CellaVision DM96在漿膜腔積液有核細胞分類中的應用

張彥平,吳繼博,賀軍濤,張　磊,徐　陽,張王剛

(西安交通大學醫學院，陜西西安 710004)

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CellaVision DM96在漿膜腔積液有核細胞分類中的應用

張彥平,吳繼博,賀軍濤,張磊,徐陽,張王剛△

(西安交通大學醫學院，陜西西安 710004)

摘要:目的探討瑞典CellaVision DM96自動化數字細胞形態學分析系統(DM96)對漿膜腔積液有核細胞分類的能力。方法選取2015年3月西安交通大學第二附屬醫院住院患者漿膜腔積液標本36份，通過日本Sysmex自動推片機SP-1000i和手工推片染色2種方法對36份漿膜腔積液標本進行瑞氏染色，染色后的涂片使用DM96自動化數字細胞形態學分析系統進行有核細胞分類，計算DM96的分類結果與Sysmex XT-4000i結果的一致性和相關性。結果使用DM96檢測漿膜腔積液有核細胞的分類結果與XT-4000i體液模式的分類結果具有較好的一致性，且DM96細胞圖像拍攝清晰，自動化程度高。結論表明DM96型數字細胞形態分析系統是可靠和有效的，對提高漿膜腔積液標本的細胞形態學分析有意義。

關鍵詞:漿膜腔積液；西門子XT-4000i；有核細胞分類

生理情況下正常成人胸腔積液小于20 mL，腹水小于50 mL，主要起潤滑作用一般不易采集到。當漿膜有炎癥、循環障礙、惡性腫瘤侵潤等病變時，漿膜腔液體產生增多并集聚在漿膜腔內，其性質也發生變化，此時稱為漿膜腔積液。根據漿膜腔積液的產生原因及性質的不同，將其分為漏出液與滲出液兩大類[1]。漿膜腔積液有核細胞分類是漿膜腔積液檢驗中的一項重要指標，對漏出液和滲出液的鑒別診斷及多種疾病的診斷，治療和預后判斷均具有重要的意義[2]。

1材料與方法

1.1材料收集2015年3月西安交通大學第二附屬醫院住院患者漿膜腔積液標本36份，其中胸腔積液31份，腹水4份，關節腔穿刺液1份，均置于含有乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)的抗凝管內。

1.2儀器與試劑瑞典CellaVision 公司生產的DM96自動化數字細胞形態學分析儀；日本Sysmex 公司生產的XT-4000i血液體液一體分析儀，配套試劑：稀釋液EPK(批號：G5015)、溶血劑-FBA(批號：R4050)、溶血劑SLS (批號：A4025)；日本Sysmex 公司生產的SP-1000i自動推片染色儀，配套試劑：甲醇(批號：2014102901)；珠海貝索生物技術有限公司生產的瑞氏-吉姆薩染液試劑盒，包括A液瑞氏-吉姆薩染液和B液磷酸鹽緩沖液(批號：414124)。

1.3方法

1.3.1XT-4000i有核細胞分類采用儀器“手工進樣+體液”檢測模式，對漿膜腔積液標本充分混勻后按照儀器操作手冊進行測定，在標本采集后的1 h內檢測完畢。

1.3.2DM96有核細胞分類Sysmex XT-4000i檢測的漿膜腔積液的有核細胞總數大于1 000×106/L的20份血性標本使用SP-1000i 自動推片染色儀染色：選擇手動進樣，儀器自動抓取標本混勻吸樣，經舌型薄膜推片，推片角度可根據標本的黏稠度自動調整，后經甲醛固定，再經微型風扇吹干并在玻片的前端打印二維碼(打印二維碼的涂片能被DM96識別和讀取)，最后由瑞士-吉姆薩染液染色;有核細胞計數小于1 000×106/L的標本因過于稀薄或有絮狀沉淀，SP-1000i不能夠完成推片和固定，故細胞總數小于1 000×106/L或有絮狀沉淀的16份標本均需手工涂片染色：用SP-1000i推出帶有二維碼的空白玻片，將標本1 000 r/min離心15 min，取沉淀物制成均勻薄片，細胞不易固定的，取沉淀的細胞懸液2滴和血清1滴混合制成涂片，于室溫內自然干燥，用瑞氏-吉姆薩染液染色，涂片染色在1 h之內完成。將所制涂片放入DM96，系統自動對標本進行掃描、定位及200個有核細胞的分類，所得結果即DM96有核細胞分類的結果。

