雛鵝大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

許英民（黑龍江省鐵力市獸醫專家門診黑龍江伊春152500）

雛鵝大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

許英民
（黑龍江省鐵力市獸醫專家門診黑龍江伊春152500）

雛鵝致病性大腸桿菌是雛鵝的一種常見病，以危害7～45日齡的雛鵝，給養鵝業造成極大的經濟損失。臨床上表現為精神沉郁，羽毛松亂，怕冷，扎堆，不斷尖叫，下痢，糞便惡臭，帶白色黏液或混有血絲等。通過對大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性的分析，可找出敏感菌株進行治療。

雛鵝；大腸桿菌；分離鑒定；耐藥性分析

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.7.037

雛鵝大腸桿菌病是雛鵝感染致病性大腸桿菌引起的一種急性、或慢性細菌性傳染病。雛鵝感染大腸桿菌后，一般日齡在7～45日齡，主要發生急性敗血癥、氣囊炎、心包炎、肝周炎、眼炎等。大腸桿菌病的病原是由某種血清型的大腸桿菌所致，雛鵝有O1、O2、O6等血清型。

黑龍江省鐵力市林業局某林業經營所張某養鵝場，飼養雛鵝2 000只，雛鵝患有精神不振，腹瀉，糞便帶黏液，并有血絲，雛鵝扎堆等臨床癥狀，但是用藥物治療效果不大，出現死亡。據不完全統計，該病的發病率為24% ～38%，死亡率在10%～20%給養鵝業造成極大的經濟損失。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料黑龍江省鐵力市林業局某林業經營所張某飼養的15日齡雛鵝，發病后死亡22只，張某送檢的8只雛鵝，具有典型的大腸桿菌病癥狀，無菌條件下采集死亡雛鵝的心血、肝臟、脾臟及小腸內容物作為分離材料。

1.1.2培養基普通瓊脂培養基、麥康凱培養基、營養肉湯培養基，均購自北京奧博星生物技術有限公司，哈爾濱生物技術分公司。

1.1.3生化試劑各種糖發酵管、尿素酶試劑、甘露醇、硫化氫試劑等，均購自北京天壇藥物生物試劑有限公司，某生物試劑商店。

1.1.4藥敏紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司，下屬的某試劑商店。

1.1.5試驗動物選自黑龍江省鐵力市農場某養兔場，健康易感染試驗兔。

1.2方法

1.2.1臨床癥狀及病理解剖觀察觀察發病及死亡雛鵝的臨床癥狀，并進行解剖死亡雛鵝，觀察病死雛鵝病理變化特征。

1.2.2涂片鏡檢無菌采取病死雛鵝的肝臟、脾臟、心血和淋巴結，分別進行革蘭氏染色，用1 000倍顯微鏡進行鏡檢，觀察結果。

1.2.3細菌分離與培養在無菌條件下，取死亡雛鵝的心血、肝臟、脾臟分別劃線接種于普通瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基上，在37.0℃恒溫箱培養24 h；從麥康凱瓊脂培養基上選擇均勻、典型、紅色優勢菌落，接種于肉湯培養基上，在37.0℃恒溫箱中培養24 h，進行純化備用。

1.2.4生化試驗根據細菌的培養特征、染色形態特征，挑取單個菌落接種于大腸桿菌微量生化鑒定管，置于37.0℃恒溫箱中，培養24 h，觀察結果。

1.2.5動物回歸試驗將所分離到的細菌菌株培養物，進行調節菌液濃度為40×108、20×108、10× 108、5×108、1×108CFU/mL，在各頸部皮下注射健康試驗兔3只，進行觀察，并做好記錄。

1.2.6藥敏試驗用常規紙片法做藥敏試驗，挑取適量的細菌培養物，以劃線方式將細菌涂布到營養瓊脂培養基上。將含有定量抗菌素藥物的試紙片貼在已接種細菌的瓊脂培養基表面上，37.0℃恒溫箱中，培養24 h。抑菌環的大小可看出細菌對藥物的敏感程度。

2　結果

2.1臨床癥狀觀察

雛鵝到15 d之后，即出現精神不振，食欲減退，羽毛蓬亂無光澤，怕冷擠成一堆。表現為下痢，糞便稀薄，有一股難聞的氣味，帶白色黏液或混有血絲、血塊和氣泡，一般呈青綠色或灰白色。肛門周圍污穢，羽毛沾滿糞便，干固后使排便受阻，渴欲增加。喘氣、呼吸困難，最后衰竭而死亡。

2.2剖檢變化

心包腔積液，心包液常見有纖維素性滲出物，心包膜渾濁、不透明、增厚，呈灰白色，嚴重病例心包膜與心外膜粘連。有些病例心外膜粗糙，附著纖維素性滲出物。氣囊膜增厚、混濁，表面附著纖維素性或黃白色干酪樣滲出物。滲出物有時還會成片狀填滿氣囊。肝臟呈不同程度腫大，肝被膜表面有一層不同程度的纖維素性薄膜覆蓋，薄膜易于剝離。肝表面可見到邊緣不整齊、暗灰白色、不突出的小壞死點。有的病例可見肺充血、出血、水腫。腸系膜淋巴結腫大呈淡紅色，小腸黏膜脫落伴有出血，以十二指腸最為嚴重。結腸、回腸、空腸內充滿顆粒狀物的水樣內容物。

