加味四逆散調控抑郁癥大鼠海馬BDNF、NR1表達及促進海馬DG區神經再生的研究

嚴　燦，劉銀偉，吳麗麗，祝鵬輝，潘　毅

(1.廣州中醫藥大學中醫基礎理論教研室，廣東 廣州　510060；2.南陽理工學院張仲景國醫學院，河南 南陽　473004)

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加味四逆散調控抑郁癥大鼠海馬BDNF、NR1表達及促進海馬DG區神經再生的研究

嚴燦1，劉銀偉2，吳麗麗1，祝鵬輝1，潘毅1

(1.廣州中醫藥大學中醫基礎理論教研室，廣東 廣州510060；2.南陽理工學院張仲景國醫學院，河南 南陽473004)

摘要：目的研究加味四逆散對抑郁癥大鼠海馬BDNF、NR1表達的調控及促進海馬DG區神經再生的效應及機制。方法建立慢性應激性抑郁癥模型。采用熒光標記的免疫組化方法檢測海馬DG區NeuN、BrdU、腦源性神經營養因子(BDNF)、N-甲基-D-天冬氨酸受體1(NR1)的表達水平。原位雜交技術檢測海馬DG區BDNF表達水平。結果慢性應激能抑制海馬DG前體細胞的增殖(P<0.01)；抑郁癥大鼠海馬DG區BDNF表達明顯下降(P<0.01)，NR1的表達明顯升高(P<0.01)。JWSNS和氟西汀能明顯增加抑郁癥大鼠海馬DG單位面積中神經元數目和新增殖細胞量(P<0.01)，增強海馬DG區BDNF的表達(P<0.01)和降低NR1的表達(P<0.01)。結論JWSNS能夠促進抑郁癥大鼠海馬DG區神經細胞的增殖，并可能通過增強BDNF的表達和降低NR1的表達，促進海馬DG區的神經再生。

關鍵詞：抑郁癥；海馬；齒狀回；神經再生；加味四逆散；腦源性神經營養因子、N-甲基-D-天冬氨酸受體1

成年中樞神經再生(neurogenesis)是指哺乳動物成年后中樞神經系統內以神經干細胞(neural stem cells，NSCs)為基礎借助適宜環境產生成年新生神經細胞的過程[1]。海馬齒狀回(dental gyrus，DG)的顆粒細胞下層(subgranular cell zone，SGZ)是成年神經再生的最主要腦區之一 。近年來大量的研究提示，抑郁癥可能與成年海馬神經再生下調引起海馬結構可塑性的改變有關[2]。因此，抑制或者逆轉海馬萎縮，誘導海馬成體干細胞增殖分化，促進DG 區的神經再生，已經成為抗抑郁研究的一個熱點。

我們前期的研究證實，中藥復方加味四逆散(Jiaweisinisan，JWSNS)具有確切的抗抑郁效應[3-4]，本研究將通過觀察JWSNS對應激性抑郁癥大鼠海馬DG區神經再生以及腦源性神經營養因子(brain -derived neurotrophic factor，BDNF)和N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR)1(NR1)表達的影響，進一步探討JWSNS抗抑郁的作用機制。

