淺談薄層層析法檢測板藍根所含靛玉紅、靛藍的方法

朱玉琛

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

淺談薄層層析法檢測板藍根所含靛玉紅、靛藍的方法

朱玉琛

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

目的：應用薄層層析法對于板藍根所含靛玉紅、靛藍的薄層色譜進行研究。方法：應用硅膠G板進行點樣，選擇出最適合展開的系統進行實驗，同時選擇出實驗最合適的樣品，檢測出樣品的最低檢出量。結果：得出獲得靛玉紅、靛藍獲得最佳色譜的條件是：以硅膠G板作為吸附劑；同時應用比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯作為實驗展開劑。在得出的色譜中，板藍根中的靛玉紅的最低檢出量為20μl、靛藍的最低檢出量為12μl。結論：薄層層析方法在檢測板藍根的靛玉紅、靛藍實驗中，證明了此方法的有效性，并且測試方法簡單、便捷，同時保證了檢測結果的有效性。

薄層層析法；板藍根；靛玉紅；靛藍；硅膠G板；

板藍根是我國傳統的中藥，使用年限久遠，并且在多年的使用中驗證了其療效。在藥典中記載，板藍根歸屬于十字花科，是其中的菘藍屬植物中，菘藍的干燥根，在現階段的臨床應用十分廣泛。在本文中，主要應用薄層層析法對于板藍根中提取的靛玉紅、靛藍進行了分析。通過相同生長環境下成長的板藍根，進行靛玉紅、靛藍的斑點情況進行分析，并對比標準，來確定板藍根總的靛玉紅、靛藍是否符合標準要求。薄層層析法可以快速的實現實驗的分離，并且進行實驗的設備十分簡單，相對需要投資更低，實驗所需要的時間也更短，在大批量的樣品檢測中應用效果良好。

1、儀器與試劑

1.1 儀器與試劑

JY1002型電子天平；101-2B型電熱烘干箱(江蘇海門實驗儀器廠)；微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠)。靛玉紅標準品(分析純,中國藥品生物制品檢定所)；靛藍標準品(化學純,北京市旭東化工廠)；羧甲基纖維素納(上海化學試劑公司)；硅膠G(分析純,青島海洋化工有限公司)；氯仿、苯、丙酮、石油醚、乙酸乙酯均為分析純。

1.2 實驗條件

薄層層析板:硅膠G板；展開劑:氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)；展開高度:12cm

2、實驗方法

2.1 薄層板的制備與活化

以硅膠G按每10g加0.8%CMC-Na30ml置于研缽中研磨均勻,鋪板,晾干。于105℃活化1h,冷卻后置干燥器中保存。一般可保存2-3d,若放置時間較長,可活化后再使用。

2.2 供試品溶液制備

（1）靛玉紅標準溶液的制備。精密稱取靛玉紅標準品10mg,置于100ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,搖勻。配成每毫升含0.1mg靛玉紅的標準溶液。避光保存。

（2）靛藍標準溶液的制備。精密稱取靛藍標準品50mg,置于250ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,搖勻。配成每毫升含0.2mg靛藍的標準溶液。避光保存。

（3）樣品溶液的制備。①稱取菘藍根 10.00g,置錐形瓶中,加入氯仿30ml,于60℃水浴中溫浸1.5h,過濾；濾渣以同樣方法再溫浸2次,合并三次濾液。回收氯仿,同時濃縮濾液,并用氯仿定容至2ml,搖勻。避光保存。②按照①方法,分別稱取不同產地來源菘藍根19.30g,加入50ml氯仿,溫浸時間分別為2h、2h、1.5h,制得樣品液。避光保存。

2.3 定性及相對含量測定。

按照薄層色譜法試驗,取樣品液及標準液各 20μl點于同一硅膠板上,展開劑展開揮干,按樣品斑點與標準點的顏色和Rf值是否相同定性,根據斑點的大小深淺概略定量。

2.4 薄層層析展開劑的選擇

取對照品溶液和①方法制得的樣品溶液各20μl,點于同一硅膠G板上。以氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)五種溶劑系統展開。

