高效液相色譜法測定二氧化氯固體消毒劑中DL-酒石酸的含量

張景艷，張宏，陳化琦*，徐繼英

(1. 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所，蘭州 730050； 2. 甘肅省獸藥飼料監察所，蘭州 730030；3. 西北民族大學，蘭州 730050)

高效液相色譜法測定二氧化氯固體消毒劑中DL-酒石酸的含量

張景艷1，張宏2，陳化琦1*，徐繼英3

(1. 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所，蘭州 730050； 2. 甘肅省獸藥飼料監察所，蘭州 730030；3. 西北民族大學，蘭州 730050)

為了測定二氧化氯固體消毒劑中DL-酒石酸的含量，采用C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，在室溫下，以0.4 mol/L磷酸二氫鉀(用磷酸調pH至2.4)為流動相，214 nm為檢測波長，流速為1.0 mL/min，建立了反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定方法。結果顯示，DL-酒石酸在0.2～2.0 mg/mL范圍內線性關系良好，R2=0.9999，回收率范圍為97.0%～102.3%。本方法簡便、準確、快速，可用于二氧化氯固體消毒劑中DL-酒石酸的含量測定。

DL-酒石酸；含量測定；反相高效液相色譜法

DL-酒石酸又稱DL-2,3-二羥基丁二酸，為白色至類白色顆粒或結晶性粉末，有酸味[1]，是一種重要的化工原料，它是等量右旋和左旋酒石酸的混合物，廣泛地應用于食品、制藥、輕工業、化工等行業。二氧化氯固體消毒劑[2]主要由亞氯酸鈉和活化劑兩部分組成，活化劑中的DL-酒石酸作為H+提供劑來發揮作用，其含量的高低與亞氯酸鈉的活化率密切相關，因此,測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸的含量對研究亞氯酸鈉的活化率具有重要意義。

DL-酒石酸含量的測定方法已有不少。酸堿滴定法[1]是測定DL-酒石酸的法定方法，該方法簡單、快速，但專屬性差，由于該活化劑中除了DL-酒石酸外還含有其他酸性成分，所以酸堿滴定法不能準確地測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸的含量。文獻中報道的分光光度法[3]是利用酒石酸與偏釩酸銨的特異顯色反應來測定環氧琥珀酸合成體系中酒石酸的含量，該方法相對標準偏差小于1%,標準誤差低于3%，由于該活化劑中其他成分干擾，導致酒石酸與偏釩酸胺反應不顯色，無法測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸的含量。此外還有離子色譜法[4]、液相色譜法[5-7]等。參考上述文獻，并綜合考慮二氧化氯固體消毒劑活化劑中各組分的物理、化學性質，本文擬建立一種簡便、準確、快速的定量方法，用以測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸的含量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1100 高效液相色譜儀(DAD二極管陣列檢測器)，Waters600高效液相色譜儀，METTLER AE240 電子天平，METTLER AE100 電子天平。

1.2 試藥與試劑 DL-酒石酸對照品(C17137800，20629，Dr.Ehrenstorfer GmbH，99.5%)，二氯異氰尿酸鈉(BCBH9028V，SIGMA-ALDRICH，≥98.0%)，DL-酒石酸(廣州試劑二廠，860816，≥99.0%)，二氧化氯固體消毒劑樣品(批號為：20151001、20151002、20151003)，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：0.4 mol/L磷酸二氫鉀(用磷酸調pH至2.4)；流速：1.0 mL/min；檢測波長214 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取DL-酒石酸對照品200 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成4 mg/mL的對照品儲備液。精密量取對照品儲備液25 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為1 mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取二氧化氯固體消毒劑適量(約相當于DL-酒石酸50 mg)，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例稱取與供試品相當的除DL-酒石酸外的二氯異氰尿酸鈉等成分，混合均勻后作為陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。2.3 系統適用性和專屬性試驗 分別取陰性對照溶液、DL-酒石酸對照品溶液和供試品溶液按2.1項色譜條件測定，結果見圖1～圖3。在該色譜條件下，DL-酒石酸峰與相鄰組分峰的分離度大于3.0，理論塔板數按DL-酒石酸峰計不低于8000。陰性對照溶液在與DL-酒石酸對照品色譜峰相應位置無吸收峰，表明處方中其他成分對DL-酒石酸的定量檢測無干擾，專屬性能滿足檢測要求。

