骨髓增生異常綜合征患者骨髓血管新生及與臨床特征的關系

曾俊權

(井岡山大學附屬醫院血液內科，江西　吉安　343000)

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骨髓增生異常綜合征患者骨髓血管新生及與臨床特征的關系

曾俊權

(井岡山大學附屬醫院血液內科，江西吉安343000)

〔摘要〕目的探討骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓血管新生及與臨床特征的相關性。方法收集2008年5月至2014年5月該院收治的78例MDS患者以及39例急性非淋巴細胞白血病(ANLL)患者，并于同期隨機抽取80例健康體檢者作為對照組，采用免疫組織化學法分別對三組的骨髓活檢標本進行染色并計數微血管數，同時分析其與臨床特征的相關性。結果MDS組、ANLL組以及對照組的骨髓微血管計數經秩和檢驗，差異有統計學意義(P<0.05)，MDS組骨髓微血管計數高于對照組而低于ANLL組。MDS低危組骨髓微血管計數低于高危組(P<0.05)。MDS患者骨髓微血管計數與性別、年齡、外周血中的白細胞、血小板以及血紅蛋白含量無明顯相關性(P>0.05)，與骨髓涂片中的原始細胞百分比有正相關性(r=0.386，P<0.05)。結論MDS患者骨髓中出現不同程度的血管新生，且骨髓原始細胞百分比越高，血管新生數量越多，對臨床治療MDS具有一定的指導意義。

〔關鍵詞〕骨髓增生異常綜合征；血管新生；微血管數

第一作者：曾俊權(1981-)，男，主治醫師，講師，主要從事惡性血液系統疾病發表機制的基礎及臨床方面的研究。

血管新生可能參與了腫瘤的發生及發展過程，如在骨髓瘤、淋巴瘤以及急性白血病等患者的骨髓中存在不同程度的血管新生〔1〕。骨髓增生異常綜合征(MDS)起源于造血肝細胞，是一組造血系統異質性克隆增殖性疾病，隨著疾病的演變可能發展為急性白血病，嚴重威脅患者的健康〔2〕。關于MDS的發病機制，目前還未有定論。本研究擬從血管新生是否存在于MDS患者骨髓中這一問題出發，初步探討MDS的發生機制。

1資料與方法

1.1一般資料收集2008年5月至2014年5月我院血液科收治的MDS患者和急性非淋巴細胞白血病(ANLL)患者的骨髓活檢標本，納入標準：①符合MDS診斷標準〔3〕；②不合并其他可能影響本研究結果的血液系統疾病，如淋巴細胞白血病等；③符合醫學倫理學要求；④患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書。其中MDS組78例，根據1997年WHO標準〔4〕分為低危組和高危組，其中低危組51例，男33例，女18例；中位年齡53歲(21～72歲)；難治性貧血45例，環狀鐵粒幼細胞增多性難治性貧血6例。高危組27例，男21例，女6例；中位年齡56歲(19～78歲)；27例全部為原始細胞增多性難治性貧血患者。ANLL組患者39例，男27例，女12例；中位年齡45歲(20～76歲)；M0 5例，M1 8例，M2a 7例，M2b 9例，M3b 6例，M5b 4例。同期隨機抽取80例健康體檢供髓者作為對照組，男52例，女28例；中位年齡47歲(19～68歲)。

1.2試劑來源兔抗人凝血因子Ⅷ相關抗原(vWF)的多克隆抗體(上海基因有限公司)，EnVision免疫組化試劑盒(上海記憶有限公司)，正常的山羊血清(北京中山生物技術公司)，多聚賴氨酸膠(Sigma公司)，3,3-二氨基聯苯胺(Aangon公司)。

1.3標本制作及免疫組化染色在無菌條件下收集骨髓組織活檢標本，Bouin固定、脫鈣，石蠟包埋，切成厚度為4 μm的切片，貼在多聚賴氨酸膠處理過的載玻片上，免疫組織化學法進行染色，具體操作按照試劑盒上的說明進行。免疫組化染色陽性的血管瘤切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)液代替一抗染色的患者骨髓標本作為陰性對照。

1.4微血管的判斷標準以微血管計數代表血管新生，微血管的判斷標準〔5〕：被vWF抗體標記過染色為棕黃色的內皮細胞或者內皮細胞團，當它和周圍微血管、幼稚細胞以及其他的骨髓連接組織成分分離清除，則計數為一根微血管。在光學顯微鏡低倍鏡(×100)下對骨髓全片進行掃視后，在高倍鏡(×400)視野下對骨髓微血管數量進行連續計數，并將其計算為平均值，以微血管數/×400視野表達。同時兩位相對較專業的人員在雙盲情況下對骨髓微血管數量分別計數，最后取兩人的計數平均值作為最終骨髓切片的微血管數量。

