甘肅省56萬例新生兒苯丙酮尿癥篩查結果分析

王　興，郝勝菊，陳丕亮，馮　暄，閆有圣△

(甘肅省婦幼保健院：1.醫學遺傳學中心；2.新生兒疾病篩查中心，甘肅蘭州 730050)

?

甘肅省56萬例新生兒苯丙酮尿癥篩查結果分析

王興1，郝勝菊1，陳丕亮2，馮暄1，閆有圣1△

(甘肅省婦幼保健院：1.醫學遺傳學中心；2.新生兒疾病篩查中心，甘肅蘭州 730050)

摘要:目的回顧性分析甘肅省567 691例新生兒苯丙酮尿癥篩查結果，了解甘肅省新生兒苯丙酮尿癥(PKU)的發病情況，為甘肅省PKU的防治提供基礎數據。方法標本為甘肅省新生兒篩查中心于2009～2014年收集的567 691例新生兒足跟血濾紙干血斑樣品，用熒光定量法檢測苯丙氨酸水平，并采用尿碟呤譜分析及苯丙氨酸羥化酶(PAH)基因突變檢測進行鑒別診斷。結果在567 691例新生兒中，確診PKU患兒166例；總體檢出率為1/3 420，其中經典PKU 119例(71.7%)，中等型PKU 33例(19.9%)，輕型PKU 14例(8.4%)。結論甘肅省PKU發病率遠高于全國平均發病水平，以經典型PKU發病為主，應成為PKU重點防治地區。

關鍵詞:新生兒疾病篩查；苯丙酮尿癥；熒光定量法；甘肅

苯丙酮尿癥(PKU)是一種常染色體隱形遺傳病，患兒編碼苯丙氨酸羥化酶(PAH)的基因突變或缺失，導致肝臟內PAH活性減弱或喪失，使苯丙氨酸不能轉變成酪氨酸，苯丙氨酸及其酮酸在體內堆積進而引發該疾病。臨床表現不均一，其主要臨床特征為智力、體格發育落后，精神行為異常等，患兒在臨床癥狀出現前可通過特殊飲食治療，減輕對神經系統的損傷，防止癡呆等嚴重后果的發生[1]。因此，早發現、早確診、早治療就顯得尤為重要。新生兒疾病篩查是目前PKU早期診斷的重要手段之一，國內于上世紀80年代開始PKU的早期篩查，并在全國逐漸推廣，甘肅省PKU篩查起步于上世紀末，近幾年篩查覆蓋率不斷提高并取得了一定的成果。現將2009～2014年甘肅省新生兒疾病篩查中心實驗室的567 691例新生兒PKU篩查結果進行統計分析，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料甘肅省新生兒篩查中心于2009年1月至2014年12月接收新生兒篩查共567 691例，分別來自于蘭州市、白銀市、武威市、酒泉市、定西市、臨夏州和甘南州6個地區。用于篩查的足跟血濾紙片干血斑標本采集由接產單位于新生兒出生72 h并充分哺乳后按照《新生兒疾病篩查技術規范》的要求進行：采集新生兒足跟血，使用專用濾紙片(Schleicher&Schuell 903濾紙)收集3個直徑大于8 mm的血斑，室溫下自然晾干，2～6 ℃存放，1周內送至新生兒篩查中心。

1.2儀器與試劑檢測儀器主要包括PerkinElmer公司的Wallac 1420VIC-TOR分析儀、震蕩儀、恒溫孵育箱、八道移液器。檢測試劑采用芬蘭雷勃公司苯丙氨酸熒光檢測試劑盒。質控品包括芬蘭雷勃公司苯丙氨酸熒光檢測試劑盒所含有的2種不同苯丙氨酸濃度的干濾紙標準血斑質控品及國家原衛生部臨檢中心發放質控品。

