26例智力低下老年人染色體脆性位點的檢查

慕明濤　霍滿鵬　張　靜　劉俊俊　蒲力群

(延安大學醫學院醫學遺傳學與細胞生物學教研室，陜西　延安　716000)

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26例智力低下老年人染色體脆性位點的檢查

慕明濤霍滿鵬張靜劉俊俊蒲力群

(延安大學醫學院醫學遺傳學與細胞生物學教研室，陜西延安716000)

摘要〔〕目的探討應用染色體技術和脆性位點檢查診斷老年人智力低下(MR)病因的意義。方法應用外周血淋巴細胞染色體標本制備，G顯帶，鏡下核型分析、熒光原位雜交(FISH)檢測和染色體脆性位點表達研究。結果26例受檢者中檢出異常核型9例，檢出率為34.62%。實驗組染色體脆性位點的發生率為56.97%，對照組為19.47%，兩組相比差異極顯著(P<0.01)。FISH確證1例染色體核型為46,XY,t(Y;15)(q12;p11)。結論染色體異常是導致MR發生的重要遺傳學原因之一，MR與染色體畸變和脆性部位表達率有一定的相關性。

關鍵詞〔〕智力低下；染色體技術；脆性位點

第一作者：慕明濤(1977-)，男，碩士，講師，主要從事醫學遺傳學研究。

智力低下(MR)是一類中樞神經系統發育障礙疾病，往往伴有一些其他臨床癥狀，病因涉及多種因素，其中染色體異常是導致該病發生的重要原因之一。目前有報道中國14歲以下的智力殘疾者大約有540萬，占殘疾兒童總數的2/3〔1〕。已有研究發現，正常老年人脆性位點與染色體畸變密切相關〔2〕，但MR老年人脆性位點與染色體異常間的關系未見報道。脆性位點可能引起染色體基因組的不穩定，其機制仍無定論，不同學者對它們的研究結論也不盡一致。應用染色體技術結合手熒光原位雜交(FISH)探討MR老年人染色體異常與脆性位點及其關系。

1資料與方法

1.1對象經延安市縣級以上醫院診斷為MR老年人患者26例，男19例，女7例，年齡56～72歲，正常對照年輕人30例，男15例，女15例，年齡30～35歲，與患者居住在同一地區。

1.2智力測定方法MR分級根據美國精神學會和世界衛生組織所頒布的標準(DSM-1、ICD-8)。MR的嚴重程度根據IQ值進行分級：輕度(IQ 55～70)、中度(IQ 40～54)、重度(IQ 25～39)、極重度(IQ<25)。此項檢測由醫院醫師進行。

1.3染色體核型分析制備外周血淋巴細胞染色體標本，G顯帶處理。鏡檢30個分散適宜的顯帶分裂相。對異常者增加計數至50個細胞。

1.4脆性位點檢查取經肝素處理的外周血2 ml于含低葉酸的TC199培養基(青島海博生物技術有限公司產品)中常規培養，制備染色體標本。每份標本觀察50個分散和形態較好的中期分裂相脆性位點。染色體脆性位點計算：裂隙、單斷、雙斷計1個脆裂點，易位染色體和環狀染色體計2個脆裂點。

1.5FISH檢測FISH的中期染色體玻片標本不顯帶，雜交前-20℃冰箱保存備用。兩種探針為Yp11.1-q11.1區CEPY(DYZ3 Spectrum Red)探針和Yq12區CEPY(DYZ1 Spectrum Green)探針(大連寶生物科技公司產品)，按試劑盒說明操作進行。BX61-32FDIC-S08型熒光顯微鏡(Olympus產品)下觀察。如果僅在非Y染色體的端部有綠色信號則判斷為Y染色體末端易位。

1.6統計學分析應用SPSS11.0軟件進行χ2檢驗。

2結果

2.1MR類型MR輕度12例、中度6例、重度8例。伴發癥狀主要表現為言語障礙9例，運動障礙3例，癲癇10例，不自主運動4例。

2.2染色體異常類型及其檢出率對26例患者染色體檢查，結果發現異常染色體核型9例，異常檢出率34.62%，高于文獻〔2〕報道。正常對照組染色體異常率為3.33%(1/30)，兩者間差異極顯著(χ2=9.571,P=0.002)。其中21-三體型6例，異常率為23.08%，占總異常核型的66.67%；性染色體異常2例，檢出率為7.69%，占總異常核型22.22%；常染色體異常7例，檢出率為26.92%，占總異常核型77.78%。21-三體發生率明顯偏高，是引起MR的主要的異常染色體類型。異常核型及其發生率見表1。

