替米考星腸溶顆粒對豬的安全性試驗

林燁，呂英軍，張曉輝，蘇亞楠，唐姝，孫嘉瑞，趙其嶺，栗建盛，劉愛玲，孟小賓，鮑恩東*

(1.南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095；2.瑞普(天津)生物技術股份有限公司，天津 300300)

替米考星腸溶顆粒對豬的安全性試驗

林燁1，呂英軍1，張曉輝1，蘇亞楠1，唐姝1，孫嘉瑞1，趙其嶺1，栗建盛1，劉愛玲2，孟小賓2，鮑恩東1*

(1.南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095；2.瑞普(天津)生物技術股份有限公司，天津 300300)

為了客觀評價替米考星腸溶顆粒臨床應用于豬的安全性，選取40頭25日齡健康三元雜交豬，隨機將其分成4組，每組10頭，分別以1倍、3倍、5倍推薦劑量的替米考星腸溶顆粒拌料給藥45 d，試驗期內對受試豬進行血常規、血凝、血生化、尿常規、增重、料重比、臟器系數等指標的測定及病理學檢查。結果顯示，替米考星腸溶顆粒對受試豬的血液學指標、尿液指標、主要生產性能等方面未造成明顯影響，說明替米考星腸溶顆粒以5倍推薦劑量(2000 g/1000 kg)臨床應用于豬是安全的。

替米考星；腸溶顆粒；安全性試驗；豬

替米考星是大環內酯類抗生素，具有廣譜抗菌的特性，對豬的胸膜肺炎和乳腺炎具有良好的治療效果[1-3]，廣泛應用于畜禽養殖業中[4]。目前國內、外上市應用的替米考星劑型主要為注射劑和預混劑，但這兩種劑型在使用過程中均存在一些缺憾[5]。如替米考星注射液在水中溶解度低，注射使用時費力且容易引起豬的應激反應；替米考星預混劑味苦且對酸不穩定，口服后易被胃酸所破壞[4-6]。因此，替米考星注射液和預混劑在獸醫臨床應用上均存在一定的局限性。為了彌補上述缺陷，研發了替米考星腸溶顆粒，該劑型具有有效防止替米考星在胃酸中被破壞，使藥物有足夠時間到達腸道被吸收，明顯提高生物利用度，同時也可改善適口性等特點[7]。為了評價替米考星腸溶顆粒臨床應用于豬是否安全，試驗依據農業部《獸藥研究技術指導原則匯編》以及《VICH獸藥靶動物安全性研究指導原則概述》[8]有關規定，通過不同劑量拌料給藥的方式開展替米考星腸溶顆粒對豬的安全性試驗，為其臨床用藥提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥品 替米考星腸溶顆粒(批號150901，含替米考星有效成分20%)由瑞普(天津)生物藥業有限公司提供，推薦劑量為200～400 g/1000 kg飼料(以替米考星計)。

1.1.2 試驗動物 25日齡的普通級健康三元雜交豬40頭，購自江蘇省南京市某規模化養殖場。

1.1.3 儀器設備 全自動生化分析儀(日立7180)為日本日立公司產品；全自動血凝分析儀(CA 1500)日本SYSMEX公司產品；血球分析儀(MEK-7222)為日本光電公司產品； 尿常規分析儀(COMBISCAN 500)為德國科寶公司產品。

1.2 試驗分組及處理 將40頭受試豬隨機分為4組，分別為替米考星腸溶顆粒1倍推薦劑量組(400 g/1000 kg飼料)、3倍推薦劑量組(1200 g/1000 kg飼料)、5倍推薦劑量組(2000 g/1000 kg飼料)和空白對照組，每組均為10頭。試驗期間各藥物劑量組拌料給藥，空白對照組飼喂正常不含任何藥物的飼料，所有受試豬均自由采食和飲水，試驗周期為45 d。

