大劑量維生素D3補充對糖尿病大鼠淋巴細胞增殖活性的影響

竇曉娟，汪求真，韓孝紅，郭玉妹，郝海波，張　雨，藺瑞函，馬愛國

(山東省青島大學公共衛生學院，山東 青島　266000)

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大劑量維生素D3補充對糖尿病大鼠淋巴細胞增殖活性的影響

竇曉娟，汪求真，韓孝紅，郭玉妹，郝海波，張雨，藺瑞函，馬愛國

(山東省青島大學公共衛生學院，山東 青島266000)

關鍵詞：糖尿病； 維生素D； 淋巴細胞；增殖活性； MTT；體重

近年來，糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率逐年升高，已成為全球性公共衛生問題。淋巴細胞是執行免疫功能的主要細胞成員，對維持機體內環境的穩定發揮重要作用有研究顯示，2型DM患者淋巴細胞增殖活性明顯低于正常對照[1]。維生素D(vitamin D， VD)是一種重要的調節鈣磷平衡和脂質代謝的激素。近年來，有研究證明，VD還具調控胰島素抵抗和免疫調節等功能，在維持機體免疫中發揮重要作用，并且可以減輕DM腎病和胰腺等的損傷。但是，關于VD補充對DM患者淋巴細胞增殖活性和臟器指數影響的研究卻鮮有報道。

1材料與方法

1.1材料SPF級♂ SD大鼠(山東省魯抗制藥公司)。膽固醇，膽鹽(河南平頂山公司)。STZ(美國Sigma公司)。血糖儀和試紙(日本拜耳保健有限公司)。VD3(青島雙鯨公司)。酶標儀(西安明克斯檢測設備有限公司)。

1.2造模及干預大鼠適應性喂養1周后，隨機分為對照組(12只)和糖尿病造模組(88只)，分別喂養基礎飼料和高糖高脂飼料4周[2]，兩組分別空腹腹腔注射檸檬酸鈉緩沖液和鏈脲佐菌素(STZ)35 mg·kg-1，注射后24 和72 h測大鼠空腹血糖，兩次均>11.1 mmol·L-1為造模成功[3]。將造模成功的80只大鼠隨機分為5組。6組大鼠給予不同劑量的VD3連續灌胃6周，對照組N和糖尿病模型組DM組，給予生理劑量的VD3(36 IU·kg-1)，5N、25N、125N和200N組分別給予5倍、25倍、125倍和200倍生理劑量的VD3，劑量分別為180、900、4500和7200 IU·kg-1。

1.3檢測指標大鼠處死后留取各臟器，計算各臟器指數(臟器重量/大鼠體重)。血清25(OH)D采用放射免疫法檢測。淋巴細胞增殖活性采用MTT法檢測。

*P<0.05vsN group;#P<0.05vsDM group.

2結果

2.1各組大鼠血清25(OH)D 濃度和體重25N、125N和200N組大鼠血清25(OH)D濃度明顯高于N和DM組，并呈現明顯劑量-效應關系。與DM組相比，125N組體重明顯增長，接近正常水平。

2.2臟器指數與N組相比，DM組和各VD干預組的肝臟和腎臟指數明顯升高。而125N組和DM組相比，腎臟指數明顯降低。

2.3淋巴細胞增殖活性與N組比較，淋巴細胞增殖活性在DM組明顯降低。與DM組相比，5N組和25N組明顯升高，而125N和200N組未觀察到類似結果。

3討論

本研究證明，DM大鼠連續6周每天攝入125倍劑量的VD能夠降低腎臟指數，其可能是通過抑制尿激酶型纖溶酶原激活劑受體的表達，降低足細胞活動力而起到保護腎臟的作用[4]。Cantorna等證實1,25(OH)2D3可能通過下調IL-12和上調IL-4與TGF-β來增加Th2淋巴細胞的數目。Gepner等[5]的研究證實1,25(OH)2D3能作用于Th細胞而抑制B細胞合成和分泌免疫球蛋白而增加Ts細胞的活性。這與我們的研究結果一致，因此我們推測，適量的VD3補充可通過免疫調節作用增強DM大鼠的淋巴細胞增殖活性。

*P<0.05vsN group;#P<0.05vsDM group.

在本研究中，我們應用了從生理劑量到200倍生理劑量較大范圍內的不同水平VD3補充，國內外尚未見類似報道。同時，在造模時我們得到了一個較高的成模率。但是此研究是針對大鼠的，其研究結果不能直接推及到人。本研究為大劑量VD3對淋巴細胞增殖活性的影響提供了重要的科學依據，其機制有待進一步的深入研究。

參考文獻

[1]陳向芳, 劉志民, 趙瑛, 等. 褪黑素對2型糖尿病患者外周血淋巴細胞增殖與凋亡反應的影響[D]. 全國首屆代謝綜合征的基礎與臨床專題學術會議,2004, 2.

[1]Chen X F, Liu Z M, Zhao Y, et al. Effect of melatonin on peripheral blood lymphocyte proliferation and apoptosis in type 2 diabetes patients[D]. The first academic meeting of metabolic syndrome and clinical project,2004, 2.

[2]劉雙梅, 李桂林, 湯曉麗, 等. 甲基蓮心堿對2型糖尿病模型大鼠作用的代謝組學研究[J]. 中國藥理學通報,2012, 28(4):490-5.

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[4]馬建超, 史偉, 章斌, 等. 1,25-二羥基維生素D_3通過抑制尿激酶型纖溶酶原激活劑受體表達降低足細胞活動力[J]. 中國新藥與臨床雜志,2012, 31(7):401-5.

[4]Ma J C, Shi W, Zhang B, et al. 1,25-Dihydroxy vitamin D3 reduces motility of podocytes via inhibiting urokinase-type plasminogen activator expression[J].ChinJNewDrugsClinRem, 2012,31(7):401-5.

[5]Gepner P, Amor B, Founier C. 1,25-Dihydroxyvivtamin D3 protentiates the in vitro inhibitoy effect of cyclosporin A on T cells from rheumatoid arthritis patients[J].ArthritisRheum, 1989,32(1):31-6.

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Effect of high dosage of vitamin D3 supplementation on lymphocyte proliferation activity in diabetic rats

DOU Xiao-juan, WANG Qiu-zhen, HAN Xiao-hong, GUO Yu-mei, HAO Hai-bo, ZHANG Yu, LIN Rui-han, MA Ai-guo

(CollegeofPublicHealth,QingdaoUniversity,Qingdao,Shandong266000,China)

Key words:diabetes mellitus; vitamin D; lymphocyte; proliferation activity; MTT; body weight

收稿日期：2015-12-15，修回日期：2016-02-21

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No 81472983)

作者簡介：竇曉娟(1989-)，女，碩士生，研究方向：營養流行病學，E-mail:1293606133@qq.com; 汪求真(1971-)，女，博士，碩士生導師，研究方向：營養流行病學，通訊作者，E-mail:kevin_1971@126.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.030

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)04-0589-02

中國圖書分類號：R-332；R322.61；R329.24；R331.125；R392.12；R587.1；R977.24

網絡出版時間：2016-3-18 11:22網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.060.html