中草藥免疫增強劑提高蛋雞免疫力的效果

任榮清， 黃 波*， 余 波， 趙 娟， 陳九甫， 王祥興

(1.貴州省畜牧獸醫研究所， 貴州 貴陽 550005； 2.貴州省石阡縣本莊鎮農技服務中心， 貴州 石阡 555709； 3.貴州省安龍縣農牧科技局， 貴州 安龍 552400)

中草藥免疫增強劑提高蛋雞免疫力的效果

任榮清1， 黃 波1*， 余 波1， 趙 娟2， 陳九甫2， 王祥興3

(1.貴州省畜牧獸醫研究所， 貴州 貴陽 550005； 2.貴州省石阡縣本莊鎮農技服務中心， 貴州 石阡 555709； 3.貴州省安龍縣農牧科技局， 貴州 安龍 552400)

為研制增強蛋雞自身抵抗力及提高免疫應答的中草藥免疫增強劑提供參考，選用20日齡羅曼蛋雞800羽隨機平分為對照組(飼喂基礎日糧)，試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別在基礎日糧中添加0.1%、0.2%和0.3%的中草藥免疫增強劑，進行為期100 d飼養試驗。結果表明：在基礎日糧中添加0.1%～0.3%的免疫增強劑可極顯著提高IgG值25.52%～32.43%、IgA值17.19%～24.71%、IgM值32.72%～41.62%，可提高新城疫免疫抗體平均滴度0.95～1.57，提高禽流感H5免疫抗體滴度0.56～0.87、禽流感H9免疫抗體滴度0.80～1.41。在基礎日糧中添加免疫增強劑的量以0.2%～0.3%為佳。

中草藥免疫增強劑； 蛋雞； 新城疫； 禽流感； 免疫球蛋白

隨著我國蛋雞養殖規模的不斷擴大，蛋雞受到傳染性疾病的威脅也越來越大。為了防控疾病和提高蛋雞的生產性能，飼料生產企業、養殖企業大量使用以抗生素為主的飼料添加劑，在促進生長、預防疾病、提高畜禽成活率的同時，導致細菌產生耐藥性和畜產品藥物殘留，從而影響人類健康。功能性飼料的開發利用，既能防病治病，又能提高生產性能，防止耐藥性產生與藥物殘留，在健康養殖中日益受到人們的關注與重視。中草藥由于毒副作用小、不產生抗藥性或抗藥性很小、無殘留，作為添加劑使用由來已久，越來越得到國內外許多學者的高度重視[1]?，F代醫學已證明，許多中草藥具有調節機體免疫功能、抗病原體作用、營養作用、激素樣作用、抗應激作用及對機體物質代謝產生積極的影響，能替代部分抗生素使用，對生產性能沒有影響[2]。為中草藥在養雞生產上的應用提供參考，筆者根據傳統中醫理論和現代醫學對中草藥藥理及功效的研究結果[3]，于2013年11月28日至2014年2月20日在石阡縣鴻宇畜禽生態養殖農民專業合作社養殖場進行了中草藥影響蛋雞免疫功能的試驗。

1 材料與方法

1.1 蛋雞及分組

供試蛋雞為20日齡羅曼蛋雞，800只，隨機平分為4組：對照組，飼喂基礎日糧；試驗Ⅰ組，飼喂基礎日糧+0.1%免疫增強劑；試驗Ⅱ組，飼喂基礎日糧+0.2%免疫增強劑；試驗Ⅲ組，飼喂基礎日糧+0.3%免疫增強劑。在同一雞舍內相鄰籠養，每組雞1組籠舍，自由采食、自動飲水，光照時間一致。試驗期100 d。

1.2 基礎日糧

0～15 d選用懷化正大肉小雞料飼喂；15～40 d、41～70 d和71～120 d選用長沙偉嘉飼料有限公司提供的3%生長蛋雞預混料及玉米、麥麩、石粉、豆油等原料，參照廠商提供的配比標準組成不同營養水平的基礎日糧。

1.3 免疫增強劑

中草藥原料購自貴陽市中藥材批發市場。炙黃芪22.2%、黨參16.7%、白術16.7%、柴胡13.9%、升麻11.1%、金銀花13.9%、魚腥草11.1%和炙甘草8.3%，按比例混合后粉碎，過80目篩，混勻備用。

1.4 疫苗及檢測試劑

雞新城疫凍干苗、滅活油乳劑，購自天津瑞普生物技術股份公司；禽流感H5+H9疫苗，購自青島易邦生物工程有限公司。禽流感H5、H9，新城疫標準抗原、陽性血清，購自青島易邦生物工程有限公司。雞免疫球蛋白酶聯免疫分析試劑盒，由上海谷研實業有限公司提供并代為檢測。

