腦損傷動物模型實施亞低溫的模式概述

劉成龍，陳翀，孫洪濤

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腦損傷動物模型實施亞低溫的模式概述

劉成龍，陳翀，孫洪濤

摘要：腦損傷是全球死亡和致殘的主要原因之一，給社會和家庭帶來沉重的負擔。腦損傷動物模型的亞低溫實驗能夠為腦損傷的治療提供新的干預及治療措施。在大量的腦損傷動物模型的亞低溫治療實驗中，其腦保護的作用已經被證實。然而，目前的腦損傷動物實驗的亞低溫治療模式尚不明確，其最佳的治療模式如低溫持續的時間、低溫誘導的方法以及最佳的溫度等仍然未知。本文對腦損傷動物模型的亞低溫實驗方法進行概述。

關鍵詞：亞低溫；腦損傷；動物模型；治療模式

作者單位：天津，腦創傷與神經疾病研究所，武警后勤學院附屬醫院腦科醫院，天津市神經創傷修復重點實驗室（郵編300162）

腦損傷因其高死亡率、高致殘率，成為當今醫學面臨的難題，給社會和家庭帶來沉重的負擔，因此尋找有效的治療措施是當前腦損傷研究領域的迫切需求[1-2]。人們對于低溫治療具有神經保護功能的認識已經有1個多世紀的歷史。由于對腦損傷所引起的繼發性神經損傷級聯反應這一病理生理學機制已經得到證實，使用低溫治療阻斷這種繼發性損傷并發揮其神經保護作用的方法再度為學者所關注[3]。近期，有學者提出，盡管目前有大量亞低溫治療腦損傷的動物實驗，但其最佳的治療模式如低溫持續時間和最合適的誘導方法[4]，以及產生最佳神經保護功能的溫度仍未確定[5]。由此，本文擬對腦損傷動物模型的亞低溫實驗方法進行綜述。

1　亞低溫的神經系統保護作用

早期觀點認為亞低溫能夠降低大腦的新陳代謝是其腦保護作用的首要機制，大腦溫度每降低1℃，其代謝速率降低6%[6]。目前動物研究顯示亞低溫神經保護作用與減弱顱腦創傷（traumatic brain injury, TBI）后繼發性損傷有關。亞低溫的神經系統保護作用包括：（1）降低顱內壓。（2）保護血-腦屏障，減少血管源性水腫。（3）減弱免疫反應、自由基產生，降低腦代謝及興奮性毒性發生，減少細胞凋亡。（4）抑制癲癇發作[7]。（5）改善TBI后受損腦組織缺氧、毒素累積所產生的微環境[8]。（6）通過降低組織的耗氧量，減緩組織缺血時對三磷酸腺苷（ATP）的消耗速度，從而提高組織對缺血缺氧的耐受力等[9]。

2　腦損傷動物模型

2.1 TBI模型TBI動物模型常用的造模方法有可控性皮質損傷（controlled cortical injury, CCI）和液壓沖擊（fluid percus?sion, FP）腦損傷法。CCI打擊參數根據研究的目的、造模動物及損傷程度的不同而不同，在小鼠TBI模型制作過程中，Lee等[10]應用的速度為3 m/s，深度為1.0 mm，停留時間為150 ms，而有的學者則應用深度為2.0 mm的打擊參數[11]。FP中度腦損傷打擊參數范圍為1.7～2.3個大氣壓[12-15]。其他TBI模型，通過視神經的牽拉傷制作創傷性軸索損傷模型[16-17]。2.2缺血缺氧再灌注腦損傷模型該損傷模型的制作大致有心臟驟停再復蘇和動脈阻塞等方法。有學者報道應用靜脈注射氯化鉀或經食管心臟起搏器的方法誘發心臟驟停，然后進行胸部按壓、靜脈注射腎上腺素等使其恢復自主循環，從而制作出缺血再灌注的動物模型[18-19]。動脈阻塞法：（1）應用遠程可控血管封堵器短暫封閉雙側頸總動脈后，將實驗動物置于缺氧環境中[20]。（2）分離結扎左側或右側頸總動脈并暴露于缺氧環境中[21-22]。（3）通過分離頸內動脈、頸外動脈及頸總動脈，將尼龍線末端燒灼后插入頸內動脈管腔直到大腦中動脈起始部來造成閉塞[23]。

