HPLC法測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素的含量

胡萍　徐曉棟　任琦

·論著·

HPLC法測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素的含量

胡萍徐曉棟任琦

目的 探討HPLC法測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素含量。方法 鹽酸多西環素含量測定應用HPLC法，采用AlltimaC 18柱，草酸銨溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氫二銨溶液0.2mol/L（65：30：5）為流動相，監測波長為280 mm。結果 48～489 mg/L，線性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均為98.35%，RSD 為1.30%。結論 HPLC法操作簡單，檢測結果準確，可作為質量標準檢測方法。

鹽酸多西環素；HPLC法；含量；高效液相色譜

鹽酸多西環素是一種半合成四環素，具有抗菌活性以及抑制膠原酶作用，是治療牙周病較為有效的藥物［1-2］。牙周病主要是因菌斑微生物所導致感染性疾病，長期給予抗生素，易產生耐藥菌株或者是菌群失調。報道顯示［3-5］，生物降解鹽酸多西環素，牙周袋注射，能控制齦下菌斑，對牙周致病菌產生抑制，緩釋時間能達到7 d。本文主要探討HPLC法測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素含量，具體如下。

1　儀器與試劑

1.1HPLC法

高效液相色譜分析法（HPLC法）將經典液相色譜作為基礎，以高壓下液體為流動相色譜過程。固定相所用固定相粒度小，為5～10 μm，且傳質快、柱效高。

1.2儀器

高效液相色譜儀（島津LC-10AT），AlltimaC 18柱，紫外檢測器（SPD-10AV）；電子天平、pH計、真空抽濾泵、超聲儀、干燥烘箱、恒溫水浴鍋、N 2000色譜工作站。

1.3試劑

中國藥品生物制品檢定所提供美他環素、土霉素、β-多西環素、多西環素，鹽酸多西環素緩釋藥線、自制重蒸水，其他試劑均分析純。

2　方法

2.1色譜

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，AlltimaC 18柱為4.6 mm×250 mm，5 μm；pH值調節使用氨試液，直至（8.1±2.2）；草酸銨溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氫二銨溶液0.2 mol/L（65∶30∶5）為流動相；流速為1.0 ml/min，檢測波長為280 mm，柱溫為35℃。

2.2制備對照品溶液與供試品溶液

取適量的多西環素，加鹽酸溶液0.01 mol/L，制成每1 ml中含200 μg多西環素對照組品溶液。取100 mg鹽酸多西環素緩釋藥線，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，搖晃均勻，取5.0 ml，并流動相稀釋定容于量瓶（10 ml）獲取供試品溶液。

2.3系統適應性

稱取8 mg美他環素、土霉素、β-多西環素、多西環素，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，并吸取1 ml，放置于棕色量瓶（10 ml），稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，制成混合溶液（約含0.08 mg/L），吸取20 μl進樣。理論塔板數：β-多西環素＞1.5、多西環素＞1.5、多西環素色譜峰＞1 500。

2.4輔料干擾

鹽酸多西環素緩釋藥線（自制），陰性樣品溶液制備參照供試品溶液制備方法，取20 μl，根據色譜條件，將其注入色譜儀，多西環素對照品對應位置敷料無色譜峰，提示不會干擾主藥含量測定。

3　結果

3.1繪制標準曲線

取24.5 mg多西環素對照品溶液，放置于棕色量瓶（50 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，對照品儲備液濃度為0.49 mg/ml，分別取儲備液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml，稀釋使用10 ml甲醇，20 μg進樣，對峰面積進行測定，濃度線性回歸，獲取回歸方程（A=43 765 C+562 000，r=0.999 6），結果顯示48～489 mg/L，線性良好。

3.2精密度

取200 mg/L多西環素對照品溶液，吸取20 μl，參照色譜，并注入色譜儀，持續6次進樣，對峰面積進行測定，峰面積平均為12 610 111 RSD%=0.70%，提示精密度好。

3.3樣品穩定性

取批號20 100 610、20 100 611、20 100 612制成供試品溶液，放置于棕色瓶，于室溫儲存，于1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進行測定，RSD為1.00%、0.97%、1.13%，提示避光條件下，樣品24 h內可保持穩定。

3.4回收率

取6份5 mg鹽酸多西環素，分別放置于棕色量瓶（10 ml），將按照比例稱定基質加入，溶解稀釋使用甲醇，直至刻度，搖晃均勻后過濾。量取5 ml續濾液，防治于量瓶（10 ml），加流動相，稀釋直至刻度，搖晃均勻，取20 μl鹽酸多西環素對照品溶液、供試品溶液，根據色譜，注入液相色譜儀，對峰面積進行測定，得出回收率，均回收，回收率平均為98.35%，RSD為1.30%。

3.5樣品

取適量鹽酸多西環素緩釋藥線，樣品溶液制備根據制備供試品溶液方法，去20 μl，按照色譜，注入色譜儀，對峰面積進行測定，并計算其含量，20 100 610、20 100 611、20 100 612樣品含量分別為9.84%、10.30%、9.93%。

4　討論

在測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素含量中，紫外分光光度法是即為常用的檢測方法，雖然簡單易行、成本低，但其專屬性較差。高效液相色譜分析法（HPLC法）靈敏度高，檢測結果準確可靠。出峰時間大約為10 min，15 min左右可完成1次測定。鹽酸多西環素含量測定需要避光操作，預防分解，且有多個有關物質，HPLC法能將各種物質有效分離［6-8］。樣品溶液、對照品均需要現配先用，注意操作速度，防止鹽酸多西環素分解，本文研究發現，48m～489 mg/L，線性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均為98.35%，RSD為1.30%。提示提示避光條件下，HPLC法，在樣品24 h內可保持穩定，可用于鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素含量測定。

總之，采取HPLC法測定鹽酸多西環素緩釋藥線中鹽酸多西環素含量，結果準確，可作為質量控制檢測方法。

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The Content of Doxycycline Hydrochloride in Doxycycline Hydrochloride Sustained-Release Thread by HPLC

HU Ping XU Xiaodong REN Qi Pharmacy Department，Xinyang Vocational and Technical Colleges Affiliated Hospital，Xinyang He'nan 464000，China

Objective To explore the determination of doxycycline hydrochloride doxycycline hydrochloride sustained-release thread HPLC.Methods Doxycycline hydrochloride content determination by HPLC，using AlltimaC 18 column and 0.05 mol / L ammonium oxalate solution：dimethyl formamide：diammonium hydrogen phosphate solution 0.2 mol / L（65：30：5）as mobile phase，wavelength monitoring for 280 mm.Results 48～489 mg/L，linearity was good，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，the average recovery rate was 98.35%，RSD was 1.30%.Conclusion HPLC method is simple and accurate，and can be used as a quality standard for testing.

Doxycycline hydrochloride，HPLC method，Content，High performance liquid chromatography

R927

A

1674-9308（2016）23-0134-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.23.084

信陽職業技術學院附屬醫院藥劑科，河南 信陽464000