1.5 雞免疫處理

試驗雞群按免疫程序進行疫苗接種，雞新城疫凍干疫苗于5日齡、20日齡和50日齡接種，新城疫滅活油乳劑于20日齡和50日齡接種，禽流感(H5+H9)疫苗于30日齡和70日齡接種。

1.6 免疫效果及免疫力檢測

1.6.1 樣本采集 免疫后10 d首次采集雞血0.5～1 mL，之后每隔10 d采集1次，共采集8次，每次采樣10 只，并制備成血清保存備用。

1.6.2 血清免疫球蛋白測定 將采集的雞血清樣本保存于-20℃環境中，收集完所有血清樣本后用雙抗體夾心法按試劑盒說明書測定免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)，在450 nm波長下讀取吸光度， 計算免疫球蛋白含量。

1.6.3 血清免疫抗體測定 制備新鮮1%無抗公雞紅細胞懸液，配制4單位抗原并加以驗證，然后用紅細胞凝集抑制試驗測定雞新城疫，禽流感H5、H9免疫抗體滴度。

1.7 數據處理

血清中IgG、IgA和IgM含量和抗體滴度用平均值±標準差表示，數據用SPSS19軟件作單因素方差分析，用LSD法作多重比較。

2 結果與分析

2.1 血清免疫球蛋白含量

從表1看出，在70日齡或80日齡時，血清中免疫球蛋白的含量最高，后隨日齡增加呈下降趨勢。30～100日齡時對照組、試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的IgG平均含量分別為41.26 μg/mL、51.79 μg/mL、52.88 μg/mL和54.64 μg/mL，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組極顯著增加25.52%、28.16%和32.43%，試驗Ⅲ組分別比試驗Ⅰ組、Ⅱ組高5.50%和3.33%，但差異不顯著；IgA平均含量分別為184.46 ng/mL、219.16 ng/mL、225.71 ng/mL和230.04 ng/mL，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組極顯著增加17.19%、22.36%和24.71%，試驗Ⅲ組比試驗Ⅰ組、Ⅱ組高4.96%和1.92%，但差異不顯著；IgM平均含量分別為164.41 ng/mL、218.20 ng/mL、224.39 ng/mL和232.84 ng/mL，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組極顯著增加32.72%、36.48%和41.62%，試驗Ⅲ組分別比試驗Ⅰ組顯著增加6.71%，比試驗Ⅱ組高3.77%，但差異不顯著。

表1 各組羅曼蛋雞不同日齡的免疫球蛋白含量

注：相同指標同列大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)，小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)(下同)。

Note: Different capital and lowercase letters in the same column indicate significance of difference atP<0.01andP<0.05 level respectively. The same below.

表2 各組羅曼蛋雞不同日齡的免疫抗體滴度

2.2 新城疫、禽流感H5、H9血清免疫抗體滴度

從表2看出，在同一日齡時，試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的新城疫、禽流感H5、H9免疫抗體的平均滴度均比對照組高，且離散度小，抗體維持時間較長。30～100日齡時對照組、試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的平均雞新城疫抗體滴度分別為8.1、9.35、9.67和9.05，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組高1.25、1.57和0.95個滴度；禽流感H5平均抗體滴度分別為4.82、5.38、5.69和5.39，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組高0.56、0.87和0.57個滴度；禽流感H9平均抗體滴度分別為6.69、7.49、8.1和7.98，試驗Ⅰ～Ⅲ組分別比對照組高0.8、1.41和1.29個滴度。

3 結論與討論

3.1 中草藥免疫增強劑可提高蛋雞的免疫力

IgG、IgA、IgM作為機體含量較高的免疫分子物質，在抗病毒、抗菌、抗外毒素及激活補體殺菌、溶菌、調理吞噬等多種免疫防御機制中起重要作用[4]，在體液中的含量越高，機體的抵抗力越強。本試驗免疫增強劑由黃芪、黨參、白術、柴胡、升麻、金銀花、魚腥草、甘草等組成，這些原料具有清熱解毒，抗菌消炎、抗病毒，調節機體免疫功能，保肝，利尿等作用[3]。試驗結果表明，在基礎日糧中添加0.1%～0.3%的免疫增強劑飼喂羅曼蛋雞，可極顯著提高IgG值25.52%～32.43%，提高IgA值17.19%～24.71%，提高IgM值32.72%～41.62%。表明，添加免疫增強劑的功能飼料可顯著提高生長蛋雞的免疫力和抗病力。與薛掌林等[5]用復方中草藥制劑喂養羅曼蛋雞的結果一致。