3　亞低溫治療腦損傷的模式

Auriat等[4]在研究長時程亞低溫對于缺血缺氧性腦損傷大鼠模型治療效果的研究中提出，盡管目前有大量亞低溫的動物實驗，但其最佳的治療模式如低溫持續時間和最合適的誘導方法仍然未知。

3.1麻醉方式目前大多數動物亞低溫實驗是在麻醉狀態下進行的。麻醉方式大致有氣體麻醉及藥物麻醉。（1）氣體麻醉：主要的麻醉藥物有氟烷或異氟烷混合7∶3的一氧化二氮和氧氣，其劑量與實驗研究對象及麻醉的深淺程度有關。3%氟烷混合7∶3的一氧化二氮和氧氣麻醉，機械通氣后以0.5%氟烷混合氣體維持[24]。2.5%異氟烷麻醉，通過鼻錐麻醉面罩維持[17]。2%氟烷混合7∶3的一氧化二氮和氧氣并機械通氣維持[13,25-26]。（2）藥物麻醉：戊巴比妥鈉腹腔注射，克他命（氯胺酮）、鹽酸賽拉嗪、阿托品肌內注射[15,27]。也有學者于實施亞低溫實驗前腹腔注射水合氯醛[12]和戊巴比妥鈉[19]進行麻醉。（3）亞低溫全程無麻醉：有學者在用藥物誘導的亞低溫實驗中未對小鼠進行麻醉，發現其亞低溫全程清醒且無寒戰反應[10-11]。3.2亞低溫治療的時間窗臨床研究中，一般認為缺血性腦損傷宜盡早實施亞低溫，出血性腦損傷則宜在損傷晚期實施，而對于創傷性腦損傷，亞低溫治療的時間窗仍存在爭議。動物實驗研究中，實施亞低溫的時間同樣未確定。

有學者于TBI損傷后立即實施亞低溫[17,27-28]，有的則分別于損傷后10 min[24]、15 min[11]、30 min[15]實施亞低溫治療。Lee 等[10]在神經降壓素受體阻滯劑HPI-363引導的亞低溫研究中，分別于TBI術后15、60、120、180 min予以亞低溫治療并得出結論：藥物HPI-363誘導亞低溫治療的時間窗至少是急性TBI后2 h。有研究在新生幼豬的缺血缺氧性腦損傷模型中于損傷后2 h開始實施亞低溫治療[5]。也有研究于缺血缺氧腦損傷復蘇后進行亞低溫治療[19-20,29]。Ichinose等[21]對出生第6天的SD大鼠進行左側頸總動脈結扎，恢復1 h后，置于低氧的溫度控制箱內進行亞低溫治療。

3.3亞低溫的目標溫度與時程在眾多的腦損傷動物亞低溫實驗中，其目標溫度及時程不盡相同。在豚鼠創傷性軸索損傷模型中應用的目標溫度是32.0～32.5℃并維持4 h[16]。Bramlett等[24]應用FP制作創傷性軸索損傷模型，其亞低溫組用中度低溫30℃和輕度低溫33℃維持3 h。SD大鼠視神經牽拉傷模型中應用的目標溫度為32℃維持3 h[17]。Girisgin 等[28]在研究TBI后神經保護功能與亞低溫深度的關系中，規定中度亞低溫組為32～33℃，深度亞低溫組為32～30℃并維持3 h。TBI后藥物誘導亞低溫治療研究中，Lee等[10]設定亞低溫實驗的目標溫度波動于32～34℃維持6 h，Gu等[11]研究則規定其目標溫度波動于32～35℃維持6 h。在其他的TBI后亞低溫的實驗研究中，有的學者規定其亞低溫治療的目標溫度及持續時間為32℃維持4 h[12-13]，有的規定為33℃維持3 h[26]，還有的規定為33℃維持4 h[15,30]。