1材料與方法

1.1慢性應激性抑郁癥模型采用慢性不可預計輕度應激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)動物模型[5]并加以改進：接受應激處理的大鼠單獨放在一間房間內，在21 d內隨機接受不同類型的應激刺激。應激原包括：限制空間1 h、45°斜籠7 h、濕籠17 h(200 g鋪料倒100 mL水，使墊料濕透)、新入侵者(兩籠并籠)23 h、持續光照36 h、空瓶1 h、禁食禁水23 h。造模前：所有大鼠單籠飼養1周適應環境。d 1：接受雙瓶訓練，一瓶是1%(W/V)的蔗糖水(放置在鼠籠的左側)，一瓶是純水(放置在鼠籠的右側)，訓練48 h (d 1 9 ∶30至 d 3 9 ∶30)；d 3： 9 ∶30開始禁食禁水23 h，至d 4 8 ∶30；進行1 h糖水消耗實驗。根據糖水消耗實驗結果和體重情況進行分組。造模期：每天8 ∶30灌胃，模型組與正常組分房飼養，單籠飼養。d 1 9 ∶30～10 ∶30限制空間1 h。d 2, 20 ∶30,至d 3, 8 ∶30持續光照36 h。d 3, 9 ∶30～ 16 ∶30 45°斜籠7 h。d 4, 9 ∶30,至d 5, 8 ∶30,兩籠并籠，新入侵者23 h。d 5, 9 ∶30,開始禁水3 h，12 ∶30～13 ∶30空瓶1 h,15 ∶30,至d 6, 8 ∶30濕籠17 h。d 6, 16 ∶00至d 7 15 ∶00開始禁食禁水23 h。d 8 8 ∶30至d 9 20 ∶30持續光照36 h。d 10 9 ∶30至d 11 8 ∶30兩籠并籠，新入侵者23 h。d 11 9 ∶30開始禁水3 h，12 ∶30～13 ∶30空瓶1 h；15 ∶30～16 ∶30限制空間1 h。d 12 9 ∶30～16 ∶30 45°斜籠7 h；16 ∶30至d 13 9 ∶30濕籠17 h。d13 9 ∶30至d 14 8 ∶30開始禁食禁水23 h。d 14 15 ∶30～16 ∶30限制空間1 h。d 15 9 ∶30至d 16 8 ∶30兩籠并籠，新入侵者23 h。d 16 8 ∶30至d 17 20 ∶30持續光照36 h。d 18 9 ∶30開始禁水3 h，12 ∶30～13 ∶30空瓶1 h，15 ∶30至d 19 8 ∶30濕籠17 h。d 20 9 ∶30～16 ∶30 45°斜籠7 h。16 ∶00至d 21：15 ∶00開始禁食禁水23 h。d 21 15 ∶00～16 ∶00開始糖水消耗實驗(包括測體重)。

1.2動物及分組給藥SPF級Wistar大鼠，♂性，體質量180～220 g，南方醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：0039901。大鼠單籠飼養，自由攝食飲水，在光暗周期為12h，溫度為(23±2)℃的安靜環境適應并訓練共計2周后，根據糖水消耗實驗結果和體重情況進行分組。分為4組：正常組(Control，不施加任何刺激)、模型組(Model)、 JWSNS組(JWSNS，每天早上8 ∶30灌胃中藥復方JWSNS，每次2 mL，相當于臨床成人用藥劑量的2倍)和鹽酸氟西汀組(fluoxetine hydrochloride，每天早上8 ∶30灌胃1mL·(100 g)-1，相當于臨床成人用藥劑量的1倍)。正常組及模型組每次灌胃等量蒸餾水。其中正常組大鼠與其余各組大鼠分房飼養。

1.3主要藥品、試劑及儀器JWSNS由柴胡、白芍、枳殼、枸杞子、干地黃等組成。藥材由本校第一附屬醫院藥房提供，經藥劑科鑒定均為純正藥材。將中藥制成粗粉，按比例取以上中藥粗粉加8倍量水浸泡30 min，沸騰后文火加熱30 min汁；第2煎直接加6倍量水煎煮，沸騰后文火加熱30 min取汁。合并兩次所得藥液，4層紗布過濾，待稍冷卻后用旋轉蒸發儀濃縮藥液至含生藥1.69×103g·L-1藥液常溫冷卻后，置4 ℃冰箱內保存備用。鹽酸氟西汀膠囊由Patheon France生產，禮來蘇州制藥有限公司提供，規格：20 mg/粒，產品批號：8147A，用生理鹽水將膠囊內粉末配制成0.18 g·L-1混懸液，4℃冰箱內保存備用。5-溴-2-脫氧脲苷(5-BrdU)：購自Sigma公司，批號：20080126。4%多聚甲醛購自國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20080103。中性樹膠購自國藥集團化學試劑有限公司，批號：20080513。DEPC購自AMRESCO公司，批號：080210。Triton X-100購自AMRESCO公司，批號：080723。驢血清購自廣州蕊特生物科技有限公司，批號：080816。兔來源BrdU抗體購自北京博奧森公司，批號：bs-0917R。Alexa Fluor?488 donkey anti-rabbit IgG購自MP(invitrogen)公司，批號：439378。Mouse Anti-NeuN購自Millipore公司，批號：LV1519148。Alexa Fluor?594 donkey anti-mouse IgG購自MP(Invitrogen)公司，批號：56568A。BDNF原位雜交試劑盒、DAB染色試劑盒、原位雜交專用PBS均購自武漢博士德生物工程有限公司。Rabbit polyclonal to BDNF購自Abcam公司，批號76313。Rabbit polyclonal to NMDAR1 a/b/c/d購自Abcam公司，批號：73676。主要儀器：旋轉蒸發儀(LABORATA4000，德國Heidolph公司)；冰凍切片機(CM 1850型，德國Leica公司)；超純水器(Nexpower 1000，韓國Human coporation公司)；pH計(59000-20，美國COLE-PARMER公司)；光學顯微鏡及攝像系統(1X 71，日本OLYMPUS公司)；圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0(Media-Cybornetics，美國)。

