HSPC238在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達與意義①

鐘裕恒　黃　湘　陳敬林　譚家余　米賢軍　劉祥玉

(南方醫科大學第三臨床醫學院　南方醫科大學附屬中山博愛醫院，中山528403)

HSPC238在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達與意義①

鐘裕恒黃湘②陳敬林②譚家余③米賢軍④劉祥玉④

(南方醫科大學第三臨床醫學院南方醫科大學附屬中山博愛醫院，中山528403)

①本文為本文為廣東省醫學科研基金項目(A2013875)及國家自然科學基金 (81101534) 資助。

②南方醫科大學附屬中山博愛醫院產前診斷中心，中山528403。

③南方醫科大學附屬中山博愛醫院中心ICU,中山528403。

④南方醫科大學附屬中山博愛醫院病理科,中山528403。

[摘要]目的：檢測HSPC238在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達。方法：收集76例宮頸癌、105例CIN及28例正常宮頸標本，采用免疫組織化學的方法檢測HSPC238的表達，比較不同組織中HSPC238表達的差異。結果：正常組織和癌組織中的HSPC238的表達強度無顯著差異(Z=-0.242，P>0.05)宮頸上皮內瘤變組織(CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ)與正常組織有顯著差異(χ2=19.159，P<0.01)，并且發現HSPC238的表達與CIN的分級存在顯著相關性，隨著CIN級別升高，染色程度降低(rs=-0.327，P<0.01 )。結論：HSPC238的低表達與宮頸腫瘤的發生發展可能有一定關系。

[關鍵詞]HSPC238;宮頸癌；宮頸上皮內瘤變，免疫組化

HSPC238是由人類基因LOC51255編碼的，含153個氨基酸的C3HC4型鋅指蛋白(hypothetical protein LOC51255，HSPC238，RN181，NP_057578)。迄今為止，HSPC238的功能知之甚少。Brophy等人在2008年首次發現，它具有E3泛素蛋白連接酶活性[1]。在我們的前期研究中發現，不論在體內還是體外，HSPC238均可以抑制肝癌細胞的生長[2]。

肝癌的發展大部分經歷肝炎→肝硬化→肝癌的三步曲，而宮頸癌患者的發病過程也是從宮頸炎→宮頸上皮內瘤變→宮頸癌的過程；此外，HBV為肝癌發生演變的主要病因之一[3]，而HPV也被認為是宮頸上皮內瘤變惡性轉化的必要因素之一[4]。肝癌與宮頸癌進展演變的這些相似性使我們很好奇具有抑制肝癌細胞生長作用的HSPC238是否對宮頸癌的發生發展有同樣的影響。為了初步探討HSPC238與宮頸癌發病的相關性，我們采用免疫組織化學技術了解HSPC238在宮頸上皮內瘤變組織和宮頸癌組織中的表達情況，從而為進一步研究HSPC238在宮頸癌進展中的功能奠定基礎。

1材料與方法

1.1病例與標本選取2012年1月~2013年1月中山市博愛醫院病理科保存的病理組織蠟塊，按照《婦產科學》第七版診斷標準，由南方醫科大學病理學專家以雙盲閱片法進行病例確診的宮頸癌標本76例(32~67歲)、宮頸上皮內瘤變105例(CINⅠ50例,CINⅡ30例,CINⅢ25例，年齡23~67歲)作為研究對象。所有標本均經常規石蠟包埋，連續切片(厚4 μm)。患者術前均未接受過放射性治療、化學治療或免疫治療等治療。

1.2試劑與實驗方法宮頸組織標本行免疫組織化學染色(ABC法)。常規試劑購自上海羅氏公司，包括：二甲苯、梯度酒精、PBS緩沖液、中性樹膠、雙氧水、顯色試劑盒、蘇木素復染劑、二抗及染色試劑盒等。一抗購自武漢三鷹生物技術有限公司，工作濃度為1∶150。實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行。石蠟切片脫蠟，以枸櫞酸鹽進行抗原修復，DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封片，最后在光學顯微鏡下觀察染色。以PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性表達HSPC238的肝組織做陽性對照。

1.3結果判定采用半定量方法，細胞中見到棕黃色顆粒分布為陽性。根據染色程度進行判斷：0為基本不著色，+為淡著色，++為著色適中，+++為深著色。

1.4統計學方法采用SPSS19.0統計軟件進行分析。兩獨立樣本的比較采用Mann-Whitney U檢驗，多個獨立樣本的比較采用Kruskal-Wallis檢驗，相關性統計采用Spearman等級相關分析，設定P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

經統計，發現正常組織和宮頸癌組織的染色程度沒有顯著差異(Z=-0.242,P>0.05)，見表1、圖1C、D；正常組織和CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ的染色程度有顯著差異，(χ2=19.159,P<0.01)；并且發現HSPC238的染色程度與CIN的分級存在顯著相關性，隨著CIN級別升高，染色程度降低(rs=-0.327,P<0.01 )見表2、圖2A~C。

表1正常組織和宮頸癌中HSPC238的表達

Tab.1Expression of HSPC238 in normal cervical epithelial and cervical cancer

Note：Z=-0.242，P>0.05.

表2不同級別CIN中HSPC238的表達

Tab.2Expression of HSPC238 in defferent grades of cervical intraepithelial neoplasia

Note：rs=-0.327,P<0.01，χ2=19.159,P<0.01.

