藤黃酸抑制人食管癌ECA-109細胞增殖及MMP2分泌

劉柏林

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藤黃酸抑制人食管癌ECA-109細胞增殖及MMP2分泌

劉柏林

目的 探討藤黃酸（gambogic acid）對人食道癌ECA-109細胞生物學行為的影響。方法 用MTT法檢測不同濃度的藤黃酸對ECA-109細胞增殖的抑制的作用；用ELISA實驗檢測金屬蛋白酶MMP2蛋白的表達水平。結果 藤黃酸能明顯抑制ECA-109細胞的增殖，IC50值為140.18 mg/L。藤黃酸能抑制ECA-109 細胞分泌MMP2蛋白。結論 藤黃酸對于ECA-109細胞可以抑制其增殖，并能抑制其分泌MMP-2蛋白的功能。

食道癌；ECA-109；藤黃酸

食道癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，病理上以食管鱗狀細胞癌為主。食道癌患者早期癥狀不明顯，很多患者發現時已經是中晚期，手術效果差，5年生存率10%左右［1］。為了提高生存率，需要發現新的化療藥物，近年來研究發現，藤黃酸抑制淋巴瘤、結腸癌、胃癌等細胞生長，具有良好的抗癌活性［2-4］。因而，我們采用體外實驗，研究藤黃酸對人食道癌細胞ECA-109生長的抑制作用，為藤黃酸用于食道癌的治療提供一定的研究數據。

1　材料與方法

1.1實驗材料與儀器

藤黃酸購自Sigma-Aldrich公司，從美國ATCC公司購得人食道癌細胞系ECA-109，MTT購于Serva公司，胎牛血清和RPMI-1640培養液購自美國Gibico公司，MODE1680酶聯免疫分析儀為Bio-RAD公司產品，MMP2 ELISA試劑盒購自德國IBL公司。

1.2實驗方法

1.2.1MTT法 細胞重懸，并接種于96孔板，每孔細胞總量為100 μl，將其密度調整為2×104至4×104個細胞/孔，常規設立3個復孔，37℃，培養24 h后，不同濃度的藤黃酸被添加入相應的孔中，將等量培養基加入空白對照組中。常規培養48 h后，每孔加入MTT （10 mg/Ml） 20 μl，溫箱中常規培養，4 h后吸棄上清液，然后每孔添加DMSO 150 μl/孔，震蕩、混勻，在酶標儀上檢測490 nm波長處的光密度（OD）值，計算抑制率和IC50。

2　結果

2.1藤黃酸抑制ECA-109 細胞的增殖

48 h后，藤黃酸12.5、25、50、100、200、400 mg/L 作用于ECA-109細胞，48 h抑制率分別為（4.21±0.24）%、（6.32±0.47）%、（10.03±0.42）%、（36.54±0.47）%、（71.42±1.22）%、（82.75±2.01）%，分別與空白對照組［抑制率為（0.00±0.00）］相比較，差異具有統計學意義，P＜0.05，IC50值為140.18 mg/L。

2.2藤黃酸抑制MMP2的分泌

根據IC50值選用不同濃度藤黃酸（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L）進行ELISA檢測，測得MMP2值分別為（7.13±0.87）μg/L、（4.27±0.74）μg/L、（2.89±0.53）μg/L，明顯低于空白組細胞組（9.76±1.12）μg/L，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3　討論

藤黃酸是中藥藤黃的活性成分，具有抗癌活性，它通過多種機制抑制腫瘤細胞增殖。梁小慶等研究發現藤黃酸可以通過調節端粒酶逆轉錄酶mRNA表達，進而抑制MCF-7 細胞端粒酶活性（端粒酶的激活有利于細胞的永生化），抑制細胞增殖［5］。王勇［6］等研究發現，藤黃酸可以通過NF-κB信號通路，調節Cyclin D3和Cyclin E的表達，擾亂細胞周期，進而抑制細胞增殖。藤黃酸可通過下調核孔蛋白Nup88表達量，誘導U937白血病細胞的凋亡［7］。我們研究表明，實驗組（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L藤黃酸）細胞抑制率，明顯高于空白對照組細胞，提示藤黃酸能夠抑制ECA-109細胞增殖，這和其他學者相類似［2-3，5-7］。研究表明金屬蛋白酶MMP2能降解細胞外基質，在腫瘤中高表達，促進腫瘤細胞侵襲和遷移［8］。我們研究表明實驗組（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/ L藤黃酸）細胞MMP2分泌量，明顯低于空白組細胞的分泌量，提示藤黃酸能夠抑制ECA-109細胞分泌MMP2。MMP2能降解細胞外基質，對腫瘤細胞侵襲力有促進作用，當MMP2分泌下降時，ECA-109細胞遷移，侵襲力必然降低。根據我們的實驗結果可以推斷出，藤黃酸可能抑 制食管癌細胞的侵襲和遷移。