1.4糖水消耗實驗所有大鼠在完成1周的單籠飼養適應后，接受1周的雙瓶訓練，每日清晨添加糖水或純水。之后所有大鼠禁食禁水23 h，進行1 h糖水消耗實驗，測量基礎糖水偏愛度和基礎體重。經過禁食禁水23 h后，在整個實驗進程的d 21 15 ∶00～16 ∶00再次進行糖水消耗實驗，測量造模后糖水偏愛度和體重。糖水偏愛度/%=造模后糖水偏愛度/基礎糖水偏愛度×100%。

1.5大鼠海馬DG區NeuN、BrdU表達檢測距離實驗取材前3 d(每天固定同一時間)連續使用BrdU腹腔注射(每次用量：50 mg·kg-1，臨用時用滅菌生理鹽水配制成濃度為10 g·L-1水溶液)。制備冰凍切片：3.5%水合氯醛〔35 mg·(100 g)-1，即1 mL·(100 g)-1〕腹腔注射麻醉大鼠，經升主動脈灌注生理鹽水10 min后換用4%多聚甲醛液(pH 7.14)灌注30 min，斷頭取腦。腦組織放入4%多聚甲醛，4℃環境下后固定4 h。取出后用PBS表面沖洗2次，再浸入30%的蔗糖PBS溶液中脫水過夜。組織塊下沉后取出，ORC包埋冷凍后使用冷凍切片機在距離前囪3.14～4.52 mm的范圍內連續冠狀切片，片厚20 μm。把切片加載至多聚賴氨酸處理過的載玻片，室溫干燥后放入-20℃冰箱保存。免疫組化熒光標記程序：將盛載標本的切片盒從-20℃轉置4℃平衡30 min，再轉置室溫平衡30 min。抗原修復：用耐高溫塑料盒盛600 mL檸檬酸鹽緩沖液放入高壓鍋，不加壓力閥，加熱至液體沸騰，將切片放入沸騰的緩沖液中，加壓力閥，繼續加熱3 min至噴氣。冷卻至室溫取出，用蒸餾水洗5 min，PBS/0.1% Triton洗5 min×3次。冰上用1 mol·L-1HCl孵育10 min，打開待標記組織細胞的DNA結構。用2 mol·L-1HCl在室溫下孵育10 min，然后轉入37℃濕盒內孵育20 min。用0.1 mol·L-1硼酸緩沖液在室溫下處理12 min，PBS洗5 min。用5%驢血清(PBS/0.1% Triton、1 mol·L-1甘氨酸稀釋)室溫下封閉60 min。小心吸去樣品周圍液體，用混合一抗工作液(PBS/0.1% Triton稀釋。NeuN稀釋比例1 ∶200；BrdU稀釋比例1 ∶350)4℃孵育過夜。PBS洗5 min×3次。用混合二抗工作液(PBS/0.1% Triton稀釋，稀釋比例均為1 ∶400)，室溫下避光孵育2 h。PBS洗(避光)5 min×3次。用50%甘油碳酸鹽緩沖液封片，避光放置30 min，熒光顯微鏡下觀察拍照。圖像的采集和分析：用Image-Pro Plus圖像分析軟件對圖像進行采集和分析。采集過程中在同一視野下分別切換Olympus 1X71顯微鏡的WB、WG激發濾光片激發樣品中的熒光標記物Alexa Fluor?488、Alexa Fluor?594，對采集到的圖像分組(同一視野下的2張片為一組)以16位灰度圖形模式進行保存。分析時用Image-Pro Plus軟件載入所保存的圖片，按照軟件使用指南用顏色通道工具對同組的2張圖片進行重疊，將所有照片反相(Invert Image)后在DG區創建AOI，分別計算AOI區域BrdU和NeuN的平均光密度，間接進行平均熒光強度的分析。

