紫杉醇生產(chǎn)現(xiàn)狀的分析與對(duì)策△

張歡，趙赟鑫，高文，鄧百萬(wàn)

(1.漢中市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，陜西 漢中 723000；2.漢中植物研究所，陜西 漢中 723000；3.陜西省食藥用菌工程技術(shù)研究中心，陜西 漢中 723000；4.陜西理工學(xué)院 生物科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 漢中 723000)

紫杉醇生產(chǎn)現(xiàn)狀的分析與對(duì)策△

張歡1，趙赟鑫2*，高文2，3，鄧百萬(wàn)3，4

(1.漢中市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，陜西 漢中723000；2.漢中植物研究所，陜西 漢中723000；3.陜西省食藥用菌工程技術(shù)研究中心，陜西 漢中723000；4.陜西理工學(xué)院 生物科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 漢中723000)

本文綜述了目前生產(chǎn)紫杉醇的6種主要途徑，通過(guò)分析各途徑的特點(diǎn)，提出了利用內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇有望解決市場(chǎng)上供不應(yīng)求、價(jià)格昂貴的現(xiàn)狀，且對(duì)于研究植物來(lái)源的天然藥物新生產(chǎn)途徑的開(kāi)發(fā)及瀕危藥用植物的保護(hù)，具有十分重要的意義。

紅豆杉；紫杉醇；內(nèi)生真菌

紅豆杉為紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬TaxusL.植物，在全世界有11種，分布于北半球的溫帶至亞熱帶地區(qū)[1]。中國(guó)有4種1變種，分別是紅豆杉T.chinensisRehd.、東北紅豆杉T.cuspidataSieb.et Zucc.、云南紅豆杉T.yunnanensisChang et L.K.Fu、南方紅豆杉T.chinensisvar.maireiChang et L.K.Fu、西藏紅豆杉T.wallichianaZucc.[2]。紅豆杉資源分布于我國(guó)各地，如華中、華東、華南、西南、東北、西北、西藏等地，但較集中的產(chǎn)區(qū)為東北、西南及華南地區(qū)。

美國(guó)化學(xué)家Wani MC和Wall首次從太平洋紫杉(短葉紅豆杉T.brevifoliaNutt.)中分離出紫杉醇(Taxol)，并于1971年發(fā)表其化學(xué)結(jié)構(gòu)[3]；Schiff 等[4]證實(shí)紫杉醇具備獨(dú)特的抗癌機(jī)制；80年代美國(guó)和歐洲的科學(xué)家相繼研究出紫杉醇的抗癌療效[5]。

紫杉醇為白色結(jié)晶粉末，不溶于水，易溶于三氯甲烷、丙酮等有機(jī)溶劑，是由113個(gè)原子組成的三環(huán)二萜類(lèi)化合物，分子式為C47H51NO14，相對(duì)分子量為853.92，熔點(diǎn)為213～216 ℃[6]。

由于紫杉醇在紅豆杉中含量甚微，結(jié)構(gòu)異常復(fù)雜，近年來(lái)研究紫杉醇的新來(lái)源成為世界性的熱點(diǎn)。我國(guó)在紅豆杉產(chǎn)紫杉醇的研究領(lǐng)域內(nèi)已經(jīng)取得了多項(xiàng)成果，但與世界先進(jìn)國(guó)家相比還存在一定的差距，有待深入研究。目前，紫杉醇主要從以下幾個(gè)方面來(lái)獲得。

1 直接從紅豆杉提取

目前，紫杉醇主要從紅豆杉的樹(shù)皮中進(jìn)行提取，通過(guò)建立大量的栽培基地、培育和引進(jìn)新品種來(lái)擴(kuò)大紅豆杉原料量。在國(guó)內(nèi)除了栽培地方品種外，還引進(jìn)曼地亞紅豆杉及其他培育的新品種。近年來(lái)，很多地區(qū)開(kāi)展了紅豆杉扦插育苗技術(shù)的試驗(yàn)研究，并且已經(jīng)獲得了成功。中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所于四川省茂縣建立了大規(guī)模的中國(guó)紅豆杉扦插育苗基地；云南林業(yè)部門(mén)與漢德公司合作，建立了826.7畝的云南紅豆杉林，進(jìn)行紅豆杉的人工資源培育，苗木年產(chǎn)量達(dá)100萬(wàn)株以上；黑龍江省已經(jīng)建成了數(shù)量超過(guò)552萬(wàn)株、栽培總面積達(dá)到4萬(wàn)畝的紅豆杉人工林[7]。

