液基薄層細胞檢測聯合細胞塊技術診斷胸腹水腫瘤

尚芳芳，趙 輝，王 強，種道臣

液基薄層細胞檢測聯合細胞塊技術診斷胸腹水腫瘤

尚芳芳，趙 輝，王 強，種道臣

目的探討液基薄層細胞學與石蠟包埋細胞塊技術在胸腹水腫瘤診斷中的聯合應用。方法對所有臨床送檢的胸腹水標本進行液基薄層細胞學檢查，同時將胸腹水沉積物制成石蠟包埋細胞塊，進行免疫組織化學染色，判斷細胞的良惡性，確定腫瘤細胞類型和組織起源。結果檢測476例胸腹水患者，單純液基薄層細胞學檢出良性病變310例，惡性90例，繼而進行細胞塊的免疫組織化學染色，確定良性365例，惡性111例，有統計學差異（P＜0．01）；確定分型104例，與液基薄層細胞學檢查（確定分型77例）比較，無統計學差異（P＞0．05）；確定腫瘤細胞來源92例，與液基薄層細胞學檢查（確定來源0例）比較，有統計學差異（P＜0．01）。結論液基薄層細胞學技術與石蠟包埋細胞塊技術聯合應用對判斷胸腹水的腫瘤細胞良惡性及組織來源具有重要價值。

液基薄層細胞檢測；胸腔積液；腹水；細胞塊；免疫組化染色

胸腹水（胸腔積液和腹水）是胸腹腔臟器病變常見的臨床表現，其產生機制較為復雜。胸腹水脫落細胞學檢查由于對患者損傷較小，操作方法簡單，檢查周期較短，已成為診斷腫瘤的重要方法。液基薄層細胞檢測早已廣泛用于胸腹水的檢測［1］，目前沉淀包埋石蠟切片法［2］及細胞塊免疫組織化學染色方法的應用對于胸腹水脫落細胞學檢查準確率有了很大提高。筆者所在醫院病理科自2010年9月以來，對476例胸腹水患者開展了細胞塊的制作及免疫組織化學染色技術，探討液基薄層細胞檢測及細胞塊的免疫組化染色技術對惡性腫瘤細胞的檢出情況及確定腫瘤細胞的分型及來源情況，報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料收集2010年9月—2014年5月解放軍第四〇一醫院臨床各科室送檢的胸腹水標本476例，其中胸腔積液368例，腹水108例。年齡21～99歲。均做了離心沉渣包埋切片并進行免疫組織化學染色。

1．2 試劑所用一抗體包括CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68、ER 和MaxVision檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。

1．3 方法

1．3．1 液基細胞學檢查 取新鮮胸腹水置于2個10 ml離心管內，每管8 ml，2000 r／min，離心10～15 min，棄去上清液，保留管底有用細胞，再加入大約細胞團體積3倍的細胞基液。在漩渦混勻器上混勻10 s后，用移液器吸取15 ml在脫脂載玻片上涂片，涂片面積直徑為1．5 cm。涂片干燥后用95%乙醇固定30 min，HE染色，中性樹膠封固。

1．3．2 細胞塊制作方法 取胸腹水置于50 ml離心管內，以2000 r／min的速度離心10 min，棄去上清液，留沉淀物在試管內，加入95%乙醇，邊加邊搖動，使沉淀物分散，再次放入離心機內2000 r／min離心10 min倒出上清液，然后用藥匙取出沉渣用擦鏡紙包裹［3］，放入包埋盒內，經LEICA ASP300S全自動組織脫水機脫水、透明、浸蠟。按常規組織標本的程序進行包埋、切片，HE染色，中性樹膠封固。

