結直腸癌的分子生物學診斷進展研究

歐陽方丹 郭勁霞 劉蓉

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結直腸癌的分子生物學診斷進展研究

歐陽方丹 郭勁霞 劉蓉

【摘要】近年來人們對于結直腸癌的關注度隨著其發病率的逐年上升而逐漸增長。早期的診斷是減少病情惡化、死亡的關鍵，本文對結直腸癌的分子生物學診斷進展進行綜述，為當前的結直腸癌臨床診斷工作提供借鑒意義。

【關鍵詞】結直腸癌；分子標志物；DNA；RNA；蛋白質

作為當前我國3大發病率最高的腫瘤之一，結直腸癌成為人們當前生活中不得不加以防范的疾病［1］。隨著臨床診斷技術的不斷發展，當前結直腸的臨床診斷、預防、控制得到了進一步的發展。其中，分子生物學標志物在結直腸癌臨床診斷中的進展迅速，其較高的敏感性、特異性受到人們的認可，成為當前結直腸癌臨床診斷的主要方式。

1 糞便分子標志物檢測

1.1 蛋白質檢測

在結直腸癌的臨床診斷中可通過對患者糞便、血液中分子標志物進行檢查，其中，糞便檢測具有無創的顯著特點，主要通過DNA、RNA、蛋白質3種分子標志物進行診斷［2］。在DNA、RNA、蛋白質3種標志物中，蛋白質是第一個用于糞便結直腸癌檢測的臨床分子標志物，且一直沿用于當前的臨床診斷中。鈣衛蛋白與肝珠蛋白是當前兩種主要蛋白標志物，鈣衛蛋白診斷敏感性為36%、特異性為91%；而肝珠蛋白的診斷敏感性為92%、特異性則為98%，但是聯合便潛血檢測器可將敏感性提高至100%。但是由于蛋白質會在糞便中出現不同程度的降解，因而容易形成假陰性、影響準確率。

1.2 RNA檢測

當前，醫學上已知的RNA標志物主要包括FLNA、CKS 2、氧化酶2及金屬蛋白酶7等多種基因轉錄中。目前，臨床上對于RNA標志物相對較少，具有較高的研究價值。相關研究顯示［3］，在結直腸癌患者的糞便檢測中，以環氧化酶2為診斷標志物的診斷敏感性為87%，特異性高達100%；用包含9個基因表達式的寡核昔酸微陣列分析、檢測，敏感性為78%，特異性也高達100%，具有較高的臨床疾病診斷前景。

1.3 DNA檢測

DNA診斷可利用K-ras突變基因與DNA甲基化進行，當前的基因突變檢查已從原來的單個標志物發展到多個突變的DNA標志物聯合診斷的方式。臨床上通常使用Pre Gen Plus試劑盒分析基因的突變情況，診斷敏感性、特異性均高達90%以上。為提高臨床診斷的準確性通常需要增加檢測標志物數目、升級配套的測序技術，因此通常會產生較高的診斷成本，在擴大應用范圍方面具有一定的局限性。DNA甲基化具有調控機制，在正常的情況下只對基因轉錄活性產生影響，并未涉及甲基化、Cp G島甲基化。當前的主要采用檢測Cp G島的高甲基化診斷結直腸癌，當Cp G島出現甲基化時可對患者的癌基因、細胞周期調控基因等的表達帶來一定的抑制作用［4］。為提高臨床診斷的準確率也通常采用2～7個種甲基化標志物聯合或者甲基化標志物聯合糞便基因突變的方式。其中，波形蛋白基因的甲基化聯合DNA完整性分析的診斷敏感性通常在在83%～88%，而特異性也高達82%以上。但是，糞便診斷也存在檢測方法復雜、成本高昂、轉變、儲存困難等問題，一定程度上限制糞便標志物檢測的發展。

2 血液分子標志物檢測

2.1 DNA檢測

除糞便檢測之外，血液檢測也是當前結直腸臨床診斷的一種主要的方式。與糞便檢測一樣，血液DNA最早也從K-ra、基因的點突變方面入手。但是與糞便不同的是，聯合多個突變標志物、甲基化標志物的方法無法提高臨床結直腸癌診斷的敏感性。通常情況下，對相同患者進行疾病診斷，血液NDA診斷敏感性要低于糞便DNA標志物檢測的敏感性。

2.2 RNA檢測

當前，血液RNA標志物的研究主要圍繞信使RNA（mRNA）進行，主要包括癌胚抗原、細胞角蛋白及人端粒酶逆轉錄酶等多個標志物［5］。使用單個mRNA標志物進行診斷，其敏感性通常在70%左右，而采用聯合檢測敏感性可高達89%。因為人體中大多數部位的血漿中都可檢測到L 6 mRNA、GCC mRNA及hTERT 3種標志物。因此，臨床檢測通常以上述3種標志物為主要的RNA標志物，其敏感性通常在79%～92%，特異性則在90%以上，最高可達100%。隨著臨床分子檢驗技術的發展，含有18～25個核昔酸小分子RNA在臨床結直腸癌臨床診斷中的作用也日益凸顯［6］。小分子RNA臨床診斷的敏感性在89%以上，具有一定的應用價值，但是由于小分子RNA對結直腸癌患者的特異性相對較差，因此在推廣方面受到了制約。

2.3 蛋白質檢測

癌胚抗原、糖類抗原是當前結直腸癌血液檢測中兩種主要的蛋白質標志物。較于DNA檢測，血液蛋白質的檢測操作更為簡單，獲取檢驗結果的時間更快［7］。癌胚抗原是一種最早應用與結直腸癌臨床中診斷的蛋白質標志物，且一直沿用至今。在結直腸癌D期患者的臨床診斷中，由于其敏感性、敏感性可高達90%以上，因此被廣泛用于結直腸癌患者的預后監測方面。CA 19-9、CA 195及CA 72-4等是較為常用的糖類抗原標志物，但是診斷敏感性與特異性均相對較低，通常采用將癌胚抗聯合糖類抗原的方式檢測，可提高疾病診斷的敏感性、特異性［8］。

3 討論

結直腸癌的臨床診斷、防治是一項任重而道遠的工作。當前分子學診斷技術的應用給結直腸癌的診斷、治療帶來了一定的促進作用，但是同時也存在一些不利因素。因此，應對分子學標志物進行不斷的研究，以多標志物聯合診斷、發掘新的標志物、創新檢測技術作為突破點，不斷提高分子學診斷的臨床診斷價值。

參考文獻

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［8］ 張觀坡，柏愚，李兆申. 結直腸癌早期診斷的分子生物學研究進展［J］. 國際消化病雜志，2015，35（4）：247-250.

【中圖分類號】R753.3+7

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9308（2016）16-0025-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.16.015

作者單位：湖南省益陽醫學高等專科學校生物化學教研室，湖南 益陽413000

Research on Molecular Biological Diagnosis of Colorectal Cancer

OUYANG Fangdan GUO Jinxia LIU Rong Department of Biochemistry，Yiyang Medical College， Yiyang Hu'nan 413000， China

［Abstract］In recent years， the attention of colorectal cancer has increased gradually with the incidence of colorectal cancer.Early diagnosis is the key to reducing the condition of the disease and the death of the disease，This article reviews the progress of molecular biology diagnosis of colorectalcancer，To provide reference for the current clinical diagnosis of colorectal cancer.

［Key words］Colorectal cancer， Molecular marker， DNA， RNA， Protein