新生幼豬的缺血缺氧腦損傷模型亞低溫治療中，Kerenyi 等[5]分別應用30℃、33.5℃及35℃治療24 h，Ezzati等[20]應用33.5℃維持18～24 h，Hoque等[29]應用（37.0±0.2）℃維持48 h。鼠的缺血缺氧腦損傷模型亞低溫治療實驗中，有學者應用（28.8±1）℃維持8 min的亞低溫模式[18]，有的應用（32±1）℃維持1 h[21]，有的（32±1）℃維持4 h[19]，有的32℃維持3 d[4]，有的則是（33.0±0.5）℃維持6 h[23]。

3.4亞低溫誘導的方法及維持目前誘導亞低溫的方法按其原理分為物理降溫和藥物降溫。根據動物實驗中物理降溫的方法不同分為：小風扇吹風降溫，冰水、冰塊及噴霧體表降溫，血管內降溫和自動制冷降溫。

3.4.1物理降溫（1）小風扇吹風降溫法。應用小風扇直接向頭部吹冷風使體溫下降[24]。Ma等[17]通過用風扇吹頭部、冷水噴霧及冰袋包裹軀體的方法誘導低溫并維持。（2）冰水、冰塊及噴霧體表降溫法。將已麻醉的SD大鼠軀干浸入冰水中，浸冰水前用塑料袋將其包裹而頭部露出，當頭部溫度降至距離目標溫度差2℃時，將大鼠從冰水中取出，15～30 min誘導至目標溫度（32℃或33℃）后，間斷應用冰袋或烤燈使大鼠維持于目標溫度[12-13,26]。有學者于橡膠手套的手指部分填充碎冰塊，放置于SD大鼠頭部以誘導至目標溫度，1個充滿碎冰塊的橡膠手指用于誘導中度低溫，2個這樣的橡膠手指用于維持深度低溫[28]。通過不同溫度（0～1℃或5～6℃）的冷水袋誘導不同程度的亞低溫[14]。用70%、75%乙醇或異丙醇向實驗對象噴霧或涂擦體表來誘導低體溫[18-19,21]。（3）血管內降溫法。Kuo等[27]向SD大鼠右側頸外靜脈注射4℃生理鹽水來誘導亞低溫。（4）自動制冷降溫法。有學者聯合制冷/加熱系統和局部吹冷風、烤燈來誘導并維持目標溫度。用水墊包裹實驗動物并通過降低水溫誘導并維持低體溫[5,20]。用可循環冷水的冰帽誘導并維持低溫[29]。

3.4.2藥物降溫近期有研究顯示應用神經降壓素受體阻滯劑HPI-363腹腔注射來誘導亞低溫，其藥物應用的方法為：首次劑量0.3 mg/kg（C57BL/6小鼠，8～12周，22～28 g）在30～60 min內使體溫下降3～5℃，之后間隔大于1.5 h半量注射以維持目標體溫[10]。另一項研究應用神經降壓素受體阻滯劑HPI-201對新生14 d的Wistar鼠進行腹腔注射，其首次劑量2 mg/kg，間隔1.5～2 h半量注射1～2次以維持低體溫[11]。3.5復溫在臨床研究中復溫作為亞低溫治療的最后一個階段，被認為是最危險的階段，然而在動物的亞低溫實驗中復溫的方法及速率卻較少被明確提及。Bramlett等[24]在SD大鼠TBI模型亞低溫治療的末期，于15 min內使其恢復正常體溫。在幼豬缺血缺氧腦損傷模型亞低溫治療的末期，使用自動加熱/制冷水墊裝置，加熱水墊并以0.5℃/h的速率復溫[5]。Maxwell等[16]對創傷性軸索損傷的豚鼠行亞低溫治療并以慢速復溫每40 min 1℃，中速復溫每20 min 1℃，快速復溫每10 min 1℃，研究不同復溫速率對亞低溫結果的影響，結果提示在亞低溫治療創傷性軸索損傷中，復溫速率超過每10 min1℃時可引起繼發性軸索病理性改變。

4　亞低溫的實驗監測方法

臨床研究中顯示，亞低溫治療過程中會出現較多的并發癥或不良反應，如寒戰、電解質紊亂、酸堿平衡失調、胰島素抵抗、腎功能障礙、心臟功能障礙等[6]。動物的亞低溫實驗中，監測其生理指標及生命體征有助于排除上述并發癥或不良反應對實驗結果的干擾。