圖1 陰性對照溶液色譜圖

圖2 DL-酒石酸對照品溶液色譜圖

圖3 供試品溶液色譜圖

2.4 線性范圍 精密量取對照品儲備液各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分別置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得到濃度分別為0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL的系列對照品溶液。按2.1項下色譜條件測定，以峰面積(Y)對DL-酒石酸的濃度(X, mg/mL)進行線性回歸，方程為Y=1645.1X+3.6232(R2=0.9999)。結果表明DL-酒石酸在0.2～2 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.5 準確度 取批號為20151001的二氧化氯固體消毒劑適量(約相當于DL-酒石酸25 mg)，精密稱定，按高(H)、中(M)、低(L)三個濃度水平分別添加DL-酒石酸試藥(已知含量為99.0%)，制得向已知含量制劑中添加已知測定物的添加樣品，每個濃度水平的添加樣品分別制備3份供試品。按2.2.2項制成供試品溶液，進行含量測定，計算回收率，結果見表1。結果表明高中低濃度供試品溶液的回收率為97.0%～102.3%，該方法準確度符合要求。

表1 準確度測量結果

2.6 精密度 取批號為20151002的二氧化氯固體消毒劑6份，按2.2.2項制成供試品溶液，進行含量測定，得RSD=0.3%，結果見表2。結果表明該方法精密度符合要求。2.7 耐用性 取按準確度測定項下制得的樣品，保持流動相比例和流速不變，在Waters600和Agilent 1100色譜儀上分別使用Agilent SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱和Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，于20 ℃、30 ℃、40 ℃條件下進行測試，考察方法的耐用性，結果表明測量無顯著差異，說明耐用性良好。

表2 精密度測量結果

2.8 含量測定 取3批消毒粉和1批DL-酒石酸試藥，按2.2.2項制成供試品溶液，進行含量測定。結果表明，批號為20151001、20151002、20151003的3批樣品DL-酒石酸含量分別為22.6%、22.4%、22.9%，批號為860816的DL-酒石酸試藥含量為99.0%。

3 討論與小結

3.1 活化劑的活化率 二氧化氯固體消毒劑是一種在一定操作條件下能夠釋放出二氧化氯氣體的固體狀制品，一般是以穩定性亞氯酸鹽為主要原料制備而成，使用上相對方便，但由于須經酸活化才能使用[8]，酒石酸是目前常用的一種固體活化劑[9]，活化劑中的DL-酒石酸作為H+提供劑來發揮作用，其含量的高低與亞氯酸鈉的活化率密切相關，因此測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸的含量對研究亞氯酸鈉的活化率具有重要意義。

3.2 流動相的選擇 酒石酸是一種優良的酸味劑，在食品工業中，多采用高效液相色譜法測定酒石酸含量,流動相水相多以0.01～0.4 mol/L磷酸緩沖鹽為主,常用磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀等鹽溶液(用磷酸調pH)；有機相用甲醇或乙腈，由于酒石酸極性很強,有機相比例多小于5%。有機相比例影響保留時間，pH對分離效果影響很大[8]。選擇0.4 mol/L磷酸二氫鉀(用磷酸調pH至2.4)能夠很好地分離二氧化氯固體消毒劑活化劑中各組分，并且DL-酒石酸出峰時間約為3 min，DL-酒石酸峰與相鄰組分峰的分離度大于3.0，理論塔板數按DL-酒石酸峰計不低于8000。

