常規肝功酶法項目在POCT分析儀上的抗干擾性能初步評價

王　玲，孟高樂，鞠春影，李建路，張桂春，陳麗娜

(1.遼寧省沈陽市興城療養院檢驗科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊醫院檢驗科,吉林長春 130052；

3.解放軍第313醫院檢驗科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊44分隊,吉林長春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

?

常規肝功酶法項目在POCT分析儀上的抗干擾性能初步評價

王玲1，孟高樂2，鞠春影3，李建路4，張桂春5，陳麗娜5

(1.遼寧省沈陽市興城療養院檢驗科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊醫院檢驗科,吉林長春 130052；

3.解放軍第313醫院檢驗科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊44分隊,吉林長春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

摘要:目的對天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)在POCT分析儀上的抗干擾性能進行初步評價。方法根據CLSI EP7-A2文件，對AST、ALT 和GGT進行干擾評價試驗。結果配對差異試驗結果顯示：342 μmol/L 結合膽紅素(CB)、342 μmol/L 非結合膽紅素(FB)、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L血紅蛋白(Hb)、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb 為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36；進一步的劑量效應試驗顯示，Hb對低濃度的GGT檢測會產生一定的線性干擾效應。結論POCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強的抗干擾能力，能夠滿足臨床應用。

關鍵詞:天冬氨酸轉氨酶；丙氨酸轉氨酶；γ-谷氨酰轉移酶；抗干擾

基于微流控芯片技術的即時檢驗技術(POCT)已成為當前檢驗醫學發展的潮流和熱點，主要特點是快速得出結果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術的進步，以及人們對疾病的認識及治療水平提高的要求，POCT逐漸受到關注[1]。微流控芯片技術是21世紀最為重要的前沿技術之一，它把生物、化學、醫學分析過程中的樣品制備、反應、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上[2]，自動完成分析全過程。將微流控芯片技術引入到POCT設備，開創了POCT發展的新局面。結合微流控芯片技術的POCT分析儀兼具高準確度、低需血量、操作簡單、檢測試劑用量少、成本低等優點，非常適用于中國這樣具有龐大基層醫療系統且試劑使用量極大的國家。因此建立操作簡易、價格低廉、實時報告的POCT分析系統對發揮廣大基層醫院在疾病預防及診療中的作用有重要的意義。

本研究是對寧波美康保生生物醫學工程有限公司所研發的POCT分析儀及配套的試劑盤片套餐中的天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)項目的抗干擾性能進行評價，確定是否適合臨床推廣使用。

1材料與方法

1.1材料天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)凍干粉末。

1.2儀器與試劑

1.2.1POCT分析儀及試劑寧波美康保生生物醫學工程有限公司的POCT分析儀及其配套的試劑盤片，其中試劑盤片含有AST、ALT、GGT項目的檢測試劑，試劑以凍干粉末的形式存在，且每一個試劑盤片僅供單人單次使用。

1.2.2POCT分析儀操作將試劑盤放置于POCT分析儀試劑盤倉內，用移液槍將170 μL的樣品通過盤片上的樣本孔注入試劑盤片，蓋上儀器的上蓋，執行檢測程序以完成檢測，一次測試同時得到AST、ALT、GGT的結果。

1.2.3干擾物質干擾物質FB、CB均購于百靈威科技有限公司，Vc、Hb和乳糜分別購于上海生工生物工程有限公司、上海瑞齊生物科技有限公司和華瑞制藥有限公司。

1.2.3.1基礎樣本準備參考EP7-A2文件推薦的分析物水平，每個分析物選擇兩個濃度[3]。AST、ALT低值72～88 U/L，高值360～440 U/L，GGT低值90～100 U/L，高值450～550 U/L的新鮮血清(無溶血、黃疸和脂血)作為基礎樣本。

1.2.3.2干擾物貯存液準備在弱光下，用0.1 mol/L NaOH配制6.84 mmol/L FB、用蒸餾水配制6.84 mmol/L CB溶液，并分裝于棕色試劑瓶中，避免在自然光下長期暴露； 用冰水配制0.6 g/L 的Vc儲存液，配制過程中最大限度避免接觸空氣，兩個小時之內所有測試應完成；用蒸餾水分別配制40 g/L 的Hb溶液，29000濁度的乳糜樣本[3]。

1.3方法

1.3.1配對差異試驗

1.3.1.1干擾血清的配制用基礎樣本按照1∶20比例稀釋5種干擾物的貯存液和空白液分別作為測試樣本和對照樣本，稀釋后測試樣本中干擾物質FB、CB、Vc、Hb和乳糜的濃度分別是342 μmol/L、342 μmol/L、0.03 g/L、2 g/L和1450濁度。

1.3.1.2重復次數的確定計算最大允許干擾值(dmax)/批內標準差(s)比值(dmax/s)，查dmax/s與重測次數對應表(見表1)，得出高低2個濃度水平重復測定次數。其中s由基礎樣本重復測定20次計算得到；dmax為各項目臨床意義差別標準，根據AST、ALT和GGT的臨床意義差別標準均定為10%[3]。根據EP7-A2文件要求以交互順序進行測定并進行干擾效應分析。

