miR-30c在減輕肝細胞肝癌的侵襲與轉移中的應用探討

孫 鵬 宋 遠 周曉晶

miR-30c在減輕肝細胞肝癌的侵襲與轉移中的應用探討

孫 鵬1宋 遠1周曉晶2

目的 探討miR-30c在減輕肝細胞肝癌侵襲及轉移中的應用價值。方法 對肝癌及肝癌細胞系中的miR-30c表達進行定量檢測，分析對肝癌細胞侵襲的影響。結果 有脈管轉移組miR-30c表達低于無脈管轉移組；轉染miR-30c模擬物能對snail表達進行控制。結論 miR-30c表達上調，可抑制snail表達，減輕侵襲。

肝細胞肝癌；侵襲；轉移；miR-30c

肝細胞肝癌發生率約為原發性肝癌的85%～90%［1］。微小核糖核酸（miRNA）在腫瘤的發生、侵襲、轉移中發揮著重要的作用，如miR-30c［2-3］。本研究分析肝細胞肝癌中miR-30c的表達水平，并探討其在肝細胞肝癌侵襲、轉移中的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6月～2016年6月本院收治的實施肝癌手術切除的42例肝癌及癌旁組織標本。按照是否存在脈管癌栓，將其分為有脈管轉移組（n=19）與無脈管轉移組（n=23）。有脈管轉移組中，男15例，女4例；平均年齡（45.8±2.6）歲。無脈管轉移組中，男17例，女6例；平均年齡（45.6±2.4）歲。兩組一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），可對比。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 購自美國的0.25%胰酶、DMEM高糖培養基、胎牛血清；購自上海吉瑪公司的miR-30c模擬物、miR-30c抑制物等；購自美國Santa公司的Snail、GAPDH一抗等；購自福州邁新公司的免疫組化試劑盒等。

1.2.2 細胞培養 在含5%二氧化碳的細胞培養箱中進行培養，37℃恒溫，所用培養基為DMEM高糖培養基。

1.2.3 細胞轉染 取適量對數生長期的肝癌細胞系，以2×105～4×105個細胞密度種植于6孔板中，持續培養24 h。

并按照試劑盒具體轉染步驟，以Lipofectamine 2000進行轉染。轉染后24 h，對細胞進行收集。

1.2.4 細胞侵襲實驗 以8 mm為Transwells小室纖維膜孔徑，將10%胎牛血清的500μl DMEM加入下室，在含5%二氧化碳的細胞培養箱中進行培養，37℃恒溫，持續培養48 h。以4%多聚甲醛固定小室下表面的細胞，以0.5%結晶紫染色。在顯微鏡下進行觀察，計算穿膜細胞數。

1.3 統計學分析

以SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計量資料均用（x-±s）表示，以t檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

miR-30c在肝癌組織、癌旁組織中的表達分別為（0.001 05± 0.000 83）%、（0.006 85±0.002 68）%，差異具有統計學意義（t=13.075，P=0.000）；而snail的表達分別為（0.004 18±0.003 56）%、 （0.001 29± 0.000 71）%，差異具有統計學意義（t=5.035，P=0.000）。

有脈管轉移組miR-30c表達為（0.000 70±0.000 66）%，低于無脈管轉移組的（0.001 36±0.000 82）%，差異具有統計學意義（t=3.966，P=0.000）；有脈管轉移組snail表達為（0.005 88± 0.005 42）%，高于無脈管轉移組的（0.001 70±0.001 32）%，差異具有統計學意義（t=4.739，P=0.000）。

3 討論

miRNA為常見非編碼小分子RNA，包括22個核苷酸［4］。有研究認為，miR-30c等miRNA在細胞遷移、細胞增殖、細胞凋亡等多種細胞生物學過程中發揮著重要的作用，且在肝癌等多種腫瘤組織中表達異常［5］。但臨床上仍缺乏對miR-30c在肝細胞肝癌侵襲及轉移中影響的研究。

