標本類型對電化學發光法檢測心臟標志物結果影響初探

段業芬

(四川省宜賓市第四人民醫院檢驗科，四川宜賓 644000)

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標本類型對電化學發光法檢測心臟標志物結果影響初探

段業芬

(四川省宜賓市第四人民醫院檢驗科，四川宜賓 644000)

摘要:目的探討不同抗凝劑對電化學發光法檢測心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)質量(CK-MBmass)、氨基末端B型鈉尿肽原(NT-proBNP)的影響。方法采用羅氏cobas e411電化學發光免疫分析儀分別檢測29例住院患者血清、乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)抗凝血漿及肝素鋰抗凝血漿cTnT、Myo、CK-MBmass及NT-proBNP水平，利用統計學方法比較各組心臟標志物差異。結果肝素抗凝組與血清組4項結果差異均無統計學意義(t分別為-1.975、0.043、0.706、1.097，P>0.05)。EDTA-K2抗凝組與血清組cTnT結果差異無統計學意義(t值分別為-1.208，P>0.05)，Myo、CK-MBmass及NT-proBNP結果差異有統計學意義(t值分別為2.831、3.920、6.293，P<0.05)。結論肝素鋰抗凝血漿與無抗凝劑血清檢測心臟標志物結果差別無臨床意義，能夠縮短心臟標志物測定的樣品周轉時間(TAT)，是急診心臟標志物檢測的首選。

關鍵詞:抗凝劑；電化學發光法；肌鈣蛋白T；肌紅蛋白；肌酸激酶同工酶MB型；氨基末端B型鈉尿肽原

心血管疾病是中國城市人群的常見疾病和死亡原因之一，而心臟標志物的檢測是心血管疾病早期診斷和鑒別診斷的重要輔助手段之一。有研究結果表明，從起病到正確干預的時間與并發癥、生存率直接相關。例如急性心肌梗死(AMI)發病后1 h內得到治療，死亡率約為1%；若6 h后才得到救治，死亡率將達到10%～12%[1]。這就要求臨床實驗室迅速向臨床發出報告，從而提高診斷效率。縮短檢測周轉時間便成了實驗室工作者研究的重點。臨床工作中，一般推薦使用血清標本檢測心臟標志物水平，但血清標本的標本前處理時間較長，不利于報告的迅速發出。使用血漿能有效縮短標本預處理時間，但能否替代血清進行心臟標志物檢測尚需進行研究，國內外雖有抗凝劑對心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、肌紅蛋白(Myo)檢測影響的報道[2-8]，但各家結論不一致。對此，筆者檢測了29份血清、乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)抗凝血漿及肝素鋰抗凝血漿標本，比較各組心臟標志物含量，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇宜賓市第四人民醫院住院患者共29例，其中男20例，女9例，年齡28～80歲。所選患者心臟標志物濃度涵蓋低中高水平。

1.2儀器與主要試劑羅氏cobas e411電化學發光免疫分析儀及配套cTnT、Myo、肌酸激酶同工酶(CK-MB)質量(CK-MBmass)及氨基末端B型鈉尿肽原(NT-proBNP)原裝試劑、校準品、質控物。嚴格按照標準操作規程進行操作。真空采血管為成都普什醫藥塑料包裝有限公司提供紫頭管(內含EDTA-K2，批號1403016A)，綠頭管(內含肝素鋰，批號1401023A)，紅頭管(無添加劑，批號1312018C)。

1.3方法收集受試者靜脈血6 mL，分別注入含EDTA-K2抗凝劑(EDTA組)、肝素鋰抗凝劑(肝素組)及無添加劑(血清組)的真空采血管中，每管約2 mL。抗凝標本混勻后2 260×g離心5 min分離血漿，無添加劑的標本大約30 min血液凝固、血凝塊回縮后，同樣離心條件分離血清。立即上機測定cTnT、Myo、CK-MBmass及NT-proBNP水平。測定標本前先做質控，結果在控，確保儀器性能可靠。所有數據均重復平行測定2次取平均值。

2結果

2.1數據分布經K-S檢驗，EDTA抗凝組、肝素抗凝組及血清組的cTnT、Myo、CK-MBmass、NT-proBNP數據均為偏態分布(P<0.05)，結果見表1。各組數據取以10為底的對數后轉化為正態分布資料(P>0.05)，結果見表2。

2.2EDTA組與血清組心臟標志物結果的比較與血清組比較，EDTA-K2抗凝組cTnT差異無統計學意義(t=-1.208，P=0.237)；Myo、CK-MB mass和NT-proBNP 差異有統計學意義(t值分別為2.831、3.920、6.293，P<0.05)。計算Myo、CK-MB mass和NT-proBNP與血清偏差，CK-MB mass平均偏差為5.69%，最大偏差11.00%，Myo平均偏差為5.48%，最大偏差為9.70%，NT-proBNP平均偏差為5.08%，最大偏差為10.80%，均明顯超過羅氏試劑盒提供的日內精密度。

