轉化生長因子基因多態性與多發性骨髓瘤的相關性

韓富秋，楊國東，王仕超，董海榮

(呼和浩特市第一醫院檢驗科，內蒙古呼和浩特 010030)

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轉化生長因子基因多態性與多發性骨髓瘤的相關性

韓富秋，楊國東，王仕超，董海榮△

(呼和浩特市第一醫院檢驗科，內蒙古呼和浩特 010030)

摘要:目的探討轉化生長因子(TGF)基因單核苷酸多態性與多發性骨髓瘤(MM)的關系。方法采用病例對照研究，選取多發性骨髓瘤患者55例和健康對照55例，采用聚合酶鏈反應(PCR)-連接酶檢測反應(LDR)進行基因型、等位基因型檢測，并進一步進行測序分型。結果MM患者TGF兩位點基因型頻率、等位基因頻率、聯合單倍體分型中各型的頻率與對照組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論轉化生長因子基因單核苷酸多態性與多發性骨髓瘤的發生以及亞型沒有明顯的相關性。

關鍵詞:多發性骨髓瘤；單核苷酸多態性；轉化生長因子基因

多發性骨髓瘤(MM)是一種B細胞腫瘤，占血液系統惡性腫瘤的15%和總的惡性腫瘤的1%[1]，特點是漿細胞的克隆性增生和分泌，導致單克隆性免疫球蛋白過度產生[2]，從而導致一系列臨床癥狀包括骨病變、貧血和終末器官腎臟疾病[3]。MM的病因是多方面的，包括炎癥、氧化應激、遺傳變異和單核苷酸多態性等[4]。筆者旨在通過研究轉化生長因子與MM的相關性，從遺傳學角度闡明MM的發病機制。

1資料與方法

1.1一般資料病例組來源于2013年4月至2014年9月協和醫科大學附屬醫院MM患者,共55例，其中女26例，男29例。健康對照組55例，其中女29例，男26例。

1.2方法采用Kit法對受試對象的外周血進行基因組DNA的抽提，并檢測總的DNA濃度、純度和完整性，采用聚合酶鏈反應(PCR)擴增SNP位點所在片段，然后取PCR產物進行連接酶檢測反應(LDR)，取多重LDR產物進行測序分析。

1.3統計學處理采用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，組間均數比較采用t檢驗，組間頻數比較用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1臨床指標比較MM患者和健康者的臨床資料對比見表1。

表1　　MM患者和正常對照的臨床資料對比

續表1　　MM患者和正常對照的臨床資料對比

2.2DNA電泳抽提全血基因組DNA，并檢測其完整性。樣本電泳結果顯示樣本質量較為均一，樣本濃度適中。

圖1　　DNA電泳圖譜

2.3 多重PCR擴增在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600儀器上設置擴增程序：95 ℃ 15 min變性，94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 1 min延伸，共35個循環72 ℃ 1 min延伸72 ℃ 7 min保存。

M:標志物；1:樣本；2:樣本。

圖2多重PCR擴增圖譜

2.4PCR產物的連接酶檢測反應在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設置如下程序：95 ℃2 min變性，94 ℃30 s退火，50 ℃2 min連接共35個循環。

2.5測序儀檢測應用Genemapper軟件進行數據分析和基因分型。

2.6基因型及等位基因頻率分布比較見表2。

基因型及等位基因頻率分布比較[n(%)]

MT：multiple myeloma;NT：normotensives。

2.7數據分析應用Genemapper軟件進行數據分析和基因分型。見圖3，列舉部分位點的分型截圖。(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)。

3討論

最近的研究表明，遺傳傾向可能影響腫瘤患者的生存期、與治療相關的癥狀以及與健康相關的生活質量[5-6]。炎癥是闡明腫瘤相關癥狀表達的候選機制[7-8]。當前MM的候選基因研究熱點有白細胞介素6、腫瘤壞死因子以及生長轉化因子等，本研究旨在通過研究生長轉化因子與MM的相關性來闡明其發病機制。

生長轉化因子(TGF)是一類具有多種生物學活性的細胞因子，參與調節細胞的增殖、分化、發育和凋亡等多種生命活動。TGF對腫瘤的作用是極其復雜的。在空間方面，TGF信號通路對腫瘤細胞自身的作用在腫瘤抑制和腫瘤發展機制中有重要意義，又能通過影響腫瘤的微環境(如成纖維細胞、免疫細胞和細胞外基質)來促進或抑制腫瘤的發展和轉移。在時相方面，TGF在腫瘤的進展期可通過多種機制促進腫瘤的侵襲和轉移。TGF信號通路的復雜特性對腫瘤機制的研究和腫瘤的靶向治療提供了全新的機遇和挑戰。

筆者研究了北方地區人群TGF基因位點rs8105161與rs4803455多態性與MM的相關性，發現病例組與對照組間沒有統計學意義(P>0.05)，所以在研究人群中，TGF基因多態性與MM沒有相關性。這與王皓等[9]的研究結論相符，TGF可能在MM發生中起到一定的作用，但該因子基因編碼區多態性并不會影響血漿TGF-β1的濃度，也與MM的發生以及亞型沒有明確的相關性。本研究MM患者CD4+CD25+CD127低、CD4+CD25高、CD127低T細胞與TGF-β的表達水平無明顯相關性，說明TGF-β或許不是導致MM患者體內調節性T細胞增加的重要或唯一因素。

綜上所述，有許多因素如年齡、放射線、種族等都可能影響MM的發生、發展，單一的基因多態性并不足以導致MM的發病，所以有必要進行多因素的聯合研究來進一步明確MM的發病機制。

參考文獻

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[9]王皓，楊再興，高春芳，等．轉化生長因子-β1及其基因多態性與多發性骨髓瘤的關系研究[J]．中國免疫學雜志，2006，22(7)：650-653．

·論著·

Correlation between TGF gene polymorphism and multiple myeloma

HanFuqiu,YangGuodong,WangShichao,DongHairong△

(DepartmentofClinicalLaboratory,HuhehaoteMunicipalFirstHospital,Huhehaote,Neimenggu010030,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between transforming growth factor gene (TGF) single nucleotide polymorphism (SNP) and multiple myeloma (MM).MethodsThe case control study was performed,55 patients with MM and 55 healthy controls were selected.The genotype and allele detections were performed by adopting the polymerase chain reaction (PCR) and the ligase detection reaction (LDR) respectively.Then the sequencing based typing was further conducted.ResultsThere were no statistically significant differences in the two loci genotype frequencies,allele frequencies and genotype frequencies in joint haploid typing between the MM group and the control group(P>0.05).ConclusionSNP of TGF gene has no obvious correlation with the occurrence of MM and subtypes.

Key words:multiple myeloma;single nucleotide polymorphism;transforming growth factor gene

作者簡介：龍國文，男，主任檢驗技師，主要從事檢驗質量控制工作。

收稿日期：(2015-06-08)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.019A

文章編號：1673-4130(2015)24-3554-02