然而，紅豆杉資源依然非常缺乏，而且紫杉醇在紅豆杉不同部位的含量均很低。植物樹(shù)皮中紫杉醇的含量?jī)H有0.01%，每提取1kg的紫杉醇就需要砍剝1000～2000棵樹(shù)的樹(shù)皮，但自從紫杉醇正式運(yùn)用于臨床后，每年約需200kg以上。據(jù)估計(jì)，為治療一位卵巢癌患者，需消耗6棵樹(shù)齡在60年以上的紅豆杉大樹(shù)。當(dāng)前，全球每年消耗200kg紫杉醇，這就意味著需要砍伐100萬(wàn)棵紅豆杉大樹(shù)。隨著紫杉醇應(yīng)用范圍的不斷延伸，其需求量必然還會(huì)逐年上升，但是紅豆杉樹(shù)生長(zhǎng)速度是相當(dāng)緩慢的，直徑20cm的樹(shù)就需生長(zhǎng)約100年[7]。因此，直接從紅豆杉提取紫杉醇的途徑不僅無(wú)法滿足人們對(duì)紫杉醇的大量需求，而且還會(huì)嚴(yán)重破壞紅豆杉的長(zhǎng)期生存與分布。

2 化學(xué)半合成及全合成

2.1化學(xué)半合成

所謂半合成，是指從可再生的紅豆杉樹(shù)皮以及枝葉中，提取紫杉烷二萜類(lèi)成分，其本身并無(wú)活性，以此為前體來(lái)合成紫杉醇。Denis等[8]首次研究報(bào)道了紫杉醇的半合成。紫杉醇半合成的主要前體是BaccatinⅢ與10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatinⅢ，10-DAB)。10-DAB在某些紅豆杉品種的樹(shù)皮以及枝葉中的含量是紫杉醇含量的3倍以上，以10-DAB作為合成的前體或起始物，從合成側(cè)鏈開(kāi)始到紫杉醇的合成僅需約10個(gè)步驟。

目前，生化半合成法是國(guó)際制藥公司普遍采用的生產(chǎn)技術(shù)[9-10]。C13位側(cè)鏈中間體與BaccatinⅢ 可以獨(dú)立合成，并且水溶性較好，能夠穩(wěn)定存在。可利用生物酶類(lèi)處理紅豆杉原料，使BaccatinⅢ與C13位側(cè)鏈中間體得到一定程度的富集，然后提取這些較易溶解的前體，最后將這些前體采用化學(xué)法或酶法合成為紫杉醇成品[11]。

紫杉醇半合成能在一定程度上改善紫杉醇供應(yīng)短缺的情況，并且還可以使紫杉醇的側(cè)鏈產(chǎn)生更大的可變性，有利于獲得更高活性的紫杉醇衍生物[12]。但是，半合成法與直接從紅豆杉的樹(shù)皮中獲取紫杉醇的方法并無(wú)本質(zhì)上的區(qū)別，依然需要大量的半合成前體物質(zhì)，依然需要消耗大量有機(jī)試劑和紅豆杉樹(shù)木，這些都制約了半合成法的推廣。

2.2化學(xué)全合成

化學(xué)全合成是解決紫杉醇來(lái)源的理想途徑，國(guó)內(nèi)外有機(jī)合成化學(xué)家面臨著全合成紫杉醇這一結(jié)構(gòu)復(fù)雜的天然化學(xué)成分的巨大挑戰(zhàn)。1993年，全世界從事此項(xiàng)工作的實(shí)驗(yàn)室就有50多個(gè)。1994年，由美國(guó)Holton研究組首先在實(shí)驗(yàn)室里成功地實(shí)現(xiàn)了化學(xué)法全合成紫杉醇。迄今為止，報(bào)道的紫杉醇全合成路線有三條：Holton路線[13]、Nicolaou路線[14]、Danishefsky路線[15]。

但是，由于紫杉醇有較多的手性基團(tuán)，合成步驟多達(dá)20～25步，合成路線十分復(fù)雜，全合成難度較大，而且花費(fèi)成本高，產(chǎn)率卻很低，至今也沒(méi)有在工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用。

3 植物細(xì)胞離體培養(yǎng)法

利用植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)法生產(chǎn)紫杉醇已經(jīng)成為當(dāng)前紫杉醇藥源開(kāi)發(fā)的研究熱點(diǎn)之一，這也是得到美國(guó)國(guó)家癌癥研究所(NCI)投資的方向之一。國(guó)內(nèi)外進(jìn)行愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)研究的紅豆杉種及其變種超過(guò)10種，其中絕大部分都已證實(shí)可產(chǎn)生紫杉醇，選作誘導(dǎo)愈傷組織的外植體有根、莖、葉、樹(shù)皮、形成層、假種皮、種子胚、幼苗胚軸、雌配子體等。