4.1生命體征監測體溫的監測常用探針監測顳肌溫度、直腸溫度及腦皮質溫度。頸總動脈插管、股動脈插管監測平均動脈壓[10,14-15,30-31]。應用皮下非侵襲的經皮裝置監測心率[28]。

4.2生理指標監測主要通過頸總動脈插管、股動脈插管或鼠尾動脈插管進行血氣分析來監測血pH、二氧化碳分壓、氧分壓等指標。

5　亞低溫的實驗觀察指標

亞低溫動物實驗結果檢測的指標主要依據亞低溫的腦保護機制，如減少炎癥反應、抑制凋亡、保護血腦屏障等，這些指標主要通過蛋白免疫印跡（Western blot）、免疫組織化學及組織病理學等方法進行檢測。

5.1 Western blot檢測其目的主要是：（1）檢測凋亡相關蛋白的表達量，如caspase-3[15,25]、凋亡誘導因子[19]（apoptosis in?ducing factor, AIF）以及金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibi?tors of metalloproteinases, TIMPs）[13]在神經元或腦組織的表達水平。（2）檢測炎癥相關因子如腫瘤壞死因子α（tumor necro?sis factor-α, TNF-α）、白細胞介素（interleukin, IL）-1β、cas?pase-1、caspase-11、中樞神經系統中與炎癥因子相關并參與調節炎癥的因子嘌呤能受體P2X7以及抗炎因子IL-10的表達量來揭示亞低溫的治療效果[10-11,15]。（3）分析腦皮質大分子蛋白質如免疫球蛋白G、緊密連接相關蛋白、基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）-2、MMP-9的表達量用于揭示血腦屏障的破壞程度[10-11]。（4）自噬通路相關蛋白檢測，有研究顯示TBI后微管相關蛋白輕鏈3（Light Chain3, LC3）、酵母自噬基因Atg6/Vps30同源基因Beclin-1的表達升高，經亞低溫治療后其表達量進一步增加，在損傷同側海馬區域，細胞死亡下降而細胞自噬增加，并認為細胞自噬可能參與TBI后亞低溫治療的神經保護作用[12]。

5.2基因水平的檢測基因水平的檢測有RT-PCR技術，其主要用于檢測相關因子在RNA水平的表達。有研究應用cDNA技術發現133個轉錄體在低溫組的表達水平與正常溫度組差異有統計學意義，經分析這些基因中有9個基因本體的類別受到亞低溫的顯著影響，這9個基因主要參與突觸組織形成和炎癥反應調節，其中Ank3、Cmbp、Nrxn3、Tgm2、Fc?gr3的mRNA表達量顯著受到亞低溫的影響[26]。

5.3免疫組織化學利用特殊標記的抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應標記目標細胞或特定的組織蛋白分子，并對陽性細胞或組織蛋白分子進行定量分析。（1）標記正常神經元，利用NeuN染色，并對特定區域的正常神經元計數，用以評價亞低溫的治療效果[12,15,30]。（2）標記變性壞死的神經元，利用銀染法[24]對變性壞死的神經元進行染色；運用Fluoro-JadeB染色法標記TBI后變性神經元[31]；使用末端標記法（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling, TUNEL）檢測變性壞死神經元[10-11,14]；通過對變性壞死神經元的標記并進行定量分析，評估亞低溫治療效果。（3）對特定組織因子進行標記，運用相應抗體對誘導型一氧化氮合酶、3-硝基酪氨酸進行標記以檢測氧化性損傷的程度[27]，用相應的抗體標記LC3、Beclin-1，并對特定區域的陽性細胞計數以評估自噬反應的程度[12]。