為了有效分離二氧化氯固體消毒劑活化劑中的DL-酒石酸，本試驗采用低pH緩沖鹽溶液作為溶劑和流動相，所使用色譜柱必須滿足耐純水和耐低pH，以免對色譜柱造成不可逆損害，并在使用后及時用純水沖洗色譜柱防止緩沖鹽析出，堵塞色譜柱和管路。

3.3 測定波長的選擇 酒石酸等有機酸多在210 nm附近有較大的吸收[9]，波長越小，對試劑純度要求越高，越容易受到流動相干擾，但隨著測定波長增大，靈敏度降低。分別在210、214、220、254 nm波長處測定二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸含量，通過對色譜結果的比較分析，在214 nm波長下測定，能夠獲得最大的靈敏度和抗干擾能力。

試驗采用反相高效液相色譜法，對活化劑樣品中DL-酒石酸含量測定進行方法學研究,建立了DL-酒石酸含量測定方法。經專屬性、線性、準確度、精密度、耐用性等試驗，表明所選用方法簡便、準確、快速，可用于二氧化氯固體消毒劑活化劑中DL-酒石酸含量測定。

[1] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2010年版一部[S].

[2] 衛生部.消毒技術規范2002年版[Z].

[3] 杜娟娟,柏子龍,李樹華.分光光度法測定環氧琥珀酸合成體系中的酒石酸[J].精細石油化工,2008,25(3):69-72.

[4] 劉哲,劉克納,沈冬青,等.有機酸與無機陰離子的梯度離子色譜法分析研[J].色譜,1997,15(4):334.

[5] 郭燕,梁俊,李敏敏,等.高效液相色譜法測定蘋果果實中的有機酸[J].食品科學,2012,33(2):227-230.

[6] 李寧,付繼瑩.高效液相色譜法測定鹽酸拓撲替康中酒石酸含量[J].黑龍江醫藥,2010,23(6):884-885.

[7] 李金昶,王元鴻,崔秀君等.高效液相色譜法分離和測定酒石酸和馬來酸[J].分子科學學報,2000,16(2):125-127.

[8] 程仕勇,晉日亞.中國二氧化氯固體制劑的研究與發展[J].無機鹽工業,2011,43(2):7-9.

[9] 宋麗英,李素娟.穩定性二氧化氯活化劑活化效果比較[J].中國消毒學雜志,2004,21(4):323-325.

[10]高海燕,廖小軍,王善廣等.反相高效液相色譜法測定果汁中11種有機酸條件的優化[J].分析化學研究簡報,2004,32(12):1645-1648.

(編輯：陳希)

RP-HPLC Determination of DL-tartaric Acid in Solid Chlorine Dioxide Disinfectant

ZHANG Jing-yan1, ZHANG Hong2, CHEN Hua-qi1*, XU Ji-ying3

(1.LanzhouInstituteofHusbandryandPharmaceuticalScienceofCAAS,Lanzhou730050,China;2.GansuInstituteofVeterinaryDrugandFeedInspection，Lanzhou730030，China;3.NorthwestUniversityforNationalities,Lanzhou730050,China)

A method for the determination of DL-tartaric acid in the Solid chlorine dioxide disinfectant Was developed by the reverse high performance liquid chromatography(RP-HPLC).The C18 colum (4.6 mm×250 mm，5μm) was used with the mobile phase consisted of 0.4 mol/L KH2PO4(pH was adjusted to 2.4 by H3PO4) and the detection wavelength of 214 nm.The results showed that DL-tartaric acid had the good linear relationship at the range of 0.2～2.0 mg/mL(R2=0.9999) and the mean recovery rate was 97.0%～102.3%. The method was simple, accurate and fast in the determination of DL-tartaric acid in solid chlorine dioxide disinfectant.

DL-tartaric acid; determination; RP-HPLC

蘭州市農業科技攻關項目(2010-1-207)

2016-07-27

A

1002-1280 (2016) 10-0040-04

S859.79