表126例智力低下患者染色體異常核型及其發生率(n=26)

分類異常核型n發生率(%)占總異常率(%)單純21三體型47,XY,+2147,XX,+21217.693.8522.2211.11易位型46,XY,-14,+rob(14;21)46,XX,-15,+t(15;21)46,XY,t(Y;15)?1213.857.693.8511.1122.2211.11性染色體嵌合型45,XO/46,XX13.8511.11其他46,XY,inv(9)13.8511.11

2.3FISH結果染色體檢查發現1例疑似46,XY,t(Y;15)？核型，用FISH重新檢測，發現只有15號染色體末端出現綠色信號，確定異常核型為46,XY,t(Y;15)(q12;p11)。這是非常罕見的Y染色體與常染色體易位的異常核型(見圖1、2)。說明FISH可對染色體序列片段的細微變化進行高特異性檢測〔3〕。

2.4兩組染色體脆性位點頻率26例實驗組統計細胞總數為2 300個，染色體斷型、裂β單細胞數為1 310，脆裂頻率為56.97%，和30例對照組統計細胞總數為1 500個，染色體斷裂、裂隙細胞數為292個，脆裂頻率為19.47%，兩者間差異極顯著(χ2=6.613,P=0.008)。

圖1　中期FISH圖(×1 000)

圖2　46,XY,t(Y;15)核型圖(×400)

3討論

染色體異常是引起MR最常見的原因之一，在我國MR者中染色體異常占8.0%～20.0%〔4〕。本文結果說明染色體異常可能是引起老年人MR的一個原因。21-三體是一種常見的染色體異常疾病，其發生率明顯偏高(高于文獻報道的10%〔5〕)，是引起MR的主要類型，其主要表現出MR、特殊面容等癥狀。嵌合體是受精卵在卵裂時染色體不分離造成的。Y染色體與15號染色體發生罕見的結構重排，斷裂的位點在Y染色體長臂的結構異染色質區(Yq12)。Nielsen等〔6〕認為，Y和15號染色體的不平衡易位攜帶者都具有正常的表型，這可能是基于男性減數分裂時Yq結構異染色質和15p序列的同源性造成的。本實驗中的1例患者表現為MR。用FISH技術可以確定異常核型為46,XY,t(Y;15)(q12;p11)。這是非常罕見的Y染色體與常染色體易位的異常核型。這種異染色質的改變使DNA序列遺傳信息表達失衡，可能導致認知記憶能力的降低〔7〕。另本文1例inv(9)患者表現MR癥狀。一般認為9號染色體在斷裂重接的過程中發生了微缺失，從而引起基因異常所致〔8,9〕。

脆性位點導致缺失、易位而出現染色體畸變和基因組不穩定，進而引起異常配子的發生，但其機制仍無定論。黃莉等〔10〕報道由于染色體上的某一基因CGG/CCG重復數目大量增加，改變其排列順序，有發生DNA甲基化的傾向；也發現帶有脆性位點的染色體DNA含量會發生減少，提示脆性部位的產生是由于DNA逐漸凝縮形成中期染色體過程中改變了超螺旋結構，使DNA的復制受到抑制，基因表達受阻，此時表現為脆性位點的表達，造成個體的MR。有研究認為吸煙可能通過DNA的改變而增加患老年性癡呆的可能〔11〕。

本文提示脆性位點頻率隨著個體年齡的增加而增大，進而使染色體穩定性下降，易引起染色體的異常，從而誘發個體的MR。在細胞分裂時，遺傳型脆性位點可使生殖細胞染色體發生重排或斷裂，進而導致個體MR〔12,13〕。由此可推測脆性位點頻率增大可能是導致老年人MR的一個重要的遺傳學原因。

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13Kolialexi A,Maviou A,Tsenghi C,etal.Chromosome fragility and predisposition to childhood malignancies〔J〕.Anticancer Res,1998;18(4):2359.

〔2014-06-02修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

基金項目：延安市科學技術研究發展計劃項目(2013-KW31)；延安大學自然科學研究計劃項目(YD2011-04)

中圖分類號〔〕R394.2〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)23-6858-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.097