1.3．3 免疫組化染色步驟 常規脫蠟水洗，加3% H2O2室溫孵育10 min，蒸餾水洗；根據所應用一抗的特殊需要，加0．05%胰酶在37℃條件下消化10 min或枸櫞酸緩沖液經抗原修復，PBS沖洗；10%正常羊血清封閉，室溫孵育10 min，不沖洗；滴加一抗工作液CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68等覆蓋組織面，4℃冰箱過夜；PBS沖洗，二抗37℃孵育30 min；PBS沖洗，DAB顯色，鏡下控制；復染細胞核、分化、脫水、透明、封固。

1.3.4 陽性結果的判斷標準 在普通光鏡下觀察免疫組化染色結果，以10%以上的靶細胞（異型細胞或癌細胞）出現定位清晰的棕褐色或黃色顆粒為陽性表達，完全不著色為陰性表達［4］。

1.4 統計學方法應用SPSS17．0統計軟件，組間比較采用Pearson卡方檢驗。

2 結果

476例患者送檢標本中，胸腔積液368例，腹水108例，經液基薄層細胞學檢查，明確診斷良性病變310例，查見惡性腫瘤細胞90例，不能確定良惡性診斷的胸腹水病例76例。進一步進行細胞塊的免疫組織化學染色，確定良性胸腹水365例，惡性胸腹水111例（圖1）。兩種方法進行比較，細胞塊的免疫組織化學染色檢出情況優于液基薄層細胞學檢查，差異有統計學意義（χ2＝15．40，P＜0．01，表1）。

表1 兩種方法對于476例胸腹水惡性腫瘤細胞檢出情況

圖1 標本液基薄層細胞學檢查

476例胸腹水經液基薄層細胞學檢查，確定惡性腫瘤細胞90例，其中確定分型77例 （腺癌73例，小細胞癌4例），均未能確定惡性腫瘤細胞來源。繼而進行細胞塊的免疫組織化學染色，確定惡性腫瘤細胞111例，其中確定分型104例（腺癌99例，小細胞癌4例，鱗癌1例），確定惡性腫瘤細胞來源92例（肺來源的腺癌47例、肺來源小細胞癌3例、肺來源鱗癌1例，胃腸道來源的腺癌30例，卵巢來源的腺癌9例，乳腺來源的腺癌2例）（圖2）。

兩種方法對于確定分型的比較，差異無統計學意義（χ2＝3．67，P＞0．05）；對于確定惡性腫瘤細胞來源的比較，差異有統計學意義（χ2＝137．56，P＜0．01，見表2），細胞塊的免疫組化染色技術優于液基薄層細胞學檢查。

表2 兩種方法對于確定分型和來源的比較

3 討 論

液基薄層細胞檢查技術在胸腹水細胞制作方面已很成熟［5］。細胞涂片薄層，細胞收集率高，背景清晰，容易閱片。對于數量較多、較典型的腫瘤細胞診斷較明確。但對于某些腫瘤細胞較少，沒有臨床病史依據或者對可疑癌和高分化癌細胞、反應性間皮細胞和間皮瘤等較難鑒別診斷的疑難病例較難確診。雖然液基薄層細胞涂片也可以行免疫細胞化學染色，但具有細胞陽性區域不易確定，非特異性著色較多，所能標記的抗體種類、數目有限等缺點。

圖2 同一細胞塊的免疫組化染色

細胞塊技術具有組織學特點，細胞結構清晰，可提高陽性率；切片可以復制，資料容易保存，并可進行多項檢查［6］。應用細胞塊進行免疫組織化學染色陽性部位明顯，色彩鮮艷，定位準確，背景清晰，具有很高的可靠性及可重復性，對于鑒別良惡性胸腹水及判斷惡性腫瘤細胞來源具有重大的科學性及實用性［7］。筆者采用CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68等抗體進行胸腹水細胞塊免疫組化染色，結果發現上述10種抗體對肺、胃腸、胰腺、卵巢、乳腺等部位的組織起源的確診具有重要意義。