3討論

宮頸癌是威脅女性健康和導致死亡的主要惡性腫瘤之一。Shi等[4]在2012年中國宮頸癌的負擔中估算我國宮頸癌新發病例數可能會從2010年的27 000~130 000例/年，將會逐漸增多到2050年的42 000~187 000例/年。闡明其發生發展的機理是防控和治療宮頸癌的重要環節。

HSPC238是新發現的C3HC4型鋅指蛋白。研究表明鋅指蛋白是一類重要的轉錄調控因子，鋅指蛋白的異常與許多人類疾病及癌癥包括宮頸癌的發生有關,如鋅指蛋白ZNF384，ZEB1,RNF152[5-7]。近些年人工鋅指蛋白的生物學應用受到重視[8]，具有滲透性的人工鋅指蛋白AZPs能作為潛在的蛋白抗病毒藥[9]。越來越多的研究將鋅指蛋白作為癌癥治療的干預靶點。因此探索HSPC238與宮頸癌演變的相關性，對于揭示宮頸癌的發生機制和指導治療是具有潛在價值的。

HPV感染是宮頸癌發生發展的必要條件。E6為HPV基因組3個功能區中的一個亞區，E6含有結構為Cys-x-x-Cys的鋅指結構[10]，它可通過P53途徑使癌細胞繞過G1/S和G2/M檢查點，是細胞永生化及惡性轉化的關鍵因素[11]，在宮頸癌的演變過程中發揮重要作用。研究發現，E6相關蛋白(E6-AP)具有泛素連接酶作用[12]，可代替MDM2促進P53的泛素化降解，解除P53對細胞周期蛋白的抑制作用，使細胞繞過關鍵周期檢查點轉為惡性增殖模式。

新近研究提示，與多種腫瘤發生密切相關的核糖體蛋白RPS27a可以與MDM2中心的酸性區域結合，干擾MDM2的泛素連接酶E3的功能。在應激過程中，過表達RPS27a可明顯抑制MDM2介導的P53的泛素化降解過程，使P53分解減少進而引起細胞周期阻滯[13]。有趣的是，在我們的前期研究中通過酵母雙雜交，激光共聚焦，免疫共沉淀和免疫印跡實驗發現，在肝癌細胞中HSPC238可以與RPS27a結合并且低表達HSPC238可以下調RPS27a(此部分論文正在投稿中)。由于肝癌和宮頸癌的發病過程具有相似性，由此，課題組推測在宮頸癌中HSPC238也可以調節RPS27a。

本次研究發現HSPC238的染色程度與CIN的分級存在顯著相關性，隨著CIN分級的升高，HSPC238的表達率降低，說明HSPC238的低表達可能有利于宮頸腫瘤的進展。但在宮頸癌患者中，該蛋白的表達率并沒有顯著降低，這種現象可能是由于細胞耐受造成的,提示HSPC238在宮頸癌前病變和宮頸浸潤癌中可能起著不一樣的作用。關于CIN進展為宮頸癌的機理仍是研究的難點。為此，我們試圖從新的角度研究宮頸癌的發病機理，揭示HSPC238與宮頸癌的關系。

盡管本課題僅對HSPC238在宮頸腫瘤組織中的表達情況進行了初步研究，尚不足以揭示HSPC238在宮頸腫瘤發生中所起的作用，但結合課題組的前期研究(部分研究結果正在撰寫投稿中)，我們推測HSPC238可能通過以下機制(如圖3)參與宮頸腫瘤的發生發展。即在宮頸上皮內瘤變患者中，HSPC238表達下降，使RPS27a 下調，于是對MDM2泛素化降解p53的干擾作用減少，具有抑癌作用的p53水平下調，從而促進宮頸癌的發生。但HSPC238是否在宮頸腫瘤中起著一種獨特的作用，是否能通過RPS27a影響E6-AP參與的MDM2-P53通路進而影響宮頸腫瘤的生長，需要后續實驗來進一步驗證。我們希望此研究能夠為揭示宮頸癌的發病機制提供一條新線索。

參考文獻：

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[3]Block TM,Mehta AS,Fimmel CA,etal.Molecular viral oncology of hepatocellular carcinoma[J].Oncogene,2003,22(33):5093-5107.

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[收稿2015-05-26修回2015-07-21]

(編輯許四平)

Expression and significance of HSPC238 in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer

ZHONGYu-Heng,HUANGXiang,CHENJing-Lin,TANJia-Yu,MIXian-Jun,LIUXiang-Yu.ThirdClinicalCollegeofSouthernMedicalUniversity,ZhongshanBoaiHospitalAffiliatedtoSouthernMedicalUniversity,Zhongshan528403,China

[Abstract]Objective:To investigate the expression of HSPC238 in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer.Methods: We collected 76 cases of cervical cancer,105 cases of CIN and 28 cases of normal cervical epithelial.Then we investigated the expression of HSPC238 by using immunohistochemistry and compared the significant differences between them.Results: There was no significant difference in the expression of HSPC238 between the cervical cancer and normal cervical epithelial(Z=-0.242，P>0.05).However,there was significant difference between the cervical intraepithelial neoplasia and normal cervical epithelial(χ2=19.159，P<0.01)and the expression of HSPC238 was correlated with the grades of CIN.The expression of HSPC238 decreased when the grade of CIN was increasing.(rs=-0.327，P<0.01 ).Conclusion: The low expression of HSPC238 might be correlated with the development of cervical neoplasia.

[Key words]HSPC238；Cervical cancer;Cervical intraepithelial neoplasia;Immunohistochemistry

通訊作者及指導教師：黃湘(1971年- )，女，博士，主任技師，碩士生導師，主要從事腫瘤免疫及產前診斷研究，E-mail:340382761@qq.com。

作者簡介：鐘裕恒(1991年-)，女，在讀碩士，主要從事腫瘤免疫研究,E-mail:1119282101@qq.com。

中圖分類號R737.33

文獻標志碼A

文章編號1000-484X(2016)02-0223-04

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.02.017 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.02.018