1.3方法干血斑苯丙氨酸測定嚴格按照新生兒苯丙氨酸定量檢測試劑盒內提供的實驗步驟進行操作。用打孔器打取直徑3.0 mm的標準品、質控品和待測樣品血斑置于96孔細胞培養板內，各孔加入80%乙醇80 μL，室溫下1 000 r/min振蕩萃取30 min。每孔吸取50 μL萃取液移至試劑盒內自帶96孔反應白板，加入反應混合液50 μL(琥珀酸緩沖液、氨基酸熒光增強液、茚三酮試劑按5∶1∶2的比例現用現配)室溫振蕩混勻1 min，放入60 ℃恒溫孵育箱孵育60 min。每孔加入4 ℃銅試劑200 μL，室溫靜置15 min。在15 min內用Wallac 1420VIC-TOR分析儀進行檢測(激發波長390 nm，發射波長485 nm)，其熒光強度與苯丙氨酸濃度(mg/dL)成正比。

1.4質量控制室內質量控制：每一批實驗均進行定標校準，每一個反應板都帶有雷勃公司提供的質控品進行質量評估，保證實驗結果的準確性；室間質量評價：每年參加原衛生部臨檢中心新生兒血清苯丙氨酸檢測的室間質評，并取得合格證。

1.5PKU診斷和分型

1.5.1初篩陽性及召回復查凡初篩干濾紙血苯丙氨酸濃度大于或等于2.0 mg/dL(120 μmol/L)為可疑陽性，立即由新生兒篩查中心通知接產單位及家長本人，對可疑陽性病例采集第2張血片并送回新生兒疾病篩查中心進行復查，復查干濾紙血苯丙氨酸濃度仍高于2.0 mg/dL可判斷為持續性高苯丙氨酸血癥陽性。

1.5.2PKU診斷對持續性高苯丙氨酸血癥患兒行尿碟呤譜、PAH基因突變分析進行確診，排除四氫生物碟呤缺乏癥。血苯丙氨酸濃度大于6 mg/dL(>360 μmol/L)，診斷為PKU;血苯丙氨酸濃度為2～6 mg/dL(120～360 μmol/L)診斷為高苯丙氨酸血癥。

1.5.3PKU分型根據確診的PKU患兒在正常蛋白質飲食情況下，血苯丙氨酸濃度增高的程度將其分為以下3型：血苯丙氨酸濃度大于20 mg/dL(>1 200 μmol/L)為經典型PKU，血苯丙氨酸濃度為10～20 mg /dL(600～1 200 μmol/L)為中等型PKU，血苯丙氨酸濃度為6～<10 mg/dL(360～<600 μmol/L)為輕型PKU。

1.6統計學處理采用SPSS11.5軟件，對各年度間的發病率和各地區間的發病率進行比較，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1甘肅地區PKU篩查的總體情況甘肅省新生兒疾病篩查中心實驗室共篩查567 691例新生兒樣品，確診PKU患兒166例，總體檢出率為1/3 420；其中經典PKU 119例占71.7%(119/166)，中等型PKU 33例占19.9%(33/166)，輕型PKU 14例占8.4%(14/166)。

2.2各年度的PKU檢出情況各年度間的PKU發病率比較差異無統計學意義(χ2=1.698，P>0.05)，見表1。

表1　　甘肅省2009～2014年新生兒PKU篩查情況

2．2不同地區PKU檢出情況不同地區之間PKU發病率比較，差異無統計學意義(χ2=5.918，P>0.05)，見表2。

表2　　甘肅省2009～2013年各地州市新生兒

續表2　　甘肅省2009～2013年各地州市新生兒

3討論

PKU是遺傳代謝病中較為常見的一種，1934年挪威科學家Folling首次對該病進行描述。隨著人們對PKU的認識不斷加強，1953年德國有學者使用低苯丙氨酸奶粉治療PKU獲得成功，并提出盡早治療對PKU治療效果至關重要，1961年美國科學家發明細菌抑制法對新生兒群體進行PKU篩查，實現了在PKU患兒出現臨床癥狀前的早診斷早治療目標[2]。實踐證明，通過新生兒疾病篩查能有效降低PKU的危害，世界各國也紛紛將新生兒PKU檢測納入常規篩查項目。上世紀90年代我國頒布的《中華人民共和國母嬰保健法》將新生兒PKU篩查列入國家法規，旨在推進新生兒中該疾病的篩查工作。