本研究結果表明，與液基薄層細胞檢查比較，繼而進行細胞塊免疫組織化學技術對惡性腫瘤的確診率和可疑癌所占比例，差異有顯著性（P＜0．01）。液基薄層細胞檢查與細胞塊的免疫組織化學技術聯合應用可明顯提高癌確診率和降低可疑癌的診斷率，且能確定大部分腫瘤細胞的類型和來源，更能為臨床提供可靠診斷依據。

總之，對常規胸腹水脫落細胞學診斷有疑問的病例，進行細胞塊及免疫組織化學檢測具有重要意義。將兩種方法相結合不僅可以在疑難胸腔積液和腹水鑒別診斷中起關鍵作用，還可鑒別惡性腫瘤細胞的類型和來源，為臨床的明確病因及進一步治療提供了很重要的依據。

［1］Laucirica R，Bentz JS，Souers RJ，et al．Do liquidbased preparations of urinary cytology perform differently than classically prepared cases？observations from the college of American pathologists interlaboratory comparison program in non-gynecologic cytology［J］．Archi Pathol Laborat Med，2010，134（91）：19－22．

［2］Patricia AF，Aylin S，Keith B，et al．Comparison of three commonly used cytologic preparation in effusion immunocytochemistry［J］．Diagn Cytooathol，2002，26（1）：61－66．

［3］曹躍華，楊 敏，陳隆文，等．細胞病理學診斷圖譜及實驗技術［M］．北京：北京科學技術出版社，2009：410－412．

［4］毛瑛玉，楊 敏，劉冬戈，等．細胞塊切片免疫細胞化學染色在漿膜腔積液細胞學診斷中的應用［J］．中華病理學雜志，2009，38（8）：547－550．

［5］Sioutopoulou DO，Kampas LI，Gerasimidou D，et al．Diagnosis of metastatic tumors in cerebrospinal fluid samples using thin layer cytology［J］．Acta Cytol，2008，52（3）：304－308．

［6］Nangia R，Sait SN，Block AW，et al．Trisomy 6 in basal cell carcinomas correlates with metastatic potential：a dual color fluorescence in situ hybridization study on paraffin sections［J］．Cancer，2001，91（10）：1927－1932．

［7］Sriram KB，Relan V，Clarke BE，et al．Diagnostic molecular biomarkers for malignant pleural effusions［J］．Future Oncol，2011，7（7）：737－752．

［2015-10-19收稿，2015-11-17修回］

［本文編輯：吳 蓉］

Liquidbased thin－cytologic test combined with cell block sections technology for diagnosing hydrothorax and ascites tumor

SHANG Fang-fang，ZHAO Hui，WANG Qiang，et al.
The Pathology Department of the 401st Hospital，Qingdao，Shandong 266071，China

ObjectiveTo evaluate the combined application of routine liquidbased thin－cytologic test and cell block sections in hydrothorax and ascites tumor cytodiagnosis．MethodsImmunohistochemical staining of cell block paraffin embedding cell block were carried out to determine the characteristics of tumor cells，as well their type and origin．Routine liquidbased thin－cytologic test was alone performed as a control．ResultsTotally 111 of 476 patients were diagnosed malignant，and 365 benign through paraffin embedding cell block and immunohistochemical staining，which was significantly better than alone routine liquidbased thin－cytologic test detection（310 benign lesions and 90 malignant tumors）（P＜0．01）；No statistically significant difference were found in tunor classification（104 cases）compared with TCT（77 cases）（P＞0．05）；Significantly difference was found in tumor origin（92 cases）compared with TCT（0 case）（P＜0．01）．ConclusionThe combined application of routine liquidbased thin－cytologic test and cell block sections from hydrothorax and ascites can provide valuable methods of tumor diagnosis and to distinguish the origins of tumor cell tissues．

Liquidbased thin－cytologic test；Pleuraleffusion；Ascites；Cellblock；Immunohistochemical staining

R730.43

A

10.14172/j.issn1671-4008.2016.04.006

266071山東青島，解放軍401醫院病理科（尚芳芳，趙輝，王強，種道臣）