Christen首次采用紅豆杉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫杉醇[16]。1992年，在NCI主持的第二次紫杉醇研討會(huì)上，ESCAgenetics公司宣布采用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法所得紫杉醇的含量是樹(shù)皮的2至5倍；梅興國(guó)等[17]研究了在兩相培養(yǎng)的系統(tǒng)中紅豆杉細(xì)胞的代謝與生長(zhǎng)規(guī)律，其紫杉醇含量是30.19mg·L-1；甘煩遠(yuǎn)等[18]研究發(fā)現(xiàn)云南紅豆杉細(xì)胞在發(fā)酵罐中的生長(zhǎng)速率達(dá)到了12g·L-1，紫杉醇產(chǎn)量是成年紅豆杉樹(shù)皮中含量的12倍。

細(xì)胞離體培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇的方法可完全擺脫對(duì)紅豆杉的依賴，也擺脫了氣候等環(huán)境因素的影響。而且細(xì)胞培養(yǎng)體系可方便地控制細(xì)胞的微環(huán)境，通過(guò)向培養(yǎng)基中添加抑制劑、誘導(dǎo)子和前體物質(zhì)，能顯著促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)合成紫杉醇。但是該方法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵問(wèn)題難以突破，植物細(xì)胞之間的不一致性、細(xì)胞生理與遺傳的不穩(wěn)定性導(dǎo)致在工業(yè)化培養(yǎng)過(guò)程中，高產(chǎn)細(xì)胞系不易實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)率，而且易發(fā)生變異而產(chǎn)生其他代謝產(chǎn)物。除此之外，植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)較復(fù)雜，對(duì)反應(yīng)器的要求比較高，在一定程度上阻礙了利用細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)紫杉醇。

4 基因工程

1994年，Han等[19]首次證明了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化可用于紅豆杉細(xì)胞，Plaut-Carcasson使紅豆杉被發(fā)根農(nóng)桿菌浸染后得到了發(fā)狀根，再通過(guò)發(fā)狀根培養(yǎng)獲得了轉(zhuǎn)基因植株，從而為目的基因轉(zhuǎn)入紅豆杉細(xì)胞奠定了良好的基礎(chǔ)。

同時(shí)，通過(guò)了解紫杉醇生物合成途徑及其催化酶的活性，特別是催化限速步驟的關(guān)鍵酶以及這些酶的編碼基因，在分子水平對(duì)該途徑實(shí)施人工操縱。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)紫杉醇生物合成的限速酶是紫杉二烯合成酶，而且紫杉二烯合成酶的基因分離和克隆已經(jīng)成功。同時(shí)還分離了多種與紫杉醇合成代謝有關(guān)的酶類(lèi)，并獲得其cDNA克隆。這不僅進(jìn)一步證明了合成紫杉醇的多個(gè)催化反應(yīng)步驟，而且可以從分子水平對(duì)紫杉醇生物合成途徑實(shí)施人工操縱，為提高紫杉醇合成量奠定基礎(chǔ)[20]。王偉等[21]通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增同源探針，篩選cDNA文庫(kù)，克隆了一個(gè)編碼紅豆杉(T.chinensisRehd.)的紫杉烯合酶3’端2151bp的cDNA片段，該酶與太平洋紅豆杉的紫杉烯合酶有97%的同源性，所表達(dá)的融合蛋白以包含體的形式存在，利用組氨酸(His)殘基親和凝膠柱層析得到了融合的紫杉烯合酶，能夠催化產(chǎn)生4(5)，11(12)-紫杉烯。

由于紫杉醇合成的詳細(xì)步驟還不是十分的清楚，而且可能還由多個(gè)基因參與紫杉醇的合成，因此還需要更深入地研究紅豆杉基因工程。

5 微生物轉(zhuǎn)化法

微生物轉(zhuǎn)化就是將與紫杉醇結(jié)構(gòu)類(lèi)似的一些紫杉烷類(lèi)化合物，通過(guò)利用生物酶類(lèi)的高度選擇性轉(zhuǎn)化成為紫杉醇的半合成前體，從而顯著提高資源的利用率，并且簡(jiǎn)化了分離過(guò)程，提供一個(gè)解決紫杉醇來(lái)源問(wèn)題的方法與思路。生物轉(zhuǎn)化的反應(yīng)類(lèi)型主要包括[22]：環(huán)氧化反應(yīng)、酰化反應(yīng)、羥基化、重排、水解等。影響生物轉(zhuǎn)化的因素主要有：底物的結(jié)構(gòu)、底物的加入時(shí)間、加入底物的濃度、加入底物的方法以及培養(yǎng)基的pH等。