甘肅省地處我國西北地區，新生兒篩查工作起步較晚，從1999年開始推廣新生兒篩查，2006年成立甘肅省新生兒疾病篩查中心，2009年在省內實現全面開展新生兒PKU篩查項目。在甘肅省各級政府及醫療衛生單位的共同努力下，新篩普及率逐年上升，本實驗室年篩查量也由2009年的25 482例上升至2014年的124 904例。2009~2014年，6年間送往甘肅省新生兒疾病篩查中心實驗室的甘肅主要7個市(州)的567 691例篩查中，共確診PKU患兒166例，總體發病率為1/3 420，高于全國1/11 614的平均發病率[3]，明顯高于廣州[4]、福建[5]、湖南[6]等南方省市地區的發病率，與同屬西北地區的寧夏[7]、新疆[8]發病率相近，符合我國PKU發病率北方人群高于南方人群的特點[9]。同時，由于本院PKU患兒主要依靠PAH基因突變分析進行確診，部分樣品外送北京、上海進行四氫生物蝶呤缺乏癥鑒別，因此四氫生物蝶呤缺乏癥無法獲得準確數據，但根據PKU血清學分型顯示甘肅地區PKU發病以經典型為主，占71.7%，符合我國PKU發病以經典型為主的特點。各年間PKU發病率經統計分析無明顯差異，說明甘肅省PKU發病率一直處于高發病率水平，是我國PKU高發病地區；7個市(州)的發病率為1/2 268~1/4 415之間，但統計學分析顯示各地區間PKU發病率無明顯差異。這與本實驗室之前報道的甘肅地區PKU發病率為1/2 320[10]和甘肅張掖地區報道的PKU發病率為1/4 013[11]的統計數據相吻合。7個地區總體發病率為1/3 420，略高于與之前報道的1/4 830[12]；低于蘭州大學第一附屬醫院中心實驗室報道的1/1 053~1/1 666的發病情況[13-14]，這可能與不同新生兒疾病篩查實驗室所接受的樣品來自不同地區有關，而這種差異是否與甘肅省地域狹長、民族眾多，各地區存在特有的遺傳背景有關，還有待進一步的分子流行病學研究。

新生兒篩查工作涉及多部門、多單位間的相互合作，從樣品采集、實驗室篩查到疑似陽性患兒的召回和治療環節較多，每一個環節都會影響到新篩工作的質量。目前篩查樣品主要依靠干血片法收集送檢，樣品采集時存在的反復滴滲及新生兒采血前給予高蛋白高氨基酸補液都會增加假陽性率，給家屬帶來不必要的心理負擔。同時新生兒哺乳不足、采血時間提前及血片存放送檢條件不合格都會增加漏篩的風險。所以，完善的樣品采集、保存和送檢制度是確保實驗結果準確的前提。而對疑似陽性患兒的召回確診和治療是進行PKU篩查工作的根本目的。本省新生兒篩查工作還存在初篩疑似陽性患兒召回率和確診患兒的治療率較低的問題，尤其是苯丙氨酸值為2~6 mg/dL的疑似陽性患兒召回率較低[11]，這可能是由于此濃度范圍內的新生兒需要定期隨訪而無需特殊治療，易被家長忽略。本實驗室對部分輕度高苯丙氨酸血癥患兒的基因檢測顯示，均有不同程度的基因突變，為PKU突變基因攜帶者。進一步的確診不僅能提高患兒的康復和生存質量，同時能為夫妻雙方的再生育及患兒將來的發育提供更好的遺傳咨詢；而確診患兒治療率較低與甘肅地區整體經濟發展水平較低，許多PKU患兒家庭無法負擔長期的醫療費用有關。雖然近年來甘肅省各級政府和醫療單位為新生兒疾病篩查事業付出了極大努力，也取得了不少的成果，但甘肅省是我國PKU高發地區，在減少出生缺陷、提高人口素質的方面還需要社會各界的大力支持和幫助。

參考文獻

[1]顧學范.新生兒代謝性疾病篩查[M].北京:人民衛生出版社，2004:92-106.