2.3涂片鏡檢

將肝臟、脾臟、心血、淋巴結進行涂片，鏡檢，可見到革蘭氏染色陰性，兩端鈍圓，單個散在或成雙排列的球桿菌，未見有芽孢和莢膜。

2.4培養特性

分離菌株培養物在普通瓊脂平板上生長良好，形成圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、直徑約1～3 mm的灰白色、半透明菌落；在37.0℃恒溫箱中，培養24 h后的肉湯培養基呈均勻渾濁，管底有少量白色沉淀物；在麥康凱平皿上長出直徑1～2 mm紅色透明菌落，對單個菌落和肉湯培養物涂片，進行染色，鏡檢，均可見到與病料涂片所見到一致的細菌。

2.5生化試驗

所分離的菌落在麥康凱培養基上為鮮桃紅色或微紅色菌落中心呈深桃紅色，圓形、扁平、邊緣整齊，表面光滑，濕潤；分離細菌在大腸桿菌顯色平板上為紫色，該菌初步鑒定為大腸桿菌。生化試驗表現為：M.R.試驗陽性，V-P試驗陰性，分離菌能發酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、甘露醇、鼠李糖、山梨醇，產酸產氣；不分解側金盞花醇和肌醇；能產生靛基質，均不產生硫化氫，尿素酶陰性。符合上述生化反應，分離菌株被鑒定為大腸桿菌。

2.6動物回歸試驗

將分離菌株的純化培養物調節菌液濃度，各頸部皮下注射健康試驗兔5只，1.0 mL/只，結果為：40×108cfu/mL，死亡兔5只；20×108cfu/mL，死亡兔 4只；10×108cfu/mL，死亡兔2只；5× 108cfu/mL，死亡兔1只；1×108cfu/mL，死亡兔1只。

從上述表明，試驗兔攻毒后均出現精神不振、食欲減退，并發生不同程度的腹瀉等。解剖與檢查死亡及發病試驗兔，表現出典型大腸桿菌病的臨床癥狀及病理變化，并能從試驗兔體內分離到攻毒菌株。

2.7藥敏試驗

對所分離到的菌株進行常規紙片法藥敏試驗，其結果該菌對注射頭孢噻呋、氟苯尼考、復方阿莫西林高敏，對強力霉素、氨芐青霉素中敏，對環丙沙星、慶大霉素、林可霉素耐藥。

3　分析與討論

大腸桿菌廣泛存在自然界，大腸桿菌是動物腸道中最常見的一種細菌病之一，大腸桿菌屬于有致病力的血清型，一般約占10%～18%。當育雛舍內環境衛生條件不良、舍內和地面潮濕、育雛舍內通風不好、有害氣體增多、飼養密度過大非常擁擠等因素都能誘發本病的傳播和蔓延。

初生雛鵝感染是由于種蛋被感染，種蛋非常臟，消毒不嚴，孵化室不夠衛生等原因都會感染。因此，應注意育雛期間的保溫及飼養密度，改善飼養環境，加強通風換氣，降低灰塵，經常清除糞便，可大大減少有害氣體的含量（如：氨氣。對環境、育雛舍、孵化室、孵化器要經常清掃和消毒）。用具，如：食槽、飲水器經常用0.2%過氧乙酸或0.3%百毒殺進行噴霧消毒。

在雛鵝群中，一旦發現有發病或死亡的雛鵝時，應立即進行細菌的分離、藥敏試驗，可找出該菌較感染的幾種藥物，加入到飼料和飲水中，對控制疾病將會起到最理想的效果。

“這個育雛舍已有好幾年不用了”，據調查和養殖戶張某的介紹，在育雛前進行1次噴霧消毒，用的是來蘇兒，進行噴霧，但并未完全進行消毒，未按要求進行徹底的消毒。而在有疫情時也未對雛鵝進行隔離，在原位治療，死亡雛鵝到處亂扔，或讓狗吃，也不遠離鵝場進行深埋或焚燒，使大腸桿菌的病原菌進行擴散、傳播和蔓延，此次暴發給養鵝場造成很大的經濟損失。■（編輯：趙曉松）

［1］蔡寶祥，家畜傳染病學（第四版）［M］.北京：中國農業出版社，2001.

［2］甘肅農業大學，獸醫微生物實習指導［M］.北京：中國農業出版社，1988.

［3］東北農業大學，獸醫臨床診斷學［M］.北京：中國農業出版社，2001.

［4］楊宏禹，一株大腸桿菌YT株的分離鑒定［J］.上海畜牧獸醫通訊，2015（6）：54-56.

［5］安麗英，獸醫實驗診斷［M］.北京：中國農業大學出版社，2000.