影響肝癌患者治療效果及預后的關鍵，是肝細胞肝癌的侵襲與轉移。有研究認為，snail能通過結合E-box，對其表達進行抑制，產生上皮-間質轉化，增強上皮細胞變形、遷移及運動能力，提升抗凋亡能力，在肝癌細胞侵襲、浸潤中發揮重要作用［6］。此外，還有研究認為，miR-30c能有效抑制snail表達，從而減輕肝細胞肝癌的侵襲性［7］。

本研究結果顯示，肝癌細胞miR-30c表達水平低于癌旁組織，且有脈管轉移組miR-30c低于無脈管轉移組，與文獻結果相符［8］。表明在肝癌的發生與發展過程中，miR-30c發揮著重要的作用。此外，本研究結果還顯示，轉染miR-30c模擬物能對snail表達進行控制，從而對高侵襲力細胞系MHCC-97H的侵襲能力進行控制。由此可知，經由miR-30c表達上調，可直接對snail表達進行抑制，從而有效控制肝癌細胞的侵襲和轉移。

綜上所述，miR-30c表達上調可直接對snail表達進行抑制，控制肝細胞肝癌的侵襲性。

［1］ 孔亮亮，倪慶鋒，盧葉挺，等． miR-30c減輕肝細胞肝癌的侵襲與轉移［J］．南京醫科大學學報（自然科學版），2014，34（7）：937-943．

［2］ 李濤． microRNA-139在肝細胞肝癌患者中的表達及其臨床意義［D］． 西安：第四軍醫大學，2014：5-6．

［3］ 蘆占勇． 青年原發性肝癌的臨床特征及手術治療研究［J］． 中國衛生標準管理，2016，7（11）：29-30．

［4］ 李培，李蓮，郭燕，等． miR-30通過調節CD90表達抑制肝細胞肝癌［J］． 中國腫瘤臨床，2014，41（22）：1426-1431．

［5］ 代航． MicroRNA-30a-5p對肝癌細胞增殖凋亡及侵襲轉移的實驗研究［D］． 重慶：重慶醫科大學，2015：8．

［6］ 林華山． miR-30a-3p在肝癌中的表達、功能及機制研究［D］．杭州：浙江大學，2013：18．

［7］ 朱喬． miR-10b在人肝細胞肝癌發生中的作用及其機制的初步探索［D］． 西安：第四軍醫大學，2015：25-26．

［8］ 楊曉冬，陳力，金玉麟，等． miR-30 c-5p在腫瘤中表達和功能的研究進展［J］． 復旦學報（醫學版），2016，43（3）：362-367．

Discussion on the Application of miR-30c in Reducing the Invasion and Metastasis of Hepatocellular Carcinoma

SUN Peng1SONG Yuan1ZHOU Xiaojing21 Department of Gastroenterology，Jilin Provincial People's Hospital，Changchun Jilin 130021，China，2 Department of Biochemistry and Molecular Biology，Changchun University of Chinese Medicine of Basic Medical College，Changchun Jilin 130021，China

Objective To explore the application value of miR-30c in reducing the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma． Methods To detect the expression of miR-30c in hepatocellular carcinoma and hepatocellular carcinoma cell lines，and to analyze the role of the invasion of hepatocellular carcinoma cells． Results The expression of miR-30c was significantly lower than that of no vascular metastasis group，and the Snail expression was controlled by transfection of miR-30c． Conclusion miR-30c expression up regulation，can inhibit the expression of snail，reduce the invasion．

Hepatocellular carcinoma，Attack，Transfer，miR-30c

R735．7

A

1674-9316（2016）22-0071-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．043

1 吉林省衛生計生科研計劃課題（20152084），吉林省衛生計生自籌經費課題（2015s2c06）

1吉林省人民醫院消化內科，吉林 長春 130021 2 長春中醫藥大學基礎醫學院生物化學與分子生物學教研

室，吉林 長春 130021

周曉晶，E-mail：589632478@qq．com