1.6大鼠海馬DG區BDNF表達檢測制備冰凍切片的步驟同上，然后將切片盒從-20℃轉置4℃平衡30 min，再轉置室溫平衡30 min。免疫組織化學熒光標記程序，一抗工作液：BDNF用PBS/0.25% Triton稀釋，稀釋比例1 ∶150。其余步驟同上。原位雜交DAB染色程序：將切片盒從-20℃轉置4℃平衡30 min，再轉置室溫平衡30 min。滅活內源性過氧化物酶：室溫下用0.6% H2O2處理30 min，蒸餾水洗滌3次。消化：室溫下切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1 mL 3%檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)消化2 min，原位雜交用PBS洗5 min×3次，蒸餾水洗1次。后固定：室溫下用1%多聚甲醛/0.1 mol·L-1PBS(pH 7.2～7.6，含有0.1% DEPC)固定10 min，蒸餾水洗滌3次。預雜交：每張切片加20 μL預雜交液連同濕盒放入40℃恒溫箱2 h，吸取多余液體。雜交：每張切片20 μL雜交液，放入38℃恒溫箱雜交過夜。雜交后洗滌：揭掉蓋切片，37℃水溫2×SSC洗滌5 min×2次；37℃ 0.5×SSC洗滌15 min×1次；37℃ 0.2×SSC洗滌15 min×2次。封閉：滴加封閉液放入37℃恒溫箱30 min，甩去多余液體。滴加生物素化鼠抗地高辛放入37℃恒溫箱60 min，原位雜交用PBS洗5 min×4次。滴加SABC放入37℃恒溫箱20 min，原位雜交用PBS洗5 min×3次。滴加生物素化過氧化物酶放入37℃恒溫箱20 min，原位雜交用PBS洗5 min×4次。DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒(1 ml蒸餾水加顯色劑A、B、C各一滴，混勻)顯色20～30 min，充分水洗。封片觀察：酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。圖像的采集和分析：步驟同上。

1.7大鼠海馬DG區NR1免疫組織化學熒光標記檢測制備冰凍切片步驟同上，將切片盒從-20℃轉置4℃平衡30 min，再轉置室溫平衡30 min。免疫組織化學熒光標記程序，一抗工作液：NMDA R1用PBS/0.25% Triton稀釋，稀釋比例1 ∶50。其余步驟同上。圖像的采集和分析：步驟同上。

2結果

2.1各組大鼠糖水偏愛度的變化與正常組比較，模型組大鼠糖水偏愛度明顯下降(P<0.01)。與模型組比較，JWSNS組和Fluoxetine hydrochloride組大鼠糖水偏愛度沒有下降(P<0.01，Tab1)。

**P<0.01vscontrol；△△P<0.01vsmodel

2.2各組大鼠海馬DG區神經細胞增殖情況的比較海馬部位的CA3區和DG區為NeuN陽性標記的集中區，BrdU陽性標記的細胞散在海馬各處，以

**P<0.01vscontrol；△P<0.05，△△P<0.01vsmodel；##P<0.01vsFluoxetine hydrochloride

CA3區和DG區最為集中。模型組、JWSNS組以及Fluoxetine hydrochloride組BrdU標記的平均熒光強度值均低于正常組(P<0.01)，JWSNS組和Fluoxetine hydrochloride組的平均熒光強度值高于模型組(P<0.01)。

模型組和西藥組的NeuN標記平均熒光強度值明顯低于正常組(P<0.01)。JWSNS組平均熒光強度值明顯高于模型組(P<0.05)和Fluoxetine hydrochloride組(P<0.01)。

BrdU-NeuN聯合標記平均熒光強度值的比較結果表明，模型組高于正常組(P<0.01)。BrdU-NeuN聯合標記平均熒光強度值與BrdU標記平均熒光強度值比值的比較結果表明，模型組、JWSNS組以及Fluoxetine hydrochloride組均明顯高于正常組(P<0.01)。JWSNS組明顯低于模型組(P<0.01)和Fluoxetine hydrochloride組(P<0.05，Tab2，Fig 1)。

