老年非小細胞肺癌組織中表皮生長因子受體基因突變情況及其與切割修復交叉互補基因1表達的相關性

張利誠

(武警浙江省總隊嘉興醫院呼吸科，浙江　嘉興　314000)

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老年非小細胞肺癌組織中表皮生長因子受體基因突變情況及其與切割修復交叉互補基因1表達的相關性

張利誠

(武警浙江省總隊嘉興醫院呼吸科，浙江嘉興314000)

目的探討老年非小細胞肺癌(NSCLC)組織中表皮生長因子受體(EGFR)基因突變情況及其與切割修復交叉互補基因(ERCC)1表達的關系。方法選擇老年NSCLC患者150例作為研究對象，采用PCR技術檢測老年NSCLC組織中EGFR基因突變和ERCC1基因表達水平。結果150例老年NSCLC組織中EGFR基因突變62例，突變率為41.3%，外顯子21和外顯子19突變率分別為18.7%和18.0%。老年NSCLC組織中，男性EGFR基因突變率低于女性(P<0.05)，吸煙患者EGFR基因突變率低于非吸煙患者(P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突變率高于非腺癌患者(P<0.05)，有腫瘤家族史患者EGFR基因突變率高于無腫瘤家族史患者(P<0.05)，不同TNM分期患者EGFR基因突變率比較有差異(P<0.05)。EGFR基因突變型ERCC1高表達率低于EGFR基因野生型(P<0.05)。結論老年NSCLC患者EGFR基因突變以外顯子21和外顯子19突變為主，性別、吸煙、腺癌、腫瘤家族史、TNM分期為EGFR基因突變的影響因素，EGFR基因突變者ERCC1基因表達量低。

非小細胞肺癌；表皮生長因子受體基因；基因突變

手術治療是非小細胞肺癌(NSCLC)最有效的治療方法，但有部分肺癌患者發現時已為肺癌晚期，或者已經有遠處轉移，使其失去了手術機會，而化療和放療的治療效果有限，分子靶向藥物的出現為NSCLC的治療提供了新的治療方法，表皮生長因子受體(EGFR)-酪氨酸激酶抑制劑(TKI)類藥物對NSCLC的治療作用越來越受到關注，EGFR-TKI類藥物治療是否有效的基礎為EGFR基因突變，在治療之前進行EGFR基因突變檢測具有重要意義。研究發現NSCLC組織中存在EGFR基因突變情況〔1～3〕，EGFR基因突變和切割修復交叉互補基因(ERCC)1基因水平有一定關系〔4～6〕。本文對老年NSCLC組織中EGFR基因突變情況進行研究，并探討其影響因素及其與ERCC1表達水平的相關性。

1　資料與方法

1.1研究對象選擇2010年1月至2013年12月我院65歲以上經病理證實的老年NSCLC患者150例，年齡(74.25±3.28)歲，男61例，女89例，吸煙77例，腺癌104例，有腫瘤家族史45例，淋巴結轉移64例，TNM分期Ⅰ期71例、Ⅱ期42例、Ⅲ期37例。所有患者簽署知情同意書，經我院倫理委員會同意；所有患者手術前均未進行放療或者化療治療。

1.2主要試劑和儀器人EGFR基因突變檢測試劑盒(美國Sigma公司)，ERCC1基因表達量檢測試劑盒、DNA提取試劑、RNA提取試劑(Qiagen公司)等；熒光定量PCR儀(Stratagene公司)，紫外線分光光度計(Thermo公司)等。

1.3病史及標本收集收集患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤家族史、肺癌類型、TNM分期、淋巴結轉移等臨床資料。將150例手術患者術中切除的肺癌組織標本經甲醛溶液固定，送檢驗科，石蠟包埋備用。

1.4EGFR基因突變檢測將肺癌組織石蠟包塊切成厚5 μm切片，提取DNA，提取DNA的純度和濃度用紫外分光光度計進行測量，將DNA濃度稀釋為10 ng/μl。根據EGFR基因突變試劑盒說明書步驟檢測肺癌組織DNA中EGFR基因突變情況，經PCR擴增后，收集熒光信號，熒光定量PCR分析軟件對結果進行分析。結果判定：老年NSCLC組織中檢測到突變位點有擴增，且CT值≤35時為陽性；35

1.5ERCC1基因表達檢測將老年NSCLC組織切片切成厚10 μm切片，常規進行RNA提取。將提取得到的老年非小細胞肺癌組織RNA進行逆轉錄反應，加入ERCC1基因表達量檢測試劑盒中ERCC1基因表達量檢測試劑，并根據試劑盒說明書進行熒光定量擴增，收集熒光信號，在PCR儀中輸出ERCC1基因表達量。以β-actin基因為內參，△Ct>4.3為ERCC1基因高表達，△Ct≤4.3為ERCC1基因低表達。

1.6統計學方法采用SPSS20.0軟件進行t及χ2檢驗。

2　結　果

2.1老年NSCLC組織中EGFR基因突變情況150例老年非小細胞肺癌組織中EGFR基因突變62例，突變率為41.3%，其中外顯子21和外顯子19突變率比較高，突變率分別為18.7%和18.0%，外顯子18、外顯子20和雙突變的突變率比較低，分別為2.7%、1.3%和2.0%。