3.2 中草藥免疫增強劑能提高生長蛋雞的免疫應答

試驗結果表明，在基礎日糧中添加0.1%～0.3%的免疫增強劑飼喂羅曼蛋雞，可分別提高新城疫、禽流感H5、H9的免疫抗體平均滴度0.95～1.57、0.56～0.87和0.80～1.41。表明，在日糧中加入免疫增強劑可提高蛋雞主要疫病的免疫應答效果。與羅安智等[6]用中草藥制成湯劑喂養京白商品代雛雞的結果一致。但免疫增加劑使用后血清中免疫球蛋白含量在70～80日齡達到最高值，隨后下降，其原因有待進一步研究。

3.3 免疫增強劑的最佳用量

試驗結果表明，添加0.3%免疫增強劑組的IgG、IgA和IgM含量最高，但與添加0.1%組、0.2%組間差異不顯著。添加0.2%免疫增強劑組的新城疫、禽流感H5、H9抗體滴度高。因此，在基礎日糧中添加免疫增強劑的量以0.2%～0.3%為好。但添加免疫增強劑的功能性飼料是否更能保護個體不受病原感染，有待進一步做攻毒保護試驗。由于本試驗在蛋雞疫苗接種的高頻期進行研究，蛋雞處于未開產時期，因此對蛋雞產蛋率的影響有待進一步研究。

[1] 陸文總，高玉鵬，李麗莉.雞用中草藥添加劑應用研究進展[J].中國畜牧獸醫，2005，32(4)：16-18.

[2] 邱玉朗，萬伶俐，王曉陽，等.中草藥添加劑替代抗生素對肉仔雞生產性能的影響[J].獸藥與飼料添加劑，2005(4)：7-8.

[3] 劉鐘杰，許劍琴.中獸醫學[M].北京：中國農業出版社，2007.

[4] 崔治中，崔保安.獸醫免疫學[M].北京：中國農業出版社，2004.

[5] 薛掌林，張述斌，王必慧，等.中草藥復方免疫增強劑對蛋雞免疫功能的影響[J].中國畜牧獸醫文摘，2011(6)：201-203.

[6] 羅安智，齊長明，枉云峰，等.“免疫增益湯”對高母源抗體雛雞接種ND疫苗的影響及機理研究[J].中國獸醫學雜志，2004(2)：3-5.

(責任編輯： 馮 衛)

Effect of Chinese Herbal Medicine Immunopotentiator on Immunity of Laying Hens

REN Rongqing1, HUANG Bo1*, YU Bo1, ZHAO Jun2, CHEN Jiufu2, WANG Xiangxing3

(1.GuizhouInstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,Guiyang,Guizhou550005; 2.BenzhuangCenterforAgriculturalTechnologyService,Shiqian,Guizhou555709; 3.AnlongTechnologyBureauofFarmingandStockbreeding,Anlong,Guizhou552400,China)

800 Rohman laying hens with 20 day-old were equally divided into 4 groups (CK, Group Ⅰ, Group Ⅱ and Group Ⅲ) randomly, and then Group Ⅰ, Group Ⅱ and Group Ⅲ were respectively fed with the basic ration plus 0.1%, 0.2% and 0.3% Chinese herbal medicine immunopotentiator for 100 d to study the effect of Chinese herbal medicine immunopotentiator on immune function of Rohman laying hen and to develop Chinese herbal medicine immunopotentiator for improving the autoimmunity of laying hens. Results: The IgG, IgA, IgM, average immune antibody titer of Newcastle disease, H5 immune antibody titer of bird flu and H9 immune antibody titer of bird flu of Roman laying hens fed with the basic ration plus 0.1%～0.3% Chinese herbal medicine immunopotentiator are increase by 25.52%～32.43%,17.19%～24.71%,32.72%～41.62%,0.95～1.57, 0.56～0.87 and 0.80～1.41 compared with CK respectively. In conclusion, the optimum addition percentage of Chinese herbal medicine immunopotentiator in the basic ration is 0.2%～0.3%.

Chinese herbal medicine immunopotentiator; laying hen; Newcastle disease; bird flu; immune globulin

2015-08-05； 2015-12-09修回

貴州省科技成果轉化引導基金項目“花溪麥坪省級農業科技園區——蛋雞健康養殖標準化示范基地建設項目”[黔科合成轉字(2014)5086]；貴州省農業科學院專項“蛋雞健康養殖關鍵技術集成與示范”[黔農科院院專項(2012)006]

任榮清(1968-)，男，副研究員，從事畜禽疫病研究。E-mail:rrqguizhou@aliyun.com

*通訊作者：黃 波(1969-)，女，副研究員，從事畜禽繁殖研究。E-mail: gzsks304371824@qq.com

1001-3601(2016)01-0029-0110-03

S853.74

A