5.4組織病理學運用不同的染色方法對組織或細胞進行染色，利用顯微鏡等技術進行觀察，并予以定性或定量分析。（1）創傷性軸索損傷后，運用透射電鏡對損傷的視神經片段進行觀察，利用體視學技術分析軸索中微管、神經蛋白纖維的數量及間距[16]。電子顯微鏡觀察并計數軸索的密度[17]。（2）TBI及腦梗死后的損傷容積運用尼氏染色法[10-11]、蘇木精-伊紅染色法[30]、氯化三苯基四氮唑[14,27,31]對切片進行染色，然后將切片數字化處理，應用圖形處理軟件計算損傷的容積。（3）血腦屏障損傷后，采用伊文思藍染色后對腦組織行冠狀切片，通過熒光顯微鏡觀察其熒光滲漏，運用圖像處理軟件行定量分析[10-11]。

5.5行為學檢測行為學檢測用于亞低溫治療腦損傷動物后對其感覺運動功能恢復情況的評價。（1）脫粘實驗是在小鼠前肢粘上圓形小物體后，記錄其接觸和脫去圓形物體的時間。（2）圓柱實驗用于檢測運動皮質單側損傷致使前肢運動不對稱的恢復情況，采用鼠籠監視系統對小鼠的行為進行持續觀察，并記錄時間分析其感覺運動恢復情況[10]。（3）斜坡實驗是將大鼠放置斜坡上，通過改變傾斜角度來測量肢體強度[14]。（4）拴住大鼠尾巴吊離地面1 m，緩慢下降，觀察其姿勢并予以評分，將大鼠放置狹窄的梁上行走，觀察其行為反應并予以評分[23]。

6　展望

盡管目前已經得出亞低溫具有神經保護功能的結論，但是動物亞低溫實驗的模式不盡相同，仍然無理想統一的治療參數，這或許將成為今后研究的一個方向。從腦損傷動物的亞低溫治療的實驗指標中不難看出，目前國內外仍集中研究探索亞低溫的腦保護機制，由于對亞低溫影響凋亡通路及調節因子的機制尚未完全明確，因而對于亞低溫阻斷凋亡機制的研究仍將繼續成為研究的熱點。細胞自噬與亞低溫腦保護作用的關系或將成為該研究的新熱點。

參考文獻

[1] Stocchetti N. Traumatic brain injury: problems and opportunities[J]. Lancet Neurol, 2014, 13(1):14-16. doi: 10.1016/S1474-4422(13) 70280-1.

[2] Yan H, Li B, Wang H, et al. Research progress of immune tolerance in the treatment of brain injury[J]. Chin J Contemp Neurol Neuro?surg, 2014, 14(8):734-737. [閆華,李冰,王宏,等.腦損傷免疫耐受治療研究進展[J].中國現代神經疾病雜志, 2014, 14(8):734-737]. doi:10.3969/j.issn.1672?6731.2014.08.017.

[3] Sherman AL, Wang MY. Hypothermia as a clinical neuroprotectant [J]. Phys Med Rehabil Clin N Am, 2014, 25(3):519- 529. doi:10.1016/j.pmr.2014.04.003.

[4] Auriat AM, Klahr AC, Silasi G, et al. Prolonged hypothermia in rat: a safety study using brain-selective and systemic treatments[J].Ther Hypothermia Temp Manag, 2012, 2(1):37- 43. doi: 10.1089/ther. 2012.0005.

[5] Kerenyi A, Kelen D, Faulkner SD, et al. Systemic effects of wholebody coolingto 35℃, 33.5℃, and 30℃in apiglet model of perina?tal asphyxia: implications for therapeutic hypothermia[J]. Pediatr Res, 2012, 71(5):573-582. doi: 10.1038/pr.2012.8.

[6] Choi HA, Badjatia N, Mayer SA. Hypothermia for acute brain inju?ry-mechanisms and practical aspects[J]. Nat Rev Neurol, 2012, 8 (4):214-222. doi: 10.1038/nrneurol.2012.21.

[7] Kramer C, Freeman WD, Larson JS, et al. Therapeutic hypothermia for severe traumatic brain injury acritically appraised topic[J]. Neurolo?gist, 2012, 18(3):173-177.doi: 10.1097/NRL.0b013e318253f8ef.

[8] Liao YP,Li XH,Sun HT.Researchstatus on Ts-SV40-mediatedtem?perature sensitive cells[J].Tianjin Med J,2015,43(3):323-326.[廖余平,李曉紅,孫洪濤.Ts-SV40介導的溫敏細胞研究現狀[J].天津醫藥, 2015,43(3):323-326].doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2015.03.027.