2結果

DM96有核細胞分類結果與XT-4000i有核細胞分類結果的相關性。單個核細胞相關性方程為Y=0.899 5X+0.050 5；一致性系數R2=0.842 6，見圖1。

圖1　　2種方法的單個核細胞的相關性分析

多核細胞：相關性方程為Y=0.399 5X+5.003 1;一致性系數為R2=0.842 6，見圖2。通過2種方法所得結果的相關性分析，單個核細胞的一致性R2=0.842 6，多核細胞的一致性R2=0.842 6，認為2種方法進行漿膜腔積液檢測的一致性尚可。

圖2　　2種方法的多核細胞的相關性分析

3討論

Sysmex XT-4000i全自動血細胞分析儀采用半導體激光的流式細胞術，激光照射細胞，由前向散射光強度反映細胞體積信息、側向散射光強度反映細胞內部信息、側向熒光強度反映細胞所含核酸量，利用這些信息對白細胞進行計數和分類[3]。然而此儀器的體液模式只提供了單核、多核和高熒光強度的細胞，高熒光強度的細胞包括巨噬細胞，間皮細胞和惡性細胞，這些細胞并不能直觀的體現出來。在進行紅細胞計數時，只顯示整數，因而紅細胞計數值較粗略，僅可作為參考[4]。

SDM96 由數字掃描成像裝置和裝有CellaVision 細胞形態分析軟件的計算機組成，是一種全自動細胞形態分析系統，首先在10倍物鏡下掃描血涂片找到白細胞單細胞層并定位對焦，再以城垛方式跟蹤掃描、記錄每個白細胞的位置，然后于100倍油鏡下拍照并對細胞進行切分、提取特征，最后通過人工神經網絡系統(ANN)分類各種白細胞[5]。

DM96型系統可自動識別和分類中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、破碎細胞和所有的雜質；其他的細胞被放置在該類別的“其他”，包括漿細胞、有核紅細胞、間皮細胞和腫瘤細胞[6]，相比XT-4000i血液分析儀這些細胞能夠從計算機中更為直觀的表現，例如通過DM96對20份血性標本的細胞分類中，檢出間皮細胞的有2例，惡性細胞的有1例，并在穿刺液中檢見大量細菌，所檢見的細胞類型和臨床診斷基本相符，所以通過DM96有核細胞分類和檢出的某個具體的病理細胞，可以及時向臨床報告，為臨床的下一步檢查和早期診斷治療提供依據，這是XT-4000i無法做到的。

但其缺點在于積液細胞數目和蛋白的含量使得DM96在檢測漿膜腔積液標本時有一定的局限性：積液細胞數目過少，蛋白含量過高易形成凝塊，會導致系統無法識別和分類細胞，這也是大多數儀器不能完成漿膜腔積液計數分類自動化的原因[7-15]。所以，DM96自動化數字細胞形態學分析系統對非血性漿膜腔積液標本有核細胞計數有一定的局限性，更適用于對血性(病理性)漿膜腔積液標本的分析，對血性標本的分析也更優于XT-4000i血液分析儀。

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·論著·

Application of CellaVision DM96 in nucleated cells classification of serous cavity effusion

ZhangYanping,WuJibo,HeJuntao,ZhangLei,XuYang,ZhangWanggang△

(SchoolofMedicine,Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the capacity of the Sweden CellaVision DM96 automatic digital cell morphology analysis system (DM96) in nucleated cell classification of serous cavity effusion.Methods36 specimens of serous cavity effusion were selected from the inpatients of Second Affiliated Hospital of Xi ′an Jiaotong University in March 2015 and performed the Wright staining by the two kinds of method,the Japanese Sysmex SP-1000Ⅰ automatic smearing machine and manual smearing,after staining,the smear was performed the nucleated cells classification by DM96.The consistency and relevance of the classification results by DM 96 with those by the Sysmex XT-4000i were calculated.ResultsThe classification results by DM96 had better consistency with the results by XT-4000i,moreover the cell images taking by DM96 were clear with high automatic degree.ConclusionThe DM96 automated digital nucleated cell morphology analysis system is reliable and effective,and has a significance for improving the cellular morphological analysis of serous cavity effusion specimen.

Key words:serous cavity effusion;Sysmex XT-4000i;nucleated cell sorting

收稿日期：(2015-08-19)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.028A

文章編號：1673-4130(2015)24-3574-02