1.3 樣品的采集與處理 給藥前通過豬前腔靜脈采血的方式采集各組受試豬的血液(分為加EDTA抗凝的血液2 mL，加枸櫞酸鈉抗凝的血液2 mL和加促凝劑的血液5 mL)及尿液5 mL。采樣時，使豬仰臥保定，在豬的第一肋骨與胸骨柄結合處的前側方的明顯凹陷處，用75%的酒精棉球消毒后，取5mL注射器以與水平面呈約60°的角度平穩緩慢進針，慢慢拉動活塞抽取血液，采血完畢后用消毒棉球按壓進針處，迅速拔出注射器，壓迫片刻以防出血。樣品采集后，立即進行檢測。給藥23 d和給藥45 d時再次按照上述方法對受試豬逐頭采樣。試驗結束時宰殺所有受試豬，肉眼觀察肝、脾、肺、腎等內臟器官病變情況并稱重，然后取部分臟器組織于10%中性福爾馬林溶液中固定以備制作石蠟切片。試驗期間，每天觀察受試豬的臨床癥狀，包括精神狀況、行為、呼吸和飲食等，每周測兩次體溫。給藥前、后分別稱量每頭豬的體重。

1.4 檢測項目

1.4.1 血液常規指標分析 取EDTA抗凝全血，用光電MEK-7222血球分析儀測定血液常規指標。

1.4.2 血凝指標分析 取枸櫞酸鈉抗凝全血，用SYSMEX CA 1500全自動血凝分析儀測定血凝指標。

1.4.3 血清生化指標分析 取促凝血離心所得血清，用日立7180全自動生化分析儀測定血清生化指標。

1.4.4 尿液常規指標分析 取新鮮尿液，用COMBISCAN 500尿常規分析儀測定尿液常規指標。

1.4.5 增重及料重比 根據給藥前、后受試豬的體重，計算每組受試豬的平均增重。根據各組的平均增重和飼料消耗量，計算每組料重比。

1.4.6 臟器系數分析 剖檢受試豬后分別取肝臟、脾臟、肺臟、腎臟稱重并計算臟器系數。

臟器系數=臟器重量/體重×100%

1.4.7 病理組織學檢查 將用10%中性福爾馬林溶液固定的肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進行常規石蠟切片，HE染色，觀察組織病理學變化。

1.5 統計分析 利用SPSS統計分析軟件對所有試驗數據用單因素ANOVA分析方法進行顯著性差異分析，結果均以平均值±標準差(x±s)的形式表示，*和**分別表示各藥物試驗組與空白對照組差異顯著(P<0.05)和差異極顯著(P<0.01)。

2 結果

2.1 受試豬的臨床表現 各試驗組受試豬在用藥過程中無明顯的異常臨床表現，其行為、呼吸、飲食以及體溫等均正常。

2.2 血液常規指標分析 各組受試豬在用藥前1 d、用藥23 d和用藥45 d時血液常規指標結果見表1。

表1 血液常規測定結果

續表1

從表1可以看出，用藥45 d時，3倍劑量組與5倍劑量組受試豬的中性粒細胞百分比與空白對照組相比有顯著的升高；用藥23 d時，1倍劑量組、3倍劑量組受試豬的單核細胞數與空白對照組受試豬相比有顯著增加，但5倍劑量組與空白對照組受試豬相比卻并無顯著性差異，說明該差異并非口服替米考星腸溶顆粒所造成。用藥23 d和用藥45 d時，1倍劑量組受試豬的嗜酸性粒細胞數與空白對照組相比有顯著增加，但3倍劑量組、5倍劑量組與空白對照組受試豬相比則沒有顯著性差異。需要強調的是，依據參考資料[9-10]可知，所有受試豬血液中盡管有個別數值偏高，但其檢測值均在正常數值范圍內。說明口服替米考星腸溶顆粒并不會造成受試豬血液常規數值的顯著改變。

2.3 血凝指標分析 各組受試豬在用藥前1 d、用藥23 d和用藥45 d時的血凝指標結果如表2所示。

表2 血凝指標分析結果

由表2可知，替米考星腸溶顆粒用藥23 d時，1倍劑量組、3倍劑量組受試豬的凝血酶原時間與空白對照組相比出現顯著降低(P<0.05)，但用藥45 d時各用藥劑量組的各項指標與空白對照組受試豬相比均不存在差異(P>0.05)，說明受試豬出現的該差異并非口服替米考星腸溶顆粒所造成。