[9] Zhao XQ, Gu TX, Qian C. Evaluation of the effectiveness of mild hy?pothermia and IABP in postcardiac surgicalpatients with severe heart failure[J]. Tianjin Med J, 2014, 42(2): 141-142. [趙曉琪,谷天祥,錢程.亞低溫聯合IABP治療心臟外科術后低心排的效果研究[J].天津醫藥, 2014, 42(2):141-142]. doi:10.3969/j.issn.0253-9896. 2014.02.013.

[10] Lee JH, Wei L, Gu X, et al. Therapeutic effects of pharmacologi?cally induced hypothermia against traumatic brain injury in mice[J]. J Neurotrauma, 2014, 31(16):1417-1430. doi: 10.1089/neu.2013. 3251.

[11] Gu X, Wei ZZ, Espinerra A, et al. Pharmacologically induced hypo?thermia attenuates traumatic brain injury in neonatal rats[J]. Exp Neurol, 2015, 267:135-142. doi: 10.1016/j.expneurol. 2015.02.029.

[12] Jin Y, Lin Y, Feng JF, et al. Moderate Hypothermia significantly de?creases hippocampal cell death involving autophagy pathway after moderate traumatic brain injury[J]. J Neurotrauma, 2015, 32(14): 1090-1100. doi:10.1089/neu.2014.3649.

[13] Jia F, Mao Q, Liang Y, et al. The Effect of hypothermia on the ex?pression of TIMP-3 after traumatic brain injury in rats[J]. J Neu?rotrauma, 2014, 31(4): 387-394. doi: 10.1089/neu.2008.0814.

[14] Wang CC, Chen YS, Lin BS, et al. The neuronal protective effects of local brain cooling at the craniectomy site after lateral fluid percus?sion injury in a rat model[J]. J Surg Res, 2013, 185(2):753-762. doi: 10.1016/j.jss.2013.07.002.

[15] Tomura S, de Rivero Vaccari JP, Keane RW, et al. Effects of thera?peutic hypothermia on inflammasome signaling after traumatic brain injury[J]. J Cereb Blood Flow Metab, 2012, 32(10):1939-1947. doi: 10.1038/jcbfm.2012.99.

[16] Maxwell WL, Watson A, Queen R, et al. Slow, medium, or fast re?warming following post-traumatic hypothermia therapy? An ultra?structural perspective[J]. JNeurotrauma, 2005, 22(8):873-884.

[17] Ma M, Matthews BT, Lampe JW, et al. Immediate short-duration hy?pothermia provides long-term protection in an in vivo model of trau?matic axonal injury[J]. Exp Neurol, 2009, 215(1):119-127.

[18] Hutchens MP, Fujiyoshi T, Koerner IP, et al. Extracranial hypother? mia during cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation is neu?roprotective in vivo[J]. Ther Hypothermia Temp Manag, 2014, 4(2): 79-87. doi: 10.1089/ther.2014.0003.

[19] Zou Y, Zhou Y, Gao W, et al. Effects of mild hypothermia plus ifen?prodil on apoptosis inducing factor translocatin after global cerebral ischemia-reperfusion in rats[J]. Natl Med JChina, 2014, 94(17): 1353-1356. [鄒瑜,周迎,高瑋,等.淺低溫聯合艾芬地爾對大鼠全腦缺血再灌注后凋亡誘導因子的影響[J].中華醫學雜志, 2014, 94(17): 1353-1356]. doi:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2014.17.018.

[20] Ezzati M, Broad K, Kawano G, et al. Pharmacokinetics of dexme?detomidine combined with therapeutic hypothermiain apiglet asphyxia model[J]. Acta Anaesthesiologica Scand, 2014, 58(6):733-742.

[21] Ichinose M, Kamei Y, Iriyama T, et al. Hypothermia attenuates apoptosis and protects contact between myelin basic protein-expressing oligodendroglial-lineage cells and neurons against hypoxia-ischemia [J]. JNeurosci Res, 2014, 92(10): 1270-1285. doi: 10.1002/jnr.23418.