Zhang等[10]在云南紅豆杉的樹(shù)皮中分離純化得到了80多株內(nèi)生真菌，發(fā)現(xiàn)其中有3株具備轉(zhuǎn)化為天然紫杉烷類(lèi)化合物的能力。毛霉(Mucorsp.)和Microsphaeropsisonychiuri可使7位羥基差象異構(gòu)化，并且水解10-deacetyl-7-epitaxol的13位側(cè)鏈；而鏈格孢(Alternariaalternata)則可水解1β-hydroxy-baccatinⅠ的不同位置。此實(shí)驗(yàn)為微生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)紫杉醇提供了重要依據(jù)。

利用紫杉醇類(lèi)似物之間的基因修飾獲得更高活性的新化合物，應(yīng)用領(lǐng)域十分廣闊。目前，大部分生物轉(zhuǎn)化工作還只是停滯在新反應(yīng)的篩選和發(fā)現(xiàn)上，還未能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，因此需要更加深入地進(jìn)行重要反應(yīng)的研究。

6 微生物發(fā)酵法

1993年，美國(guó)化學(xué)家Stierle等[23]首次從短葉紅豆杉Taxusbrevifolia的韌皮部分離獲得了一種新的內(nèi)生真菌Taxomycesandreanae，在半合成培養(yǎng)液中產(chǎn)生紫杉醇和紫杉烷類(lèi)化合物。雖然此菌產(chǎn)紫杉醇含量很低，僅24～50ng·L-1，但說(shuō)明了有些內(nèi)生真菌能夠合成與宿主植物相同或相似的活性成分。

隨后，各國(guó)學(xué)者都圍繞產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌來(lái)開(kāi)展分離工作。Strobel等[24]從西藏紅豆杉(T.wallachiana)中分離得到一株產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌，即小孢擬盤(pán)多毛孢(Pestalotiopsismicrospora)，這種內(nèi)生真菌的發(fā)酵液產(chǎn)紫杉醇的含量可達(dá)到50μg·L-1。之后又分離獲得尼泊爾盤(pán)端鹿角菌Seimatoantleriumnepalense，其真菌發(fā)酵液產(chǎn)紫杉醇的含量為62～80ng·L-1[25]。

目前，除了在紅豆杉屬植物中分離得到產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌的研究有報(bào)道外，在一些非紅豆杉屬植物中也分離獲得了產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌。Li等[26]從禿柏(Taxodiumdistichum)的樹(shù)皮、木質(zhì)部和韌皮部中分離得到了產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌Pestalotiopsismicrospora，這些研究進(jìn)一步地?cái)U(kuò)大了篩選產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的范圍。

我國(guó)學(xué)者也在積極開(kāi)展分離篩選產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的研究。邱德友等[27]從云南紅豆杉(T.yunnanensis)樹(shù)皮中分離獲得一種內(nèi)生真菌YFI。采用薄層色譜(TLC)分析檢測(cè)，結(jié)果表明，其可以產(chǎn)生紫杉醇，但是紫杉醇的產(chǎn)量很低。馬天有等[28]從中國(guó)紅豆杉樹(shù)皮中分離獲得一株內(nèi)生真菌，其能夠產(chǎn)生紫杉醇，產(chǎn)量是14.2μg·L-1。王偉等[29]從南方紅豆杉(T.chinensisvarmairei)的主干和側(cè)枝的樹(shù)皮及韌皮部中分離獲得了91株內(nèi)生菌，其中有6株能產(chǎn)生紫杉烷類(lèi)化合物，經(jīng)鑒定分別屬于輪柄梳霉屬M(fèi)artensiomycesspp.、頭孢霉屬Cephalosporiumspp.和無(wú)孢菌群Myceliasterlia。我課題組從秦巴山區(qū)野生紅豆杉中分離獲得了109株內(nèi)生真菌。經(jīng)過(guò)純化獲得了82株內(nèi)生真菌。采用UV、HPLC和HPLC-MS檢測(cè)方法，對(duì)82株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液中代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，并通過(guò)形態(tài)學(xué)特性研究和內(nèi)源轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列分析鑒定物種。結(jié)果表明，有8株內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)紫杉醇，其中有1株高產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌LB-10，鑒定該菌株為綠僵菌Metarhiziumanisopliae，其紫杉醇含量為846.1μg·L-1[30]。

7 對(duì)策建議

7.1微生物發(fā)酵法的優(yōu)勢(shì)