2.5 樣品液中靛玉紅、靛藍的薄層層析最低檢出量的確定

（1）樣品中靛玉紅最低檢出量的確定。取②方法制得的樣品液,根據溶液顏色,由深至淺選擇 S61、S3、S4、S9、S20、S39樣品溶液,分別吸取50μl、40μl、30μl、25μl、20μl、15μl、10μl樣品溶液點樣于同一硅膠G板。同時分別吸取0.1mg/ml的靛玉紅標準溶液 4μl、6μl、8μl、10μl、12μl……46μl、48 μl、50μl點樣于另一塊硅膠G板。將兩薄層板放于同一層析缸中展開。

（2）樣品中靛藍最低檢出量的確定。按照以上述方法相同的方式,選擇S61、S3、S4、S9、S20、S39樣品溶液,分別吸取30 μl、25μl、20μl、15μl、12μl、10μl、5μl樣品溶液點樣于同一硅膠G板。同時分別吸取0.2mg/ml靛藍標準溶液4μl、6μ l、8μl、10μl、12μl……46μl、48μl、50μl、55μl、60μl點樣于另一塊硅膠G板。將兩薄層板放于同一層析缸中展開。

3、實驗結果

3.1 薄層層析法優勢分析

薄層層析法只要實驗方式，是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，根據比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，也用于跟蹤反應進程。在實驗中證明了薄層層析法保持了操作方便性、實驗設備簡單、顯色容易，同時展開速率快；混合物易分離，分它既適用于只有 0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，是十分優秀的實驗方式。

3.2 展開劑的選擇結果

在進行實驗的時候，通過五個相同樣品進行實驗，最后選擇出了薄層層析法實驗中，應用比例為4:1的氯仿混合乙酸乙酯作為展開劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.56，靛藍的Rf值為0.32；應用比例為 9:1氯仿以及丙酮作為展開劑的時候，靛玉紅的 Rf值為0.54，靛藍的Rf值為0.28；應用比例為比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯為展開劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.54，靛藍的Rf值為0.22；應用比例為5:4:1的苯、氯仿以及丙酮作為展出劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.57，靛藍的Rf值為0.27。所以經過比較，最適合板藍根靛玉紅、靛藍的展開劑為比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯，在試驗中展開劑的展距為十二厘米。

3.3 最低檢出量的確定結果

五種樣品溶劑的點樣點通過與標準靛玉紅、靛藍的標準數值對比，就可以發現顯色的斑點顏色是由淺至深的一個過程。所以在進行最低檢出量的選擇時候，選定靛玉紅的最低檢出量為 20 μl。靛藍的最低檢出量為12μl。在正常情況下，板藍根中的靛玉紅含量相較于靛藍含量更高，所選定的靛藍最低檢出量更低。在進行實驗的時候，為了盡可能的使半點不受到影響，選擇點樣量的時候要盡可能的少，以保證減少點樣時間，避免斑點擴散。靛玉紅、靛藍的比較容易受到氧化，只能在兩個小時內保持穩定，所以為了確保實驗測量的準確，要盡可能的確保實驗的過程和結果確定在兩個小時內完成。

4、討論

薄層層析法主要是應用展開劑、吸附劑以及分離樣品來進行操作的方式，這種共同作用的操作方式可以更加有效地實現樣品的分離，所以是否可以很快速的找到與實驗樣品磁場相合的吸附劑，就成為了薄層層析法成功的關鍵因素。在本次實驗中，將進行實驗的樣品分為了五個相同部分，通過不同的吸附劑與樣品的反應，選擇出了最適合板藍根靛玉紅、靛藍的吸附劑，并在最后進行實驗的時候選定了硅膠G板作為吸附劑，取得了很好的實驗效果。確定了板藍根中靛玉紅、靛藍的最低檢出量。

[1]陳華妮,蘭翠玲,劉芳,張金磊.抗腫瘤活性成分靛玉紅的研究進展[J].廣州化工,2012

[2]徐靜.靛玉紅衍生物的合成及應用[D].天津理工大學, 2014.

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1672-5018（2016）11-238-01