A line：nerve cells tagged by NeuN；B line：proliferated cells tagged by BrdU；C line：A and B. The 1 st row：Control；The 2 nd row：Model；The 3 rd row：JWSNS；The 4 th row：Fluoxetine hydrochloride

2.3各組大鼠海馬DG區BDNF表達的比較海馬BDNF陽性表達的區域主要集中于CA3區和DG區。與正常組相比，模型組BDNF表達的平均熒光強度值明顯減弱(P<0.01)。與模型組相比，JWSNS組和Fluoxetine hydrochloride組平均熒光強度明顯升高(P<0.01)，BDNF表達增強。與Fluoxetine hydrochloride組相比，JWSNS組BDNF表達明顯增高(P<0.01，Fig 2，3)。

**P<0.01vscontrol；△△P<0.01vsmodel；##P<0.01vsFluoxetine hydrochloride

A：Control；B：Model；C：JWSNS；D：Fluoxetine hydrochloride

2.4各組大鼠海馬DG區NMDAR1表達的比較海馬NMDA R1陽性表達的區域主要集中于CA3區和DG區。與正常組相比，模型組NMDA R1表達的平均熒光強度值明顯升高(P<0.01)。與模型組相比，JWSNS組和Fluoxetine hydrochloride組平均熒光強度明顯降低(P<0.01)，NMDA R1表達減弱。JWSNS組與Fluoxetine hydrochloride組相比，差異無顯著性(Fig 4，5)。

**P<0.01vscontrol；△△P<0.01vsmodel

A：Control；B：Model；C：JWSNS；D：Fluoxetine hydrochloride

3討論

海馬是情緒整合和高級精神活動中樞，海馬DG區的顆粒細胞下層存在的神經前體細胞 (neuronal progenitor cells，NPCs)可逐漸增殖、分化、遷移進入顆粒層，產生樹、軸突并不斷發生可塑性變化，與周圍神經元形成突觸聯系，整合到海馬功能的神經環路中。各類研究證實應激和抑郁癥患者的海馬體積發生改變，表現為海馬萎縮及神經元的減少[6]。雖然目前尚未清楚海馬萎縮與抑郁癥之間的因果關系，但研究發現，抗抑郁藥在細胞水平產生的一個明顯效應就是促進成年海馬的神經再生[7]。因此，成熟腦海馬神經再生是抑郁障礙治療的一個重要靶點。

BrdU標記平均熒光強度值主要反映單位面積中新增殖細胞的量的多少，而NeuN標記平均熒光強度值主要反映單位面積中神經細胞的量的多少。本研究發現，應激性抑郁癥大鼠海馬DG區中處于增殖狀態的神經細胞數量以及單位面積的神經元數量出現下降，說明慢性應激能抑制海馬前體細胞的增殖，導致海馬神經元損傷和再生障礙。JWSNS和氟西汀能增加DG單位面積中神經元數目和新增殖細胞量，具有促進海馬神經再生的效應。

腦源性神經營養因子(brain -derived neurotrophic factor，BDNF)廣泛存在于中樞和外周神經系統，具有神經再生和修復功能。在動物實驗中，慢性應激和促抑郁條件會導致海馬部位 BDNF 表達減少，海馬區神經元凋亡增加，再生能力降低[8]。大鼠DG區注入BDNF 可以增加神經再生，并能在行為學上產生抗抑郁的效果；阻斷BDNF 的表達可以發現，海馬DG區的神經再生受到抑制，并出現抑郁癥相關的行為學改變[9]。因此，中樞BDNF 表達水平的升高或降低與人或動物抑郁樣行為的表現密切相關。本研究發現，應激性抑郁癥大鼠海馬DG區BDNF表達下降，而JWSNS和氟西汀能增強抑郁癥大鼠BDNF的內源性合成和分泌表達。