2.2老年非小細胞肺癌組織中EGFR基因突變的影響因素老年NSCLC組織中，男性EGFR基因突變率低于女性(29.2% vs 59.0%,χ2=13.257,P=0.000)，吸煙患者EGFR基因突變率低于非吸煙患者(31.2% vs 52.1%,χ2=6.741,P=0.009，P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突變率高于非腺癌患者(51.9% vs 17.4%,χ2=15.684,P=0.000)，有腫瘤家族史患者EGFR基因突變率高于無腫瘤家族史患者(64.4% vs 31.4%,χ2=14.160,P=0.000)，不同TNM分期患者EGFR基因突變率比較差異有統計學意義(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分別為54.9%、33.3%、24.3%，χ2=9.573,P=0.008)，有淋巴結轉移和無淋巴結轉移患者EGFR基因突變率比較差異無統計學意義(37.5% vs 44.2%,χ2=0.676,P=0.411)。

2.3EGFR基因突變型和野生型ERCC1表達情況EGFR基因突變型ERCC1基因表達量低于EGFR基因野生型(21.36±9.75 vs 49.21±12.42,t=6.365,P=0.003)。EGFR基因突變型ERCC1高表達率低于EGFR基因野生型〔30.6%(19/62) vs 60.2%(53/88)，χ2=12.753,P=0.000〕。

3　討　論

EGFR基因由28個外顯子組成，長約118 kb，EGFR基因的外顯子18～24是編碼酪氨酸激酶功能的區域，這些區域存在一定的基因突變，這些基因突變區域和EGFR-TKI類藥物的治療效果關系密切，其中EGFR基因最常見的突變是外顯子21和外顯子19的突變〔7，8〕。鄭軍等〔9〕發現214例NSCLC組織中EGFR基因突變98例，突變率為45.8%，其中外顯子19的突變率為22.0%，外顯子21的突變率為20.6%。本研究也發現老年NSCLC組織中外顯子21和外顯子19的突變率比較高，和鄭軍等〔9〕的研究結果也一致，表明老年NSCLC和非老年NSCLC患者肺癌組織中EGFR基因突變情況相似。

因EGFR-TKI類藥物對非小細胞肺癌的治療效果和EGFR基因突變有關，因此研究EGFR基因突變的影響因素具有重要意義。近年來不少學者對NSCLC患者肺癌組織中EGFR基因突變的影響因素進行研究，但研究結果不完全一致，不少研究發現NSCLC患者中女性患者、非吸煙者、腺癌患者EGFR基因突變率比較高〔9～11〕，鄭軍等〔9〕研究發現NSCLC患者中女性患者的EGFR基因突變率為57.0%，男性為36.0%，女性患者的EGFR基因突變率高于男性患者，有淋巴結轉移非小細胞肺癌患者的EGFR基因突變率高于無淋巴結轉移患者，而EGFR基因突變率和NSCLC患者的臨床分期、腫瘤分級以及患者的年齡無顯著相關性。王殿軍等〔11〕研究認為NSCLC患者EGFR基因突變和患者的性別、年齡、腺癌、分期和淋巴結轉移均無相關性，吸煙患者的EGFR基因突變率高于非吸煙患者。各研究結果之間存在差異可能和病例選擇例數少有關，但大多數研究認為女性、腺癌和非吸煙患者的EGFR基因突變率較男性、非腺癌、吸煙患者的EGFR基因突變率高。

ERCC1基因在DNA損傷修復和剪切方面具有重要作用，和鉑類化療藥物的治療效果有一定關系，近年來不少研究發現ERCC1基因水平和EGFR基因突變有關，EGFR基因突變非小細胞肺癌患者的ERCC1基因表達量較EGFR基因野生型者低〔12～14〕。本研究表明老年NSCLC患者EGFR基因突變和ERCC1基因之間存在一定關系，因此考慮EGFR突變型老年NSCLC患者可能對鉑類化療藥物比較敏感，鉑類化療藥物對EGFR突變型老年NSCLC患者的治療效果可能比較好。

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2成志強，王曉玫，賀黎升，等.應用特異性突變抗體檢測人非小細胞肺癌組織中EGFR突變〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2014；30(5)：531-4，539.

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4Mlak R，Krawczyk P，Ramlau R，etal.Predictive value of ERCC1 and RRM1 gene single-nucleotide polymorphisms for first-line platinum-and gemcitabine-based chemotherapy in non-small cell lung cancer patients〔J〕.Oncol Rep，2013；30(5)：2385-98.

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8Zou Y，Ling YH，Sironi J，etal.The autophagy inhibitor chloroquine overcomes the innate resistance of wild-type EGFR non-small-cell lung cancer cells to erlotinib〔J〕.J Thorac Oncol，2013；8(6)：693-702.

9鄭軍，謝貴元，李姣，等.非小細胞肺癌EGFR基因突變的臨床意義研究〔J〕.中國腫瘤臨床，2014；30(14)：904-7.

10Boch C，Kollmeier J，Roth A，etal.The frequency of EGFR and KRAS mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC)：routine screening data for central Europe from a cohort study〔J〕.BMJ Open，2013；3(4):pii：e002560.

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14Krawczyk P，Wojas-Krawczyk K，Mlak R，etal.Predictive value of ERCC1 single-nucleotide polymorphism in patients receiving platinum-based chemotherapy for locally-advanced and advanced non-small cell lung cancer-A pilot study〔J〕.Folia Histochem Cytobiol，2012；50(1)：80-6.

〔2015-03-06修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

張利誠(1966-)，男，主任醫師，主要從事呼吸病學研究。

R73

A

1005-9202(2016)17-4234-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.048