2.4 血清生化指標分析 各組受試豬在用藥前1 d、用藥23 d和用藥45 d時的血清生化指標結果如表3所示。

表3 血清生化指標測定結果

續表3

由表3可知，用藥23 d時，3倍劑量組受試豬的肌酸激酶含量與空白對照組相比顯著升高(P<0.05)，但1倍劑量組、5倍劑量組受試豬與空白對照組相比則無顯著性差異；用藥45 d時，1倍劑量組受試豬的肌酸激酶含量與空白對照組相比極顯著升高(P<0.01)，但3倍劑量組、5倍劑量組與空白對照組受試豬相比卻無顯著性差異，說明肌酸激酶含量的差異并非口服替米考星腸溶顆粒所致。用藥23 d時，5倍劑量組受試豬的葡萄糖量與空白對照組相比極顯著增加，這可能與進食的飼料有關。用藥23 d時，3倍劑量組、5倍劑量組受試豬的尿素含量與空白對照組相比顯著升高，用藥45 d時，3倍劑量組受試豬的尿素數值與空白對照組相比顯著升高，但其5倍劑量組與空白對照組受試豬相比則不存在顯著性差異，說明該差異性變化并非口服替米考星腸溶顆粒所致。根據已經發表的參考資料可知，雖然上述用藥組受試豬的某些指標與空白對照組受試豬相比存在差異性改變，但所有檢測值均在文獻所提到的正常范圍內[11]。

2.5 尿液常規指標分析 各組受試豬在用藥前1 d、用藥23 d和用藥45 d時的尿液常規指標檢測結果如表4所示。

表4 尿液常規測定結果

續表4

a/10表示每組10個試驗動物中，該指標的陽性檢出個體數為a。

由表4可知，替米考星腸溶顆粒使用前后，各劑量用藥組受試豬尿液中所檢測的各項指標與空白對照組相比均無顯著差異(P>0.05)；各劑量用藥組受試豬的各項指標中的陽性個體檢出數所占比例與空白對照組相比也無顯著性差異(P>0.05)。

2.6 增重及料重比分析 各組受試豬在用藥前和用藥45 d后的增重及料重比結果如表5所示。

表5 增重及料重比統計結果

由表5可知，各劑量用藥組受試豬的平均增重和料重比與空白對照組受試豬相比均無顯著差異,說明替米考星腸溶顆粒的使用對豬的增重無不良影響。

2.7 臟器系數分析 替米考星腸溶顆粒給藥45 d后，剖殺所有受試豬，分別對各組的心、肝、脾、肺、腎進行稱重并計算臟器系數，結果見表6。

表6 臟器系數結果

由表6可知，各用藥組受試豬的臟器系數與空白對照組相比無顯著差異。說明替米考星腸溶顆粒以推薦劑量(400 g/1000 kg)至5倍推薦劑量(2000 g/1000 kg)應用于豬對其遺傳品質無影響，使用安全。2.8 病理學檢查 試驗結束后，剖殺所有受試豬，未見明顯的臟器肉眼異常和可疑病變。主要臟肝、脾、肺、腎也均未見明顯的病理組織學變化(圖1-圖4)。

A:空白對照組；B:1倍推薦劑量組；C:3倍推薦劑量組；D:5倍推薦劑量組圖1 使用替米考星腸溶顆粒后受試豬肝臟的組織病理學結果(HE染色, ×20)

A:空白對照組；B:1倍推薦劑量組；C:3倍推薦劑量組；D:5倍推薦劑量組圖2 使用替米考星腸溶顆粒后受試豬脾臟的組織病理學結果(HE染色, ×20)

A:空白對照組；B:1倍推薦劑量組；C:3倍推薦劑量組；D:5倍推薦劑量組圖3 使用替米考星腸溶顆粒后受試豬肺臟的組織病理學結果(HE染色, ×20)