筆者認(rèn)為利用植物內(nèi)生真菌作為藥源是不會(huì)枯竭的，從可持續(xù)發(fā)展的角度來(lái)看，微生物發(fā)酵法具有以下6個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1)只需要采用一般的培養(yǎng)技術(shù)就能夠培養(yǎng)微生物，采用的培養(yǎng)基配方簡(jiǎn)單；2)內(nèi)生真菌生長(zhǎng)速率高，易于縮短生產(chǎn)周期，易于分離和培養(yǎng)；3)微生物選育和育種速度明顯高于植物細(xì)胞培養(yǎng)，易于通過(guò)誘變育種、基因工程等方法篩選高產(chǎn)菌株，從而提高紫杉醇的含量；4)微生物的培養(yǎng)與發(fā)酵條件相對(duì)比較容易掌握和控制，易于通過(guò)改進(jìn)相關(guān)技術(shù)工藝、改善培養(yǎng)條件來(lái)提高產(chǎn)量；5)微生物作為工業(yè)生產(chǎn)的來(lái)源，通過(guò)在發(fā)酵罐中培養(yǎng)，可不斷地進(jìn)行目的代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)；6)微生物發(fā)酵法易于擴(kuò)大化，實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高，有利于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

因此，利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)紫杉醇有望解決市場(chǎng)上價(jià)格昂貴、供不應(yīng)求的現(xiàn)狀，并且對(duì)于研究植物來(lái)源的天然藥物新生產(chǎn)途徑以及對(duì)瀕危藥用植物的保護(hù)，具有十分重要的意義。

7.2微生物發(fā)酵法存在的問(wèn)題及對(duì)策

近幾年來(lái)，紅豆杉產(chǎn)紫杉醇的研究進(jìn)展很快，國(guó)內(nèi)外利用內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇的研究報(bào)道逐漸增多。目前內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇的含量普遍偏低，國(guó)內(nèi)外學(xué)者也正在不斷探索能夠提高內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇產(chǎn)量的途徑。筆者認(rèn)為主要存在兩個(gè)方面的問(wèn)題：一是缺乏高產(chǎn)、穩(wěn)定的適于發(fā)酵的工業(yè)菌株；二是發(fā)酵條件的不合理，限制了單位發(fā)酵液中紫杉醇的含量。

為了篩選高產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌并提高其產(chǎn)量，可以從以下幾個(gè)方面入手：首先，以從自然界中獲得高產(chǎn)菌株為目的，從野生紅豆杉中分離篩選高產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌，并對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測(cè)；其次，利用誘變育種和基因工程技術(shù)對(duì)菌種進(jìn)行改良，從而選育出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的菌株來(lái)提高紫杉醇的產(chǎn)量；第三，對(duì)已獲得高產(chǎn)紫杉醇菌株的培養(yǎng)基組成和配比進(jìn)行研究，優(yōu)化碳源、氮源、微量元素的組成、濃度及其配比，同時(shí)篩選最佳的溫度、pH值、接種量等發(fā)酵條件，這些能夠在一定程度上提高紫杉醇的產(chǎn)量；最后，研究添加前體物質(zhì)、誘導(dǎo)子和代謝抑制劑對(duì)真菌發(fā)酵合成紫杉醇的影響，篩選出對(duì)紫杉醇合成具有正效應(yīng)的調(diào)節(jié)因子，確定其最適添加時(shí)間、濃度和配比，為工業(yè)化大生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

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AnalysisandCountermeasuresofTaxolproductionStatus

ZHANGHuan1，ZHAOYunxin2*，GAOWen2，3，DENGBaiwan3，4

(1.HanzhongCityEnvironmentalMonitoringCenterStation，Hanzhong723000，China；2.Hanzhongresearchinstituteofbotany，Hanzhong723000，China；3.ShaanxiEngineeringResearchCenterofEdibleandMedicatedFungi，Hanzhong723000，China4.SchoolofBiologicalScienceandEngineering，ShaanxiUniversityofTechnology，Hanzhong723000，China)

The current six main ways of producing taxol are reviewed in this paper.By analyzing the characteristics of each way，we proposed that the use of endophytic fungi to produce taxol is expected to solve the market demand and expensive situation.It is also very important for the protection of endangered medicinal plants and development of new production way of natural medicine from plant origin.

Taxuschinensis；taxol；endophytic fungus

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.1.020

2014-07-04)

國(guó)家中醫(yī)藥公共衛(wèi)生專(zhuān)項(xiàng)(201207002)；陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013K12-23-02)

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趙赟鑫，碩士，研究方向：微生物次生代謝產(chǎn)活性物質(zhì)研究；E-mail：alvin071625@hotmail.com