口服狂犬病毒痘苗誘餌的研究進展

秦梅　劉延亭　侯艷紅

摘要：狂犬病（Rabies）是一種重要的人獸共患傳染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染溫血動物和人后引起，一旦發(fā)病，死亡率幾乎達100%，是迄今為止人類病死率最高的急性傳染病。目前防制狂犬病的最有效的方法是在暴露后進行高免血清封閉以及免疫狂犬病疫苗。由于注射疫苗價格較高，注射不方便等缺點給防治和消滅狂犬病帶來了極大的困難。近年來，口服的免疫方式成為狂犬病毒疫苗研究的熱點，除了狂犬病毒疫苗組份，疫苗的投送工具——誘餌也是決定口服狂犬病疫苗效果的重要因素。本文就口服狂犬病毒疫苗誘餌的國內(nèi)外研究情況進行綜述。

關(guān)鍵詞：狂犬病毒疫苗；口服；誘餌

狂犬病毒又稱為恐水病，因被感染狂犬病病毒（Rabies virus）的“瘋”動物咬傷，感染性唾液污染傷口而發(fā)生致死性的腦脊髓炎，OIE將其列為B類疫病。狂犬病毒感染所有溫血動物，感染的人和動物一旦發(fā)病，幾乎都難免死亡。病毒主要侵害神經(jīng)系統(tǒng)，臨床癥狀為狂躁不安、意識紊亂、興奮、恐水、吞咽困難，最后因局部或全身麻痹而死亡。狂犬病可在世界范圍內(nèi)分布，是全球性的嚴重衛(wèi)生問題。我國是受狂犬病危害最為嚴重的國家之一，目前防制狂犬病的最有效的方法是在曝露后進行高免血清封閉以及免疫狂犬病疫苗。由于狂犬病毒的流行面積和宿主范圍非常廣泛，單靠注射免疫很難消滅狂犬病毒，特別是對于野生動物，用口服疫苗大面積免疫野生動物是消滅狂犬病毒的最有效方法。因此，近年來口服狂犬病毒疫苗的研發(fā)成為熱點，同時口服疫苗的研究也存在很多問題，如免疫后抗體效價較低。隨著口服疫苗技術(shù)的逐漸成熟，人們逐漸認識到優(yōu)秀的口服狂犬病毒疫苗不僅具有良好的狂犬病毒疫苗組份，選擇一種適合的疫苗抗原投送工具——誘餌，也是非常重要的。合適的誘餌不僅具有對靶動物具有很好的誘惑性，同時也要能使口服疫苗抗原在動物口腔中得到很好的釋放。

1 口服狂犬病疫苗及誘餌需滿足的條件

目前，狂犬病疫苗是野生動物疫苗中開發(fā)最成功的疫苗之一，為歐美等發(fā)達國家狂犬病的控制做出了巨大貢獻。狂犬病口服疫苗大致分為兩類：弱毒疫苗和基因工程疫苗。因弱毒疫苗保持有天然的免疫原性而得到研究者們的廣泛研究，ERA株、SAD株都曾用于口服疫苗的研究。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，基因工程疫苗已經(jīng)成為口服狂犬病疫苗研究的熱點，既可以保持免疫原性，又可以克服弱毒疫苗毒力返強的危險。口服疫苗除了活載體疫苗的研究，還有核酸口服疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗等。

口服疫苗需要滿足的條件：①通過口服對靶動物能產(chǎn)生很高的免疫原性；②對靶動物和其它動物具有很高的安全性；③基因組穩(wěn)定；④和野毒株具有明顯區(qū)別；⑤在野外各種溫度條件下能保存較長時間。

通過學(xué)者們多年來對口服狂犬病疫苗的研究，發(fā)現(xiàn)口服狂犬病毒疫苗抗原的投送工具—誘餌是決定高效免疫效果的重要因素之一，優(yōu)秀的疫苗誘餌可以使口服疫苗抗原在動物口腔中不斷釋放，進而激發(fā)動物的黏膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效的免疫應(yīng)答反應(yīng)。作為口服疫苗的誘餌必須滿足的條件是：①不影響疫苗的免疫效果；②對靶動物具有很強的吸引力，而且對靶動物和非靶動物安全性極高；③誘餌原材料容易獲得，生產(chǎn)成本較低；④不受外源因子的影響；⑤在野外條件下能夠起到保護疫苗穩(wěn)定性的作用；⑥要含有一種生物酶標記；⑦能耐受疫苗投放環(huán)境和保存條件。

2 國外對口服狂犬病疫苗誘餌的研究進展

1774年John最初選擇用雞蛋作為狂犬病疫苗載體，以狐貍作為實驗動物進行了口服研究，雖然這種疫苗載體未得到實際的應(yīng)用，但為以后的口服疫苗誘餌研究開發(fā)打下了堅實基礎(chǔ)。1775年Winkle和Baer用ERA和PRI株作為狂犬病毒疫苗株，用香腸作為誘餌對狐貍進行了口服免疫，可以產(chǎn)生有效的免疫效果。在此基礎(chǔ)上，1778年，瑞士研究者用10%蛋黃包裹雞頭做疫苗誘餌，發(fā)現(xiàn)60%的狐貍獲得了免疫保護。雞頭和香腸是最早選擇為口服疫苗誘餌的，其成本低，取材方便適合大規(guī)模的野外投放，免疫效果良好，因此，口服免疫開始在歐美等發(fā)達國家開始廣泛應(yīng)用。但是由于雞頭和香腸制作過程需要消耗大量人力，雞頭作為口服疫苗誘餌對靶動物的選擇性不強，雞頭也容易變質(zhì)，后來制作了以魚粉和脂肪為主要原料的口服疫苗誘餌，這種誘餌可以實現(xiàn)機械化大規(guī)模生產(chǎn)，以供歐洲各國統(tǒng)一野外投放。

