20%濃戊二醛對雞常見病原菌殺滅效果的試驗

毛倩倩 ， 徐 峰 ， 孔祥強

(1.青島康地恩動物藥業有限公司 ， 山東青島266109;2.青島蔚藍生物股份有限公司， 山東青島266001)

20%濃戊二醛對雞常見病原菌殺滅效果的試驗

毛倩倩1，2， 徐 峰1，2， 孔祥強1,2

(1.青島康地恩動物藥業有限公司 ， 山東青島266109;2.青島蔚藍生物股份有限公司， 山東青島266001)

在畜牧養殖行業中，對動物傳染病的控制主要有疫苗免疫、藥物防治和環境消毒3種方式。消毒是貫徹“預防為主”方針的一項重要措施，消毒的目的是消滅被傳染源散播于外界環境中的病原體，以切斷傳播途徑，阻止疫病繼續蔓延。消毒劑的優劣直接影響到消毒效果的好壞。戊二醛作為一種廣譜、高效、低腐蝕、穩定的消毒劑和滅菌劑，已被廣泛用于畜牧行業。本試驗，以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門菌為殺滅對象，對市售20%濃戊二醛溶液進行消毒效果的研究；同時，對消毒劑在有機物干擾的情況下對細菌殺滅效果進行了觀察；為其在實際臨床使用提供理論依據和技術支持。

1 材料

1.1 受試細菌 臨床分離的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌。

1.2 主要試劑 甘氨酸、吐溫-80、營養瓊脂、MHB肉湯、0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液、標準硬水、5%滅菌雞糞水溶液。

1.3 藥品 濃戊二醛溶液(含量20%，批號：2015092401，由青島康地恩動物藥業有限公司提供)。

2 方法

2.1 試驗菌懸液的配制 將菌株劃線接種于MH固體培養基培養24 h，用滅菌槍頭挑取單個菌落，接種于3 mL MHB肉湯培養基中，置于37 ℃水浴恒溫振蕩儀中培養8 h。用標準硬水校正菌液濃度至 0.5麥氏標準濁度，此濁度含菌量約為108個/mL，再用MHB肉湯做10倍稀釋(含菌量約為107個/mL)備用。

2.2 消毒劑稀釋 將20%濃戊二醛用標準硬水稀釋成不同濃度，置于已滅菌試管，每管4.5 mL。

2.3 中和劑配制 參照規范[1]和韓杰[2]方法，選用3%吐溫-80+1%甘氨酸為中和劑。

2.4 殺菌試驗 將已稀釋好的消毒劑中分別加入受試菌液0.5 mL，混勻于20 ℃水浴中作用10、20、30 min，各吸取0.5 mL，加入4.5 mL中和劑混勻，作用10 min后每個混合液吸取100 μL進行涂板。每個涂板設3個平行，之后放37 ℃培養18 h～22 h后查看試驗結果，用平板法作細菌計數[3]。同時設PBS對照組。然后按以下公式計算殺菌率[4]。試驗重復6次。

計算殺菌率(pt)=[(no-nt)/no]×100 %，式中no為對照組活菌數，nt為消毒后試驗組活菌數。

2.5 有機物干擾試驗 以5%雞糞水溶液代替PBS重復上述試驗。

2.6 結果判定方法 消毒劑對細菌的殺菌效果是否有效以殺菌率是否達到99.9%以上的消毒劑的最高有效稀釋倍數作為判定標準[5]。

3 結果與分析

3.1 20%戊二醛對雞常見病原菌殺滅效果 由表1可知，20%濃戊二醛消毒劑對細菌的殺滅作用隨著消毒劑濃度的升高和作用時間的延長而增強。1∶2 000 倍稀釋對大腸桿菌、沙門菌和金黃色葡萄球菌均有良好的殺滅效果。當稀釋4 000倍時，作用 30 min，對金黃葡萄球菌有良好的殺滅作用。

3.2 有機物干擾試驗 由表2可知，在有機物干擾的情況，稀釋1 000倍，10 min內仍能有效殺滅大腸桿菌、沙門菌和金黃色葡萄球菌。但高度稀釋后，有機物干擾作用明顯，但在2 000倍稀釋，作用 30 min 對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌仍有良好的殺滅效果。

表1 20%戊二醛對雞常見病原菌的殺滅效果/%

表2 20%濃戊二醛在5%雞糞水中的殺菌效果/%

4 討論

在實驗室條件下，評價消毒劑殺菌效果，將混合液移到培養基中，不可避免的會帶有少量殘余消毒劑，可能進一步阻礙細菌在培養基中的生長繁殖，形成陰性結果[6]。因此，在定量殺菌濃度試驗時，要除去殘留消毒劑影響。本試驗中，選用的中和劑能很好的中和消毒劑，其濃度并不影響細菌的生長。

戊二醛是一種速效、廣譜的化學滅菌劑，在常溫下低濃度的戊二醛溶液即可對多種微生物表現出殺滅活性[7]。同大多數消毒劑一樣，20%濃戊二醛消毒液的殺菌效果隨濃度增加、時間延長而增強[8、9]。稀釋4 000倍，作用30 min對金黃色葡萄球菌仍用良好的殺滅作用。試驗表明，戊二醛濃度越低，越易受有機物的影響，但延長作用時間，仍有一定的滅菌效果。

本試驗在實驗室條件下，對20%濃戊二醛進行初步研究表明，20%濃戊二醛溶液對雞常見病原菌具有良好的殺滅作用，具有一定的推廣價值。關于該消毒劑對真菌、芽孢和病毒等的消毒試驗還在進行中。

[1] 農業部1992農(牧藥)字第101號．獸用消毒劑鑒定技術規范(試行)[S]．1992.

[2] 韓杰，魏秋華．化學消毒劑的中和劑研究現狀[J]．中國消毒學雜志，2013，30(12):1165-1168.

[3] 高東旗.季銨鹽類消毒劑復方的應用[J].中國消毒學雜志，1993，10(4)：224.

[4] 農業部獸藥審評委員會.獸藥試驗技術規范匯編[S].2001，30-47.

[5] Union Carbide Corparation UCARSAM Sanizizer.UCARSAM 4128 and Santizizer.1996

[6] 張冰，秦秀慧，李軍,等.戊二醛和季銨鹽復合消毒劑對雞常見病原微生物殺滅效果的研究[J],中國實驗動物雜志，2002,12(2)：95-98.

[7] 徐秀榮，劉霞，黃迪海，等.戊二醛癸甲溴銨溶液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果研究[J].中國獸藥雜志,2015,49(3):30-34.

[8] 張亞尼，宋暉，張福娥，等.5種含氯消毒劑殺菌效果及能量試驗研究[J].中國消毒學雜志,2005,22(2):147.

[9] 邱梅，郝智慧，沈巍，等.不同消毒劑的殺菌效果試驗觀察[J].中國獸醫雜志，2012,48(10):39-41.

2016-01-08

毛倩倩(1988-)，女，碩士，研究方向為動物藥評價、獸醫藥理學，E-mail：772074848@qq,com

徐峰，E-mail：xufeng@vlandgroup.com

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0529-6005(2016)12-0050-02