表1　　95%的置信限和檢驗效能檢測不同的干擾

1.3.2干擾劑量效應試驗參考EP7-A2文件，以高濃度樣本和低濃度樣本按比例混合成5個系列濃度樣本，按照升序-降序-升序順序重復測定3次。根據EP7-A2文件進行劑量效應分析。

2結果

2.1配對差異試驗AST低濃度基礎樣本測定均值為75.5 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為365.2 U/L；ALT低濃度基礎樣本測定均值為84.1 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為434.8 U/L； GGT低濃度基礎樣本測定均值為104.0 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為464.8 U/L。計算可得，AST低濃度基礎樣本dmax為7.55，dmax/s為4.91；高濃度基礎樣本dmax為36.51，dmax/s為12.56；ALT低濃度基礎樣本dmax為8.41，dmax/s為4.62；高濃度基礎樣本dmax為42.48，dmax/s為15.02；GGT低濃度基礎樣本dmax為10.40，dmax/s為4.98；高濃度基礎樣本dmax為46.48，dmax/s為10.00。查對應表可知，AST、ALT和GGT高、低濃度水平的重測次數均為3次。

342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。結果見表2～7。

表2　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對低濃度 AST 測定的干擾

表3　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 AST 測定的干擾

表4　　FB、CB、Vc、Hb和乳糜對低濃度 ALT 測定的干擾

表5　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 ALT 測定的干擾

表6　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對低濃度 GGT 測定的干擾

表7　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 GGT 測定的干擾

2.2劑量效應試驗結果顯示，Hb對高濃度GGT測定可產生線性干擾，干擾效應結果見表8，其線性方程式為Y=10.133X+101.667，R2=0.961，見表8、圖1。

表8　　Hb對高濃度GGT檢測的干擾劑量效應結果

-：無數據。

圖1　　Hb對低濃度GGT干擾的劑量效應圖

3討論

POCT是一項新興的技術領域，主要特點是能快速得出結果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術的進步以及人們對疾病的認識及治療水平要求的提高，POCT逐漸受到關注。近年來，隨著微流控芯片加工技術的迅速發展和微流控分析方法研究的不斷深入，微全分析系統已將醫療檢測試驗室的部分功能轉移到便攜式的POCT檢測設備中，基于微流控芯片技術的POCT技術可將血球血清分離、血清稀釋、測定等步驟通過芯片自動化作業完成，可達到多種標記同步檢測的目的，實現了少量樣品即可分析、操作簡便、無交叉污染、可自動化作業的目標，開創了POCT發展的新局面[1,4]。

本試驗根據文件[5-7]，對POCT分析儀配套的試劑盤片套餐中的AST、ALT、GGT項目進行抗干擾試驗，從影響AST、ALT、GGT檢測的樣本中常見的干擾物質考慮，選擇342 μmol/L FB、342 μmol/L CB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb和1450濁度的乳糜為干擾物測試濃度，配對差異試驗結果顯示：342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb 為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。進一步的劑量效應試驗顯示，Hb對低濃度的GGT檢測會產生一定的線性干擾效應。

另外，試驗顯示，干擾物質乳糜對檢測結果均沒有影響，這方面還需要進一步商榷。本試驗的POCT分析儀是利用離心力結合微流控技術進行檢測分析的，結合觀察測試后的試劑盤，乳糜樣本均被離心力除去。另外一方面，臨床脂血樣本，猜測也會通過同樣的離心方式被除去部分，不過需要進一步的試驗進行驗證。

Hb在GGT反應波長下有一定程度的吸光度增高[8]，而本試驗結果顯示Hb對低濃度的GGT檢測會產生一定的線性干擾效應。結合POCT本身所具有的個性化特點，后期在儀器設計中進行優化，即對樣本進行初步篩查，溶血程度嚴重的樣本被判定為不合格樣本，需重新取樣。

綜上所述，POCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強的抗干擾能力，再結合POCT儀器的個性化特點，能夠滿足臨床應用。

參考文獻

[1]Peter B.L,Carolin M,Alice S,et al.Point-of-care testing (POCT):Current techniques and future perspectives[J].Trends in Analyt Chem,2011,30(6): 887-898.

[2]林炳承,秦建華.微流控芯片實驗室[M].北京:科學出版社,2006:2-10.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP7-A2 Interference Testing in Clinical Chemistry[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2002．

[4]杜晶輝,劉宗彬,張望.快速分選富集循環腫瘤細胞的微流控芯片[J].中國衛生檢驗雜志,2013,23(6):1364-1366.

[5]袁云仙.膽紅素對臨床檢驗結果的干擾及消除研究[J].中國醫藥指南,2011,9(13):111-112.

[6]孫虹,牛華,趙崇吉，等.膽紅素、血紅蛋白和乳糜微粒對生化檢測結果的干擾評價[J].國際檢驗醫學雜志,2011,32(21):2509-2512.

[7]程正江.血紅蛋白和膽紅素干擾臨床生化分析的機理初探[J].國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25(6):488-493.

[8]沈伽弟.溶血對臨床生化檢驗的干擾和影響[J].中華醫學檢驗雜志,1994,9(1):250-253.

·臨床研究·

收稿日期：(2015-07-28)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.045A

文章編號：1673-4130(2015)24-3615-03