1992年，F(xiàn)rontini在墨西哥用Linhat誘餌、魚粉聚合物誘餌和蠟餌對犬進行了采食實驗，結(jié)果表明這幾種誘餌的采食時間長，與犬餅干相比，誘惑性不明顯，所以這兩種誘餌的結(jié)合是犬全較為理想的誘餌。由于在美國狂犬病的主要傳播動物是浣熊，狂犬病疫苗誘餌的研究多以浣熊為實驗動物。1989年，Hadidian制作了一種主要以鯖魚醬為主的疫苗誘餌，體積約為3cm×3cm×3.5cm的矩形小塊，塑料小袋裝口服疫苗，然后石蠟封口后進行投放，采食率可以達到53%。同年P(guān)erry用熱狗、棉花糖、面包、果凍、蜜糖和蘋果醬等為材料的誘餌對浣熊進行了采食實驗，結(jié)果表明80%的浣熊可以產(chǎn)生很好的免疫保護。1991年Linhart用商業(yè)食品玉米粉、牛奶和雞蛋為主要原料作為口服疫苗誘餌，結(jié)果顯示90%的浣熊產(chǎn)生了很高的病毒中和抗體。到二十世紀90年代中期，美國梅里亞公司在以前誘餌制作的基礎(chǔ)上研制了以牛肉為主要原料的口服疫苗誘餌，這是目前世界上應(yīng)用最廣、最多的口服疫苗。據(jù)不完全統(tǒng)計，僅1990年到2000年美國在野外投放了2.2億頭份的這種以牛肉為主要誘餌成分的狂犬病疫苗，大大降低了狂犬病的傳播。2005年至2006年愛沙尼亞在野外對紅狐貍和浣熊投放了以RabidogSAG2為誘餌的口服狂犬病疫苗，73.5%的紅狐貍和浣熊激發(fā)產(chǎn)生了針對狂犬病毒的中和抗體。

口服狂犬病疫苗的免疫效果不僅與誘餌成分有關(guān)，疫苗誘餌的形狀、投放密度和投放次數(shù)也是影響免疫效果的因素。紅狐貍、狗和浣熊是傳播狂犬病的主要動物，方形誘餌和圓形誘餌相比，所有動物更傾向于喜歡采食方形誘餌。AndrewC研究發(fā)現(xiàn)同樣數(shù)量的口服疫苗，一次性高密度投放比持續(xù)性投放免疫效果更好。

3 國內(nèi)對口服狂犬病疫苗誘餌的研究進展

目前我國狂犬病的防控措施和國外相比還存在著很大差距。雖然要求所有犬必須注射狂犬病疫苗，但在實施中存在很大困難。有統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，在我國部分地區(qū)，外表健康的犬的狂犬病毒攜帶率超過2%，這是潛在的傳染源。因此，國內(nèi)口服狂犬病疫苗的研發(fā)已經(jīng)迫在眉睫。雖然目前市場上的狂犬病毒疫苗多種多樣，但是由于成本較高，免疫困難，無法在廣大的農(nóng)村地區(qū)普遍推廣。

由于國內(nèi)缺乏口服狂犬病毒疫苗誘餌的研究，張紅普2012年根據(jù)國外發(fā)達國家野外投放口服疫苗的經(jīng)驗和犬的生物學(xué)特性，利用廣西現(xiàn)有的經(jīng)濟資源研制了多種狂犬病口服疫苗誘餌。秘魯魚粉誘餌、巴基斯坦魚粉誘餌、犬糧誘餌和肉骨粉誘餌，腸衣包裹狂犬病口服疫苗，固體石蠟固定口服疫苗和誘餌。結(jié)果表明巴基斯坦魚粉制作的口服疫苗誘餌效果最好，采食率達到92.3%。

4 研究展望

口服疫苗誘餌是投送口服疫苗的良好工具，其適口性和穩(wěn)定性是影響口服疫苗免疫效果的直接因素。影響口服疫苗誘餌的重要因素有誘餌的選材、誘餌的投放密度、誘餌的投放次數(shù)。在選材上除了要考慮所選材料對靶動物的適口性外，還要考慮當(dāng)?shù)氐淖匀粭l件、材料的經(jīng)濟因素、靶動物的飼養(yǎng)習(xí)慣、采食習(xí)慣等。由于國內(nèi)對口服疫苗誘餌的研究很少，所以我們要結(jié)合國外對野生動物投放狂犬病疫苗的經(jīng)驗，結(jié)合國內(nèi)當(dāng)?shù)氐淖匀粭l件和經(jīng)濟因素來研究口服狂犬病毒疫苗誘餌。口服疫苗的免疫原理主要是靠黏膜免疫系統(tǒng)遞呈抗原，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效的黏膜免疫反應(yīng)，在這方面我國已經(jīng)有相關(guān)產(chǎn)品進入臨床，最具有代表性的就是脊髓灰質(zhì)炎口服疫苗糖丸，為人類戰(zhàn)勝脊髓灰質(zhì)炎病毒做出了巨大貢獻。所以，如果能夠研制出狂犬病的口服疫苗，加以優(yōu)秀合適的口服疫苗誘餌，那么人類克服狂犬病的難題會迎刃而解，也會有助于填補我國狂犬病口服疫苗領(lǐng)域的研究空白。

（編輯：狄慧）