頂空氣相色譜法測定吲哚酮類衍生物DHGA的溶劑殘留量

胡秋菊 　何杰　楊建云　肖炳坤　黃榮清

[摘 要] 目的：建立頂空氣相色譜法測定吲哚酮類衍生物DHGA中乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等4種殘留溶劑的分析方法。方法：采用石英毛細管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85?m），FID檢測器；進樣口溫度為140℃，檢測器溫度為250℃；程序升溫：初始溫度為35℃，保持10min，然后以10℃·min-1的速率升至200℃，保持7min。以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑，載氣為氮氣。結果：乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷的線性范圍分別為24.96～99.86?g·mL-1（r=0.9995）、15.04～60.15?g·mL-1（r=0.9996）、3.64～14.55?g·mL-1（r=0.9995）、3.05～12.19?g·mL-1（r=0.9996）。乙醇平均回收率為100.7%（RSD=2.78%）、甲醇平均回收率為101.3%（RSD=1.57%）、四氫呋喃平均回收率為99.96%（RSD=1.36%）、二氯甲烷平均回收率為99.05%（RSD=2.09%）。結論：該方法能夠準確、快速測定這4種殘留溶劑，適用于DHGA中殘留溶劑測定。

[關鍵詞] 頂空氣相色譜法；吲哚酮類衍生物；殘留溶劑

中圖分類號： O657 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2016）01-085-03

目前，腫瘤死亡率居所有疾病第二位，僅次于心腦血管疾病[1]。腫瘤發生和發展與細胞調控激酶活性異常有著密切關系，抑制其活性可以起到抗腫瘤效果[2]。DHGA作為吲哚酮類衍生物，可以通過抑制這些激酶表達，表現出一定抗腫瘤活性[3]。

吲哚酮類衍生物DHGA在合成過程中使用了乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等有機溶劑，為保證用藥安全、有效，需進行殘留量檢測。

1 儀器與試劑

Aglient（GC-6820）氣相色譜儀，安捷倫Cerity QA-QC色譜工作站（美國Agilent 公司），FID檢測器；Sartorius（BP211D）電子天平。乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷均為分析純；二甲基亞砜（DMSO）經過蒸餾純化制得，DHGA原料藥（批號：20131202、2031203、20131204，由軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所提供）；氮氣，（純度>99.99）。

2 試驗方法與結果

2.1 溶液配制

對照品儲備液：精密稱取乙醇0.2496g、甲醇0.1504g、二氯甲烷0.0305g、四氫呋喃0.0364g等4種有機溶劑，于100mL量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液：精密量取對照品儲備液1mL于50mL量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：精密稱量DHGA3批樣品（批號：20131202、20131203、20131204）各0.1g，于10mL量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻。

空白溶液：精密移取2mLDMSO于頂空進樣瓶中。

2.2 色譜條件

Agilent 6820氣相色譜儀，HP7694頂空進樣器，FID檢測器；色譜柱：石英毛細管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85?m）；載氣：氮氣（純度>99.9%），柱流速：3.6mL·min-1；柱溫為程序升溫，初始溫度為35℃，維持10min，然后以10℃﹒min-1速率升至200℃，維持7min；空氣流速：340 mL·min-1，氫氣流速：45mL·min-1，輔助氣流速：20mL·min-1；頂空瓶平衡溫度：90℃，傳送帶溫度：105℃，定量環溫度：110℃，頂空瓶加熱時間：30min；檢測器溫度：250℃，柱頭壓：5psi，分流比為10：1。在此色譜條件下，這4種殘留溶劑理論塔板數大于5000，分離度大于1.5。對照品溶液氣相色譜圖及空白DMSO色譜圖分別如圖1及圖2所示。

2.3 精密度

精密移取對照品溶液2mL，置20mL頂空瓶中，平行6次，按“2.2”項下氣相色譜條測定，計算乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷RSD分別為1.55%、1.97%、1.89%、1.67%，RSD均小于2%，說明精密度良好。