1.5統計學方法應用SPSS19.0軟件多組獨立樣本的比較采用非參數的Mann-Whitney比較，兩兩比較采用Krusal-Wallis法，相關性分析采用Spearman秩相關。

2結果

2.1MDS患者的骨髓微血管形態通過vWF標記的內皮細胞在光學顯微鏡下呈棕褐色(光鏡下，×400)：(1)MDS患者的骨髓標本中可以發現不同大小腔隙或者無腔隙的微血管；(2)ANLL患者的骨髓標本中有較多的微血管，腔隙較小甚至無腔隙；(3)對照組的骨髓標本中幾乎很少出現微血管。

2.2各組骨髓微血管計數的比較MDS組、ANLL組以及對照組的骨髓微血管計數經秩和檢驗，差異有統計學意義(P<0.05)。MDS低危組骨髓微血管計數低于高危組(P<0.05)。見表1。

表1　各組骨髓微血管計數(只/×400視野)

與ANLL組、對照組比較：1)P<0.05，與低危組比較：2)P<0.05

2.3MDS患者骨髓微血管計數與臨床特征的相關性分析MDS患者骨髓微血管計數與性別、年齡、外周血中的白細胞、血小板以及血紅蛋白含量無明顯相關性(P>0.05)，與骨髓涂片中的原始細胞百分比呈正相關(r=0.386，P<0.05)。

3討論

MDS是臨床血液科常見的血液系統疾病，是起源于造血干細胞的獲得性克隆性疾病，主要特征為造血干細胞出現異常克隆，造血功能發生紊亂而出現無效造血，同時伴有不同程度的外周血造血細胞減少以及血細胞分化障礙等〔6〕。因此，一旦發生MDS，將對患者的健康和生命質量造成嚴重影響。目前臨床常采用誘導分化或者造血干細胞移植等治療MDS，但是結果卻不甚理想，仍然有部分MDS患者由于治療無效而惡化為急性白血病〔7〕。新生血管是指從已經存在的血管中再芽生出新的毛細血管，Kizaki〔8〕研究證實成人急性髓細胞白血病患者骨髓微血管密度高于正常人，并且當患者獲得完全緩解后骨髓微血管增生程度與對照組近似，提示白血病的發病機制可能與血管新生存在某種聯系，從而使新生血管給進入血液循環中的腫瘤提供營養供應。智亞芹等〔9〕采用Ⅷ因子相關抗原對MDS患者的骨髓活檢標本進行標記，發現MDS患者的微血管密度高于正常對照組。Savic等〔10〕也發現MDS患者的骨髓微血管密度高于正常對照組。那么可以試想，MDS患者的骨髓中是否確實存在血管新生的可能，它是否參與了MDS的病理發生過程，目前該問題已經引起了相關研究人員的極大關注。

本研究結果顯示，采用因子Ⅷ相關抗原標記內皮細胞是檢測骨髓微血管最有效的方法之一〔11〕，并且MDS患者存在血管新生，隨著病情加重，血管新生的數量呈逐漸增加的趨勢，與有關研究〔12〕結果一致。Vaughn等〔13〕研究證實骨髓微血管密度和骨髓中的原始細胞的比例呈正相關，本研究也得到相似結果，提示血管新生在MDS發病機制中具有重要的作用。

4參考文獻

1馬薇,陳信義,張雅月,等.11例惡性腫瘤繼發性骨髓增生異常綜合征病例分析〔J〕.現代生物醫學進展,2014;14(9):1671-5,1632.

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8Kizaki M.Myelodysplastic syndromes(MDS)〔J〕.Nihon Rinsho,2014;72(6):1079-86.

9智亞芹，張翼鷟，趙海豐，等.骨髓增生異常綜合征中基質細胞衍生因子1與血管新生及細胞凋亡的相關性研究〔J〕.中國實驗血液學雜志，2011;19(6):1438-42.

10Savic A,Cemerikic-Martinovic V,Dovat S,etal.Angiogenesis and survival in patients with myelodysplastic syndrome〔J〕.Pathol Oncol Res,2012;18(3):681-90.

11Zhang L,Padron E,Lancet J.The molecular basis and clinical significance of genetic mutations identified in myelodysplastic syndromes〔J〕.Leuk Res,2015;39(1):6-17.

12Bennett JM.Morphological classification of the myelodysplastic syndromes:how much more education of diagnosticians is necessary〔J〕.Haematologica,2013;98(4):490-1.

13Vaughn JE,Scott BL,Deeg HJ.Transplantation for myelodysplastic syndromes 2013〔J〕.Curr Opin Hematol,2013;20(6):494-500.

〔2014-11-15修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R551.3

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015)22-6526-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.102