谷氨酸是一種重要的興奮性中樞神經遞質，谷氨酸調控的突觸及神經可塑性在抑郁癥的神經生物學基礎及抑郁癥的治療中都非常關鍵[10]。研究表明，其在精神分裂癥、情感障礙和神經發育障礙中都占有重要的地位。谷氨酸受體分為離子型和代謝型，N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受體是離子型的谷氨酸受體。NMDA 受體(NR)的亞基按基因型分為：NR1、NR2(A、B、C 和D)和NR3(A和B)3個家族，其中，NR1 為NR必需的功能亞基，而亞單位NR1、NR2B與抑郁癥的關系最為密切[11]。應激可導致海馬細胞外谷氨酸濃度的增加，使NR過度激活，NR興奮時主要引起Ca2+、Na+內流以及K+外流， 從而引起胞內信號通路激活，而過量的鈣離子內流則會引起神經元的死亡，導致抑郁的發生[12]。激活NR可以抑制海馬神經前體細胞增殖，阻斷此受體會出現相反的結果。NR通過配體門控性Ca2+超載介導海馬的神經再生過程。因此內源性的谷氨酸水平和 NR的活性是維持神經再生的重要因素[6]。本研究發現，慢性應激使大鼠海馬DG區NR1的表達明顯升高，從而對DG區的神經元產生興奮性毒性作用。JWSNS和氟西汀能逆轉NR1的過度表達，減弱神經興奮性毒性作用，提高神經細胞的存活率，促進海馬神經再生。

綜上所述，JWSNS能夠促進慢性應激性抑郁癥大鼠海馬DG區神經細胞的增殖，并能通過增強BDNF表達和降低N R1表達，發揮促進海馬DG區神經再生的效應。

(致謝：本文實驗在廣州中醫藥大學國家級重點學科中醫基礎理論治則治法實驗室完成，參與人員除論文作者外，還有王劍研究員、碩士生劉書考、任雪梅，在此一并致謝！)

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Regulatory of Jiaweisinisan on expression of hippocampal BDNF,NR1 and dental gyrus neurogenesis in rats with chronic stressed-depression

YAN Can1，LIU Yin-wei2，WU Li-li1，ZHU Peng-hui1，PAN Yi1

(1.DeptofBasicTheoryofTraditionalChineseMedicine，GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guanzhou510060,China;2.ZhangzhongjingChineseMedicineCollege，NanyangInstituteofTechnology，Henan473004，China)

Key words：depression；hippocampus；dental gyrus；neurogenesis；jiaweisinisan；brain -derived neurotrophic factor；N-methyl-D-aspartate receptor 1

Abstract：AimTo study the regulatory of Jiaweisinisan on expression of hippocampal BDNF, NR1 and dental gyrus (DG) neurogenesis in rats with chronic stressed-depression and its possible mechamisms.MethodsChronic unpredictable mild stress was used to establish the rat model of stressed depression. The expression of BrdU, NeuN, brain -derived neurotrophic factor(BDNF) and N-methyl-D-aspartate receptor1(NR1)in hippocampal dental gyrus were detected by fluorescently labeled immunohistochemical method. In addition，BDNFmRNA was detected by in situ hybridization.ResultsChronic stress could inhibit the proliferation of neural precursors in hippocampal DG (P<0.01)；the expression of BDNF decreased significantly in DG in model rats(P<0.01)，while the expression of NR1 increased significantly(P<0.01). JWSNS and Fluoxetine hydrochloride significantly enhanced the amount of new proliferating cells and the number of neurons in unit area of DG(P<0.01)，increased the expression of BDNF(P<0.01) and decreased the expression of NR1 in DG(P<0.01).ConclusionJWSNS could promote the neuronal proliferation in hippocampal DG of rat with chronic stressed-depression，and may exert an effect of promoting the proliferation of neurons in hippocampal DG by enhancing the expression of BDNF and decreasing the expression of NR1.

收稿日期:2015-11-09,修回日期:2016-02-28

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No 30500660)

作者簡介：嚴燦(1970-)，男，博士，教授，研究方向：情志致病機理與中醫藥防治，Tel：020-39358032，E-mail：yancan999@sina.com; 吳麗麗(1973-)，女，博士，教授，研究方向：情志致病機理與中醫藥防治，通訊作者，Tel：020-39358032，E-mail：13822218911@163.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.025

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)04-0569-06

中國圖書分類號：R-332；R289.5；R322.81；R749.42；R971.43

網絡出版時間：2016-3-18 11:22網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.050.html