2.4 線性關系

從對照品儲備液中精密量取20?L、32?L、40?L、48?L、60?L、80?L分別置頂空瓶中，加DMSO至2mL，密封，按“2.2”項下氣相色譜條件測定。以被測殘留溶劑濃度x（?g·mL-1）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，所得線性回歸方程見表1。表明乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷在相應線性范圍內線性關系良好（r>0.999）。

2.5 檢測限與定量限

取乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷適量，以DMSO逐步稀釋，進行測定，按基線噪音信號3倍和10倍計算檢測限與定量限。結果乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷檢測限分別為39.50ng·mL-1、39.58ng·mL-1、44.35ng·mL-1、132.50ng·mL-1，定量限分別為98.75ng·mL-1、138.50ng·mL-1、88.70ng·mL-1、530.00ng·mL-1。

2.6 重復性

取一批DHGA樣品（批號為20131202），按“2.1”項下方法配制樣品溶液6份，進行測定。結果乙醇、甲醇、四氫呋喃和二氯甲烷均未檢出。

2.7 加樣回收率試驗

取DHGA（批號20131202）樣品約0.1g，精密稱定，置10mL量瓶中（共10份），1份作為空白，另外9份加入一定量對照品儲備液，配成80%（3份）、100%（3份）、120%（3份）對照品溶液。取2mL置頂空瓶中，按“2.2”項下氣相色譜條件測定，計算回收率，結果見表2。乙醇、甲醇、四氫呋喃和二氯甲烷平均回收率（n=9）分別為100.7%、101.3%、99.96%、99.05%。

2.8 樣品測定

按“2.2”項下色譜條件，檢測了3批DHGA樣品中有機溶劑殘留量。結果表明：3批DHGA樣品中均未檢測出乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷，符合規定。

3 討論

3.1 溶劑選擇

由于DHGA不溶于水，微溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF），所以不宜選擇常用水以及DMF作為溶劑。溶劑選擇熔點高、溶解性能好，常用DMSO作為溶劑[4]。

3.2 進樣方式選擇

溶液直接進樣和頂空進樣都是常用測定殘留溶劑方法[5-6]，溶液直接進樣法，不僅對色譜柱有污染而且樣品基線會漂移，產生鼓包，頂空進樣可以避免污染色譜柱，所以最終選擇頂空進樣。

3.3 結語

本試驗所建立方法能夠準確、靈敏測定DHGA中乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等有機溶劑殘留，可以作為DHGA有機殘留測定方法。

本文對3批DHGA原料藥樣品進行檢測，發現這3批樣品中均未含有乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等殘留溶劑，說明在合成過程中能夠很好除去其中殘留溶劑，合成工藝良好。

參 考 文 獻

[1] 王勇，龍亞秋.蛋白酪氨酸激酶小分子抑制劑研究新進展[J].有機化學， 2011， 31（10）： 1595-1606.

[2] ULLRICH A， SHLESSINGER J. Signal transduction genetics of cancer by receptors with tyrosine kinase activity [J]. Cell， 1990， 61（2）： 203-212.

[3] MOHAMMADI M， MCMAHON G， SUN L. Structures of the tyrosine kinase domain of fibroblast growth factor receptor in complex with inhibitors [J]. Science， 1997， 276（9）： 955-960.

[4] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典（二部）[S].北京： 中國醫藥科技出版， 2010： 61-65.

[5] 劉瑾，李建華，陳桂良. GC頂空進樣法和溶液直接進樣法檢測鹽酸多巴酚丁胺中有機殘留量方法比較[J].藥物分析雜志，2006，26（1）： 120-123.

[6] 張亞紅，米亞嫻. GC頂空進樣法和溶液直接進樣法檢測葡萄糖中甲醇方法比較[J].職業與健康， 2014， 30（9）： 1180-1182.