總之，藤黃酸能夠抑制ECA-109細胞的增殖，并減少MMP2的分泌，提示其具有抗食道癌的潛能，其具體作用機制，還需進一步研究。

［1］周瑩，張志強.食管癌的防治進展［J］.中國中西醫結合消化雜志，2016，24（4）:321-324.

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［3］黃愷飛，陸云華，何睿，等.藤黃酸對胃癌BGC-803細胞凋亡的作用及對survivin基因表達的影響［J］.中國藥科大學學報，2008，39（5）:474-478.

［4］徐勇，歐陽建，張啟國，等.藤黃酸通過MAPK通路誘導Jurkat細胞凋亡的機理［J］.中國實驗血液學雜志，2012，20（3）:587-591.

［5］梁小慶，俞軍.藤黃酸對乳腺癌細胞MCF-7細胞端粒酶活性及其逆轉錄酶 hTERT mRNA 表達的抑制作用研究［J］.實用老年醫學，2012，26（6）:483-486.

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［7］舒文秀，陳燕，何靜，等.藤黃酸對急性白血病細胞U937增殖和凋亡的影響及對核孔蛋白Nup88的調控作用［J］.中草藥，2008，39（1）:74-78.

［8］屈洪濤，楊伊林，王穗暖，等.MMP-2-PEX與MMP-2在侵襲性垂體腺瘤中的表達及意義［J］.中華神經外科疾病研究雜志，2013，12（1）:29-32.

Gambogic Acid Inhibits Proliferation and MMP2 Secretion of Human Esophageal Cancer Cell Line ECA-109

LIU Bolin Department of Laboratory and Pharmacy，Jiangsu Vocational College of Nursing，Huaian Jiangsu 223300，China

Objective It is to research the effect of gambogic acid （GA）on the biological behavior of human esophageal squamous cell carcinoma in ECA-109 cells.Methods The effects of gambogic acid on proliferation of ECA-109 cell was detected by MTT assay.ELISA assay was used to detected the level of MMP2.Results Gambogic acid can significantly inhibit the proliferation of ECA-109，IC50 is 140.18 mg/L.Gambogic acid aslo can inhibit the ECA-109 from secreting MMP2 protein.Conclusion As for ECA-109，gambogic acid can inhibit its proliferation as well as inhibit it from secreting MMP2 protein

Esophageal squamous cell carcinoma，ECA-109，Gambogic acid

R735

A

1674-9308（2016）21-0130-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.077

江蘇護理職業學院檢驗藥學系，江蘇 淮安 223300

1.2.2ELISA法 將對數生長期細胞，消化，重懸，并將其接種在6孔板內，每組常規設立3個復孔，24 h常規培養，將不同濃度藤黃酸（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L）添加入實驗組，同體積培養基加入空白對照組孔中，37℃，培養48 h后，收集細胞上清液，保存在-80°C冰箱內，上酶標儀檢測時取出。在MODE1680酶聯免疫分析儀上，于450 nm波長處檢測各孔A（吸光度）。

1.3觀察指標

主要觀察以下指標：（1）藤黃酸作用ECA-109細胞抑制率，腫瘤細胞生長抑制率=［1-（實驗組OD值組/空白對照組OD值］×100%。（2）藤黃酸作用于食道癌細胞IC50值（ECA-109細胞增殖受抑制一半時藤黃酸的濃度）。（3）各濃度組藤黃酸作用于食道癌細胞MMP2值。

1.4統計學方法

采用SPSS 17.0軟件對本研究的所有數據進行統計分析，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。