Th17細(xì)胞比例均高于模型組，Th2、Treg細(xì)胞比例低于模型組(P<0.05)。結(jié)論加味當(dāng)歸補(bǔ)血方能夠提高CTX免疫抑制小鼠模型的體液免疫功能和細(xì)胞免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕環(huán)磷酰胺；加味當(dāng)歸補(bǔ)血方；免疫功能；免疫球蛋白

第一作者：楊忠光(1962-)，男，主要從事中醫(yī)腫瘤臨床及科研工作。

手術(shù)切除、放化療等均是臨床處理惡性腫瘤的常用方法。環(huán)磷酰胺(CTX)是臨床上用于治療惡性腫瘤的化療藥物，是一類非特異性的烷化劑，對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均具有殺傷作用〔1〕。在諸多毒副反應(yīng)中，免疫功能抑制是CTX最突出的毒副反應(yīng)之一，如何改善CTX所致免疫功能抑制一直是臨床研究的熱點(diǎn)〔2〕。當(dāng)歸補(bǔ)血湯主要由當(dāng)歸、黃芪組成，為補(bǔ)氣益血方劑之一，對(duì)正常小鼠免疫功能有一定的促進(jìn)作用〔3〕。本文擬分析加味當(dāng)歸補(bǔ)血方對(duì)CTX模型小鼠免疫功能的影響。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象和材料昆明小白鼠36只，雌雄各半，體重18～24 g，隨機(jī)分成對(duì)照組、模型組、治療組各12只。CTX購(gòu)買于山西普德藥業(yè)有限公司；加味當(dāng)歸補(bǔ)血方取相應(yīng)顆粒藥物，用蒸餾水制成0.1 g/ml的混懸液并用于灌胃。

1.2模型制作和給藥方法對(duì)照組：給予0.5 ml/d生理鹽水灌服，連續(xù)10 d；模型組：給予CTX 80 mg/kg腹腔注射，1次/3 d；治療組：給予CTX腹腔注射(方法同模型組)，同時(shí)給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯灌服，連續(xù)10 d。

1.3免疫功能評(píng)價(jià)方法采集外周血，采用血常規(guī)檢測(cè)儀檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)以及血紅蛋白(Hb)含量；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)免疫球蛋白(Ig)A、IgG以及IgM含量；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞比例。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0軟件行方差分析或t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1血常規(guī)指標(biāo)模型組小鼠血液中WBC、RBC、Hb含量均低于對(duì)照組，治療組均高于模型組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2體液免疫指標(biāo)模型組小鼠血液中IgA、IgG以及IgM含量均低于對(duì)照組(P<0.05)，治療組均高于模型組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3細(xì)胞免疫指標(biāo)模型組小鼠血液中Th1、Th17細(xì)胞含量低于對(duì)照組，Th2、Treg細(xì)胞含量高于對(duì)照組；治療組Th1、Th17細(xì)胞含量高于模型組，Th2、Treg細(xì)胞含量低于模型組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

組別WBC(×109/L)RBC(×1012/L)Hb(g/L)對(duì)照組6.82±0.829.12±1.02138.95±17.61模型組4.14±0.551)5.57±0.671)101.34±13.461)治療組5.69±0.601)2)8.08±0.921)2)122.19±15.521)2)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

組別IgAIgGIgM對(duì)照組10.34±1.521.83±0.21145.62±18.82模型組4.18±0.551)0.73±0.091)68.76±9.491)治療組7.95±0.981)2)1.41±0.171)2)103.41±15.621)2)

組別Th1Th2Th17CD4+CD25+Treg對(duì)照組28.91±3.4210.98±1.521.89±0.2410.77±1.26模型組20.52±2.731)17.43±2.271)0.87±0.091)18.51±2.351)治療組24.59±2.911)13.45±1.981)1.31±0.171)14.45±1.891)

3討論

免疫功能抑制是CTX治療過(guò)程中最常見(jiàn)的不良反應(yīng)，會(huì)影響化療效果并增加腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸的風(fēng)險(xiǎn)〔4〕。加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯的藥物成分包括黃芪、當(dāng)歸、靈芝、阿膠、川芎等。其中，黃芪是該方劑的君藥，其藥理作用為增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的功能、提高機(jī)體免疫力〔5〕；當(dāng)歸為臣藥，其藥理作用為改善微循環(huán)、減輕局部炎癥反應(yīng)〔6〕；阿膠、靈芝、川芎等為佐藥和使藥，能夠增強(qiáng)骨髓造血功能、促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、提高機(jī)體免疫功能〔7〕。

血液循環(huán)中RBC和WBC對(duì)于機(jī)體免疫功能的維持具有重要作用。RBC和WBC能夠識(shí)別和遞呈抗原并發(fā)揮抗原清除的作用；此外，還能調(diào)控免疫功能相關(guān)細(xì)胞因子〔8〕。本研究結(jié)果與計(jì)小清等〔9〕研究報(bào)道基本一致，說(shuō)明CTX注射后模型小鼠發(fā)生了免疫功能抑制，而在給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯后免疫功能得到了改善。

機(jī)體免疫功能由體液免疫和細(xì)胞免疫兩部分組成。免疫球蛋白是完成體液免疫的重要分子，血清中免疫球蛋白IgA、IgG以及IgM含量可以準(zhǔn)確反映體液免疫水平〔6〕。本文結(jié)果提示CTX注射后模型小鼠發(fā)生了體液免疫功能的損傷，而在給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯后體液免疫功能得到了提高。

T淋巴細(xì)胞參與機(jī)體的細(xì)胞免疫過(guò)程，其中CD4+T淋巴細(xì)胞對(duì)細(xì)胞免疫的完成具有尤為重要的價(jià)值。根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)志物以及細(xì)胞功能的不同，CD4+T淋巴細(xì)胞包括輔助性T細(xì)胞(Th)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)〔10〕。Th1和Th2細(xì)胞是最早被認(rèn)識(shí)的Th細(xì)胞，前者能夠分泌免疫促進(jìn)因子并增強(qiáng)免疫功能，后者能夠分泌免疫抑制因子并抑制免疫功能〔11〕。Th17和Treg是新發(fā)現(xiàn)的一對(duì)免疫細(xì)胞，前者能夠分泌IL-17并增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，輔助完成腫瘤細(xì)胞的殺傷；Treg細(xì)胞表面的標(biāo)志分子是CD4+CD25+，具有抑制T細(xì)胞分化、成熟的作用，是一類免疫抑制細(xì)胞〔12，13〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CTX注射后模型小鼠發(fā)生了細(xì)胞免疫功能的損傷，而在給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯后細(xì)胞免疫功能得到了提高。

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〔2015-03-19修回〕

(編輯李相軍)

中圖分類號(hào)〔〕R28〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)24-7020-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.024