A:空白對照組；B:1倍推薦劑量組；C:3倍推薦劑量組；D:5倍推薦劑量組圖4 使用替米考星腸溶顆粒后受試豬腎臟的組織病理學結果(HE染色, ×20)

3 討論

本試驗從血常規指標、血凝指標、血清生化指標、尿液常規指標、增重及飼料報酬、臟器系數、組織病理學檢查等多方面對受試豬進行了1倍、3倍、5倍推薦劑量替米考星腸溶顆粒的安全性比較試驗和分析。結果顯示，替米考星腸溶顆粒從1倍推薦劑量(400 g/1000 kg)至5倍推薦劑量(2000 g/1000 kg)臨床應用于豬后，對其生理生化指標并未產生顯著影響，因此使用該藥物是安全可靠的。而且結果也顯示，喂服1倍、3倍、5倍推薦劑量的替米考星腸溶顆粒不會影響豬的增重，對豬的主要生產性能不產生影響。

通過對受試豬血液常規檢測的分析，盡管發現個別用藥劑量組受試豬血液中的中性粒細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞數值發生了沒有規律性的改變，與空白對照組受試豬相比存在顯著的差異，但其變動的數值仍然處在正常數值范圍內[9-10]，顯然這些數值的改變與投服替米考星腸溶性顆粒無關，推測該變化可能是由于白細胞數量隨動物生理狀況而出現的變化，亦或是由于劇烈運動、進食和疼痛時出現增多的[12-13]。在受試豬的尿常規檢測相中，各劑量組受試豬中存在尿檢呈尿膽素原、膽紅素陽性的個體，這可能是由于檢測結果只能定性而不能定量，而豬的尿液在正常情況下也會含有微量的尿膽素原及膽紅素的緣故[13]。另外，陽性個體的存在也可能與采尿前的禁食時間短有關[14]。同時，我們在病理組織學檢測中并未觀察到受試豬的腎臟有明顯的病理組織學損傷，受試豬尿膽素原、膽紅素陽性個體的這些改變應該與藥物投服無關。

研究表明，替米考星腸溶顆粒毒性小，以1倍至5倍推薦劑量(2000 g/1000 kg)臨床應用于豬是安全可靠的。另外，由于三元豬的正常生理生化指標尚缺乏系統報道，本試驗所測得的指標可為今后研究三元豬的血液學、尿液學指標提供參考依據。

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(編輯：陳希)

The Safety Test of Enteric-coated Tilmicosin Pellets in Swine

LIN Ye1，LV Ying-jun1，ZHANG Xiao-hui1，SU Ya-nan1，TANG Shu1，SUN Jia-rui1，ZHAO Qi-ling1，LI Jian-sheng1，LIU Ai-ling2，MENG Xiao-bing2，BAO En-dong1*

(1.NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China; 2.RuiBiologicalTechnologyCo.,LTD，Tianjin300300，China)

To evaluate the safety of enteric-coated tilmicosin pellets in swine, forty 25-day old piglets were selected. They were separated into 4 groups randomly, 10 piglets each group. They were fed with one fold, three folds and five folds of recommended dose of enteric-coated tilmicosin pellets which were added into pig feed for 45 consecutive days, respectively. The complete blood count, blood coagulation test, blood biochemical test, urinalysis, gain in body weight, ratio of feed to body gain, ratio of organ weight to body weight and histopathological examinations were performed during the experiment. The results showed that no significant difference was found in all measured parameters between enteric-coated tilmicosin pellets-treated groups and control group, indicating that the enteric-coated tilmicosin pellets have low toxicity and are safe to be used in swine under the five folds of recommended dosage (2000 g/1000 kg)．

tilmicosin; enteric-coated pellets; safety test; swine

林燁，碩士研究生，從事獸醫病理學方面研究。E-mail：2015807120@njau.edu.cn

2016-08-29

A

1002-1280 (2016) 10-0022-10

S859.79