[2]Robin A Williams,Cyril DS Mamotte,John R Burnett.Phenylketonuria:An Inborn Error of Phenylalanine Metabolism[J].Clin Biochem Rev,2008,29(2):31-41.

[3]Xiao-Tong Shi,Juan Cai,Peng-Wei Jing,et al.Newborn Screening for Inborn Errors of Metabolism in Mainland China:30 Years of Experience[J].JIMD Reports,2012:31(1):79-83.

[4]李蓓,江劍輝,曹偉鋒，等.廣州市1071203例新生兒苯丙酮尿癥篩查結果回顧性分析[J].中國婦幼保健,2011,26(6):852-854.

[5]朱文斌,王振南,陳涵強，等.福建省新生兒苯丙酮尿癥篩查狀況分析[J].海峽預防醫學雜志,2002,8(4):15-16.

[6]鄢慧明,胡浩,王華,等.2001~2011年湖南省新生兒苯丙酮尿癥(PKU) 篩查結果分析及體會[J].中國優生與遺傳雜志,2013,21(4):96-98.

[7]楊銀鳳,馮鋒,湯旭鋼,等.寧夏2007~2009年新生兒苯丙酮尿癥、先天甲狀腺功能減低癥篩查及治療情況分析[J].寧夏醫科大學學報,2010,32(9):1011-1013．

[8]李之光,薛淑媛,馬光娟,等.新疆地區40216例新生兒苯丙酮尿癥篩查結果分析[J].中國優生與遺傳雜志,2011,19(5):84-85.

[9]顧學范,王治國.中國580萬新生兒苯丙酮尿癥和先天性甲狀腺功能減低癥的篩查[J].中華預防醫學雜志,2004,38(2):99-102.

[10]胡秀琴,郝勝菊,閆有圣,等.甘肅地區13 920例新生兒高苯丙氨酸血癥篩查和診斷分析[J].中國優生優育,2008,14(4):195-197.

[11]強燕.張掖市32103例新生兒代謝性疾病篩查結果分析[J].衛生職業教育,2014,32(4):87-88.

[12]陳丕亮,陳亞.2010~2012年甘肅省新生兒疾病篩查狀況及分析[J].中國優生優育,2013,19(6):470-472.

[13]趙麗,檀乃民,周蘭霞，等.甘肅省新生兒苯丙酮尿癥篩查結果分析[J].中國婦幼保健,2003,18(4):221-222.

[14]周蘭霞,趙麗,杜曉云，等.甘肅省6萬例新生兒苯丙酮尿癥篩查和治療分析[J].中國兒童保健雜志,2008,16(1):76-78.

·論著·

Analysis on screening results of phenylketonuria among 567 691 neonates in Gansu Province

WangXing1,HaoShengju1,ChengPiliang2,FengXuan1,YanYoushen1△

(1.GeneticsCenter;2.NeonatalDiseasesScreeningCenter,GansuProvincialMaternaland

ChildHealthCareHospital,Lanzhou,Gansu730050,China)

Abstract:ObjectiveTo retrospectively analyze the screening results of phenylketonuria(PKU) among 567 691 neonates in Gansu Province to understand the prevalence situation of PKU and provide the basic data for preventing and treating PKU in Gansu Province.Methods567 691 samples of neonatal dried heel blood spots were collected by Gansu Province Newborn Screening Center from 2009 to 2014 and the phenylalanine (Phe) level was quantitatively determined by the fluorescence quantification method.The identification was performed by using the urine pterine profile analysis and phenylalanine hydroxylase(PAH) gene mutation detection.ResultsAmong 567 691 neonates,166 neonates were diagnosed as PKU,the total detection rate was 1/3 420,in which 119 cases (71.7%) were classic PKU,33 cases (19.9%) were moderate PKU and 14 cases (8.4%) were mild PKU.ConclusionThe morbidity rate of PKU in Gansu Province is much higher than the national average incidence level,which is dominated by classic PKU.Therefore Gansu Province should become the major area of PKU prevention and treatment.

Key words:neonatal screening;phenylketonuria;fluorescence quantification；Gansu

收稿日期：(2015-06-22)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.034A

文章編號：1673-4130(2015)24-3588-03