曲子宮絳蟲染色標本的制作和形態學觀察

楊祎程 ， 張國權 ， 張元來 ， 劉立軍 ， 張 亮 ， 田啟會 ， 張進隆

(1.甘肅畜牧工程職業技術學院 ， 甘肅武威733006；2.甘肅省武威市畜牧獸醫局 ， 甘肅武威733000)

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曲子宮絳蟲染色標本的制作和形態學觀察

楊祎程1， 張國權1， 張元來2， 劉立軍1， 張 亮1， 田啟會1， 張進隆1

(1.甘肅畜牧工程職業技術學院 ， 甘肅武威733006；2.甘肅省武威市畜牧獸醫局 ， 甘肅武威733000)

為了觀察研究曲子宮絳蟲的形態結構和改進絳蟲的染色方法；用H.E.染色法對曲子宮絳蟲進行染色，在顯微鏡下觀察曲子宮絳蟲形態結構；制作出結構清晰，顏色鮮艷的曲子宮絳蟲標本，在光學顯微鏡下觀察到該絳蟲成節中雌雄生殖系統、排泄系統，孕節中子宮和蟲卵的結構。為該蟲體在形態學蟲種鑒定和本病的確診提供參考依據。

曲子宮絳蟲 ； 蘇木素染色 ； 形態

曲子宮絳蟲隸屬于扁形動物門絳蟲綱，多節絳蟲亞綱，圓葉目，裸頭科，該屬絳蟲為大型絳蟲體長可達4.3 m，常寄生于綿羊、山羊、黃牛、耗牛等反芻動物的小腸中。一條完整的絳蟲由頭節、頸節和體節3部分組成，生殖系統和排泄系統是曲子宮絳蟲比較重要的結構[1]。關于莫尼茨絳蟲的形態學研究和染色方法報道很多，但對曲子宮絳蟲形態學的研究和染色方法的研究報道很少。本試驗以天祝地區高山細毛羊小腸中采集到的曲子宮絳蟲為材料，采用H.E.染色法制作曲子宮絳蟲的染色標本，對傳統的染色方法做了改進，制作了結構清晰、顏色鮮亮、不易褪色的曲子宮絳蟲的染色標本。在光學顯微鏡下觀察到該絳蟲幼節中可見排泄系統和萌芽狀態的生殖系統；成節中發育完成的雌雄生殖系統和排泄系統；孕節中子宮和蟲卵的結構。為該蟲體在形態學蟲種的鑒定和本病的確診提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗用曲子宮絳蟲采自天祝縣牛羊定點屠宰場，1歲齡高山細毛羊的小腸中。

1.2 試劑和材料 蘇木素精，酒精，銨明礬，甘油，甲醇，二甲苯，加拿大樹膠，載玻片，蓋玻片，Olympus光學顯微鏡照相系統等。

1.3 方法

1.3.1 試驗材料的處理 將采集的綿羊絳蟲，先用自來水沖洗3次，再用生理鹽水漂洗浸泡后，將完整的蟲體從頭節開始剪成2 cm左右的小段，依次按1-1、1-2、1-3… 的編號方法編號，將樣品分別用 70%乙醇固定，用于制片。

1.3.2 制作絳蟲染色標本 絳蟲節段壓片固定：將選取的絳蟲節段壓入兩潔凈的載玻片中間，為了不使蟲體壓的過薄，可在載玻片兩端墊以適當厚度的紙片，用線繩扎緊載玻片兩端，投入 70%酒精中固定24 h～48 h。

蘇木素-伊紅(H.E.染色法)染色法：具體步驟：(1)洗脫酒精：將壓片固定好的蟲體投入梯度酒精中50%酒精，10 min→30%酒精，10 min→蒸餾水，10 min；(2)染色：蘇木素染色液30 min→用蒸餾水漂洗10 min洗；(3)分色：用1%鹽酸溶液分化 10～20s；(4)染色：水伊紅染液10 min；(5)脫水：80%酒精，5 min→90%酒精，10 min→95%酒精，10 min100%酒精Ⅰ，10 min→100%酒精Ⅱ，10 min；(6)透明：苯酒精(1∶1)10 min→二甲苯，10 min；(7)封固：加拿大樹膠封固。

1.3.3 試驗用絳蟲染色標本的制作 將1.3.2 中得到的染色標本在光學顯微鏡下觀察，根據其形態特征，確定所采得的絳蟲的種類，確定曲子宮絳蟲對應的編號，將所有曲子宮絳蟲從頭節至孕節的樣品用H.E.染色法制作染色標本。