[22] Matsui T, Kida H, Iha T, et al. Effects of hypothermia on ex vivo mi?croglial production of pro-and anti-inflammatory cytokines and ni?tric oxide in hypoxic-ischemic brain-injured mice[J]. Folia Neuro?pathol, 2014, 52(2):151-158.

[23] Zhao J, Duan S, Zhou J, et al. Mild hypothermia reduces expression of Fas/FasL and MMP-3 after cerebral ischemia-reperfusion in rats [J]. Iran JBasic Med Sci, 2014, 17(6):454-459.

[24] Bramlett HM, Dietrich WD. The effects of posttraumatic hypothermia on diffuse axonal injury following parasaggital fluid percussion brain injury in rats[J]. Ther Hypothermia Temp Manag, 2012, 2(1):14-23.

[25] Jia F, Mao Q, Liang YM, et al. Effect of post-traumatic mild hypo?thermiaon hippocampal cell death after traumatic brain injury in rats [J].JNeurotrauma, 2009, 26(2):243-252. doi: 10.1089/neu.2008.0670.

[26] Feng JF, Zhang KM, Jiang JY, et al. Effect of therapeutic mild hypo?thermiaon the genomics of the hippocampus after moderate traumat?ic brain injury in rats[J]. Neurosurgery, 2010, 67(3):730-742.

[27] Kuo JR, Lo CJ, Chang CP, et al. Attenuation of brain nitrostative and oxidative damage by brain cooling during experimental traumat?ic brain injury[J]. J Biomed Biotechnol, 2011, 2011:145214. doi: 10.1155/2011/145214.

[28] Girisgin SA, Kalkan E, Erqin M, et al. An experimental study: does the neuroprotective effect increase when hypothermia deepens after traumatic brain injury[J]? Iran Red Crescent Med, 2015, 17(4): e21233. doi: 10.5812/ircmj.17(4)2015.21233.

[29] Hoque N, Sabir H, Maes E, et al. Validation of a neuropathology score using quantitative methods to evaluate brain injury in a pig model of hypoxia ischaemia[J]. J Neurosci Methods, 2014, 230:30-36. doi: 10.1016/j.jneumeth.2014.04.005.

[30] Suzuki T, Bramlett HM, Dietrich WD. The importance of gender on the beneficial effects of posttraumatic hypothermia[J]. Exp Neurol, 2003, 184(2):1017-1026.

[31] Yokobori S, Gajavelli S, Mondello S, et al. Neuroprotective effect of preoperatively induced mild hypothermiaas determined by biomark?ers and histopathological estimation in a rat subdural hematoma de?compression model[J]. J Neurosurg, 2013, 118(2): 370- 380. doi: 10.3171/2012. 10.JNS12725.

（2015-09-01收稿2015-10-16修回）

（本文編輯陳麗潔）

The overview on animal models of brain injury with mild hypothermia

LIU Chenglong, CHEN Chong, SUN Hongtao
Institute of Traumatic Brain Injury and Neurology, Brain Hospital of Affiliated Hospital of Logistics College of Chinese People′s Armed Police Forces, Tianjin Key Laboratory of Neurotrauma Repair, Tianjin 300162, China Corresponding Author E-mail: chenmo333@163.com

Abstract:Brain injury is a major cause of worldwide mortality and disability, and it has brought a heavy burden to so?ciety and family. The hypothermia of brain injury in animal models can provide new intervention and therapeutic measures for patients with brain injury. The protective role of mild hypothermia has been demonstrated in a large number of animal models of brain injury in experiments. However, the pattern of mild hypothermiain brain injury animals, at present, is not ful?ly delineated, and the optimal patterns, such as the duration, induced method and the topgallant temperature are still un?clear. Therefore, this paper summarized the experimental methods of mild hypothermiain brain injury of animal model.

Key words:mildhypothermia; brain injury; animal model; treatment pattern

中圖分類號：R-332

文獻標志碼：A

DOI:10.11958/20150140

基金項目：國家自然科學基金資助項目（81471275，81271392，81401067，81301050）

作者簡介：劉成龍（1988），男，碩士在讀，主要從事中樞神經創傷修復研究

通訊作者E-mail：chenmo333@163.com