2.3肝素組與血清組心臟標志物結果的比較與血清組比較，肝素組cTnT、Myo、CK-MB mass和NT-proBNP差異均無統計學意義(t值分別為-1.957、0.043、0.706、1.097，P>0.05)。

表1　　cTnT、Myo、CK-MBmass及 NT-proBNP 測定結果[M(P25,P75)]

表2　　cTnT、Myo、CK-MBmass及 NT-proBNP 取對數后結果±s)

*:P<0.05,與血清組比較。

3討論

肝素抗凝血漿、EDTA抗凝血漿及血清均為羅氏心臟標志物檢測試劑盒認可的樣品類型，但并未說明三者間檢測有無差別。急診生化項目檢測中，EDTA由于其絡合鈣鎂，影響酶活性檢測[9]，一般不用于生化項目檢測。常使用肝素抗凝血漿或血清作為急診生化檢測標本[10-12]。肝素抗凝血漿(一般選用肝素鋰)只需一管血即可進行多項目檢測，且能縮短樣品周轉時間(TAT)，有利于心血管事件快速診斷。

本研究結果顯示，肝素抗凝血漿與血清檢測心臟標志物結果差異無統計學意義(P>0.05)，可以使用肝素抗凝血漿代替血清進行檢測。與國內外多數報道相一致[2-4]，與黃婷等[5]在研究中指出肝素抗凝血漿檢測BNP的結果比EDTA抗凝血漿偏高的結論不一致，黃婷等采用的是ADVIA Centaur-XP全自動化學發光儀及其配套試劑，本實驗以Roche cobas e411電化學發光免疫分析儀及配套試劑為基礎，試劑成分差異可能照成結果的不同。也未出現陳望榮等[6]報道肝素抗凝管檢測CK-MB時出現負值的情況[7]，主要在于他們采用的是檢測CK-MB活性而非CK-MB的質量，肝素帶有負電荷，CK-MB的活性部位中的氨基酸殘基容易與帶有負電荷的肝素結合失去活性而出現了負值。

本研究也表明EDTA-K2抗凝血漿與血清對電化學發光法檢測Myo、CK-MB mass和NT-proBNP結果有較大的差異，而檢測cTnT差異小。這與Daves等[2]報道EDTA抗凝血漿可作為血清替代標本檢測cTnT的觀點一致，與Dupuy等[4]結論不一致，這可能由于采用檢測心臟標志物的方法不同造成結論相悖。本實驗說明，EDTA-K2抗凝血漿不適合代替血清檢測心臟標志物，如實際工作中需要采用EDTA-K2抗凝血漿檢測，必須制訂其自身的參考區間。

本試驗初步探明了肝素抗凝血漿、EDTA抗凝血漿以及血清檢測心臟標志物結果的差別，但由于心臟標志物檢測所需費用高，本實驗選擇的樣本量偏少，同時抗凝劑量對心臟標志物檢測的影響也有待于進一步研究。

綜上所述，肝素抗凝標本與EDTA抗凝標本及血清標本相比，能縮短TAT，減少患者抽血數量，另外還可以減少溶血，減少樣品放置造成的誤差，心臟標志物檢測結果與血清差異無臨床意義，是急診心臟標志物檢測首選標本類型。

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·論著·

Primary investigation on effect of different sample types on detection results

of electrochemiluminescence for detecting heart markers

DuanYefen

(DepartmentofClinicalLaboratory,YibinMunicipalFourthPeople′sHospital,Yibin,Sichuan644000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the effect of different anticoagulants on the results of the electrochemiluminescence method for detecting cardiac troponin T(cTnT),myoglobin(Myo),creatine kinase isoenzyme mass (CK-MBmass) and N-terminal pro-type natriuretic peptide (NT-proBNP).Methods The levels of cTnT,Myo,CK-MB mass and NT-proBNP in serum,EDTA-K2anticoagulation plasma and heparin lithium anticoagulation plasma from 29 patients were measured by the Roche cobas e411 electrochemiluminescence immunity analyzer.ResultsThe results of cTnT,CK-MBmass,Myo and NT-proBNP had no statistical differences between the heparin lithium anticoagulation plasma group and the serum group (t=-1.975,0.043,0.706,1.097,P>0.05).The results of cTnT had no statistical difference between the EDTA-K2anticoagulation plasma group and serum group,however the results of CK-MBmass,Myo and NT-proBNP showed statistically significant differences (t=2.831,3.920,6.293,P<0.05).ConclusionThe detection results of heart markers levels have no clinical difference between the heparin lithium anticoagulation plasma and non-anticoagulant serum,which can shorten the turn-around time(TAT) of heart markers detection and is the first choice for emergent heart markers detection.

Key words:anticoagulant;electrochemiluminescence;troponin T;creatine kinase isoenzyme mass;N-terminal pro-type natriuretic peptide

作者簡介：何恒兵，男，主管檢驗技師，主要從事臨床生物化學與檢驗的研究。

收稿日期：(2015-08-08)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.035A

文章編號：1673-4130(2015)24-3591-03