2 結果

2.1 曲子宮絳蟲寄生部位 曲子宮絳蟲寄生于高山細毛羊空腸前段的小腸黏膜上(見中插彩版圖1)。

2.2 外部形態的觀察 曲子宮絳蟲成蟲蟲體呈背腹扁平的帶狀，乳白色，蟲體長2.7 m，幼節寬0.3～0.8 mm，成節寬 4.0～10.0 mm，孕節寬 8.0～15.0 mm。頭節小，呈圓球形；頸節在頭節之后，比頭節細而薄，幼節細而薄，成節比幼節寬，也較厚，孕節寬而厚，每個節片呈上窄下寬的梯形。

2.3 染色標本形態觀察 用H.E.染色法染制的標本在光學顯微鏡下觀察，曲子宮絳蟲成蟲頭節紫紅色，四個近圓形吸盤位于頭節前端的側面，均勻排列。頸節，紫紅色，分節很細，排泄管清晰可見，看不到生殖系統器官(見中插彩版圖2)。幼節，呈紫紅色，排泄管清晰可見，生殖系統可見萌芽狀態卵巢、卵模、卵黃腺、睪丸等生殖器官都沒有發育成熟(見中插彩版圖 3,4)。成節，成節內有一組生殖器官，無規律的分布于節片一側，生殖孔開口于生殖器官分布的一側，卵巢和卵黃腺在節片一側構成菜花狀結構，將卵模圍在中間。子宮出現開始發育，呈彎曲狀，位于兩縱排泄管的內側，分布于節片前緣。睪丸數百個，分布于節片兩側縱排泄管之外(見中插彩版圖 5)。孕節，有排泄管，生殖系統中，卵巢、卵模、卵黃腺、睪丸等生殖器官已逐漸退化，子宮中充滿蟲卵占據了整個節片(見中插彩版圖6)。子宮中的蟲卵逐漸發育成熟。

3 討論

本試驗以天祝高山細毛羊小腸內寄生的曲子宮絳蟲為試驗材料，用H.E.染色法制作了結構清晰、顏色鮮亮、不易褪色的曲子宮絳蟲的染色標本，并在光學顯微鏡下觀察了該絳蟲的縱排泄管、雌雄生殖器官等結構，為該絳蟲形態學研究和蟲體鑒定添加了新的參考資料。

絳蟲的染色方法有很多種，裘學麗等[2]采用齊爾石碳酸復紅染液對人體內的帶絳蟲成蟲進行染色制片效果很好。奚琳琳等[3]和紀偉華等[4]采用孔雀綠染色法對人體內帶絳蟲成蟲的孕節片進行染色制片，得到的染色標本子宮側枝為亮綠色，其他部位無色，易于觀察。王宏運[5]采用蘇木素染色法制作貝氏莫尼茨絳蟲的染色標本，觀察到結構清晰的成節中雌雄生殖系統、排泄系統，孕節中子宮和蟲卵的結構。任成林[6]曾用哈里斯氏蘇木精染色液對羊曲子宮絳蟲成蟲進行染色制片也得到了比較滿意的效果。本試驗采用H.E.染色法制作絳蟲的染色標本，對傳統的染色方法做了改進。在浸染過程中應勤檢查頻翻動，使染液浸透蟲體。寧可深染，不宜淺染，以免經分色后色淡影響鑒定。分色是關鍵，嚴格拿握時間，蟲體呈紫紅色為宜。隨時用顯微鏡觀察。透明時間應以最理想的結果為宜,因此在透明過程中也應經常觀察,在顯微鏡下能清晰分辨蟲體內部各器官,即可取出封片,一般壓制較薄的節片透明時間短,反之則較長。摸索最佳的染色和透明時間。用此改進的方法制作的曲子宮絳蟲標本，成節中雌雄生殖系統和排泄系統結構清晰，孕節中子宮和蟲卵的結構也很好辨認。

[1] 汪明.獸醫寄生蟲學[M],3版.北京:中國農業出版社,2003,104-113.

[2] 裘學麗,陳艷,牟榮.帶絳蟲成蟲節片染色方法的探討[J].貴陽醫學院學報,2005,30(4):376.

[3] 奚琳琳,楊毅梅.帶絳蟲妊娠節片孔雀綠染色標本制作[J].中國熱帶醫學,2008,3(8)：474.

[4] 紀偉華,郭冀玲.帶絳蟲妊娠節片標本制作方法的研究[J].中國人獸共患病雜志,2001,17(4)：73-74.

[5] 王宏運.貝氏莫尼茨絳蟲幼節和成節間差異基因的EST研究[D].新疆：石河子大學,2007：11-16.

[6] 任成林.絳蟲成蟲染制方法的改進[J].動物學雜志,1993,28(6)：28-29.

2016-06-20

楊祎程(1985-)，男，講師，碩士，主要從事動物解剖生理教學與研究工作，E-mail:dongyyang@126.com.

張進隆,E-mail:xmgczhangjinlong@163.com

.S852.73+4

A

0529-6005(2016)10-0025-02