高效液相色譜法測定去痛片中四種成分的含量

齊學碩

哈藥集團三精制藥四廠 黑龍江省哈爾濱市 150000

高效液相色譜法測定去痛片中四種成分的含量

齊學碩

哈藥集團三精制藥四廠 黑龍江省哈爾濱市 150000

目的：使用高效液相色譜測定的方法對去痛片中所含有的非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四種藥物組成成分的含量進行測定。方法：在具體檢測過程中利用C8柱來執行，使柱溫與室溫保持一致，然后使用己烷磺酸鈉甲醇溶液-磷酸鹽作為實驗流動相，將其流速定義為1.3mL/min，另外其檢測波長必須為220nm。其中緩沖液的濃度必須為0.005mol/L，溶液中的磷酸二氫鉀溶液濃度需為0.05mol/L，其中需呀含有1%濃度的三乙胺，最后使用磷酸對溶液的pH值進行調節，直至其pH值叨叨3.0，具體溶液比例需保持在75:25的狀態。結果：去痛片樣本中的四種藥物成分實現了完全分離，并能夠始終保持良好的線性關系，其中非那西丁的加樣回收率為99.4%，苯巴比妥的加樣回收率為100.1%，氨基比例的加樣回收率為99.4%，而咖啡因的比例為99.6%，RSD分別為0.90%、0.83%、0.70%和0.78（n=9）。結論：使用本方法進行測定所取得的結果正確率高，操作方法簡單，能夠實現對去痛片產品質量進行有效控制的目的。

氨基比林；非那西丁；咖啡因；苯巴比妥；高效液相色譜法

去痛片是一種含有多類藥物成分的復方藥物制劑，其中主要含有非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四種成分，該藥物通常用于鎮痛治療，具有降溫解熱的功能，可以對頭痛、牙痛、關節痛等疼痛現象進行有效緩解。而其中每種藥物成分的含量擁有非常嚴格的測定標準，這樣才能保證該類醫藥產品的生產之質量，以往人們會使用對其中的各項成分分別進行含量檢測的方法，然而這種方法不僅操作過程比較麻煩，且測定過程還會受到一些外界因素影響，測定精確程度無法保證。本文將對使用HPLC方法對去痛片中四種成分含量進行測試的具體方法進行分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10AT全自動高效液相色譜儀、島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp檢測器，SIL-10ADvp自動進樣器，島津CLASS-VP色譜工作站；Agilent 1100全自動高效液相色譜儀，Agilent Instr μment色譜工作站；Sartoriμs BP211D十萬分之一天平。

1.2 試藥

氨基比林、非那西丁、咖啡因、苯巴比妥對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供。去痛片樣品來源于2004年國家重點抽驗品種的抽樣，共有6個廠家的9批樣品，編號A～J。磷酸二氫鉀、三乙胺為分析純，己烷磺酸鈉由山東省禹王實業總公司化學試劑廠生產，磷酸為優級純，甲醇為色譜純，水為PALL高純水。

1.3 對照品溶液的配制

取氨基比林對照品75mg、非那西丁對照品75mg和咖啡因對照品25mg，精密稱定，置于同一50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲2min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。另取苯巴比妥對照品15mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇2mL使溶解，再用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述2種對照品貯備液各5mL，置50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

2 試驗方法及結果

2.1 色譜條件

色譜柱采用：（1）Inertsil C8柱（150mm×4.6mm，5μm）；（2）Venμsil XBP-C8柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫為室溫。流動相為 0.005moI/L己烷磺酸鈉甲醇溶液-磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，含1%三乙胺，用磷酸調節pH值至3.0）（25：75），流速為1.3mL/min，檢測波長為220nm。

2.2 樣品溶液配制

取樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于氨基比林75mg）置50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲5min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續濾液5mL，置50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3 色譜行為

色譜柱（1）上4成分的出峰順序分別為氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁，各組分峰的分離度均大于 2.2，理論板數均大于4000；色譜柱（2）上4成分的出峰順序分別為氨基比林、咖啡因、非那西丁和苯巴比妥，各組分峰的分離度均大于 2.5，理論板數均大于5000。

2.4 線性試驗與范圍

對照品貯備液：取氨基比林、非那西丁各 150mg，咖啡因50mg，苯巴比妥15mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇10mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲2min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取對照品貯備液1、2、3、5、10、15、20mL分別置于100mL容量瓶中，用流動相稀釋到刻度，搖勻。精密量取對照品貯備液2mL，3mL分別置25mL容量瓶中，用流動相稀釋到刻度，搖勻。分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.5 加樣回收率試驗

（1）精密稱取已知含量的樣品（D，E，F）各1份，照2.2項下制備成含氨基比林約為1.50mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精密量取5mL，分別置100mL容量瓶中，分別精密加入1.3項下的2種對照品貯備液各3mL，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得；（2）精密稱取已知含量的樣品（A，B，C）各1份，照2.2項下制備成含氨基比林約為0.15mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精取1份，等體積加入1.3項下的對照品溶液；（3）精密稱取已知含量的樣品（G，H，J）各1份，照2.2項下制備成含氨基比林約為1.50mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精密量取3mL，分別置50mL容量瓶中，精密加入1.3項下的2種對照品貯備液各3mL，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法計算，得平均回收率：氨基比林為99.4%，咖啡因為99.6%，非那西丁為99.4%，苯巴比妥為100.1%；RSD分別為0.70%、0.78%、0.90%和0.83%（n=9），結果表明，本法準確度好。

2.6 重復性試驗

選擇適當容量的樣品J，按照2.2項中所敘述的配置方法制備出5份實驗樣品，使用這5分樣品進行實驗可以測出四種成分非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因在藥物產品中的平均含量分別為96.7%、96.7%、97.3%和104.2%、，RSD分別為0.34%、0.89%、0.36%和1.90%，該結果說明使用此方法進行實驗具有良好的重復性。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

在對這四種藥物成分的含量進行測定時需要首先對測定溶劑進行選擇，由于這四種被測試成分的溶解性不同，在進行測試之前需要先分別向這四種藥物成分中添加甲醇，然后結合超聲操作將藥品成分中的脂溶性物質進行分解；然后再向其中添加適量的濃度為 25%的甲醇再輔以超聲操作將成分中的水溶性物質進行分解，從而簡化藥物樣品的制備過程，節約樣品制備時間。這種測定方法在使用過程中所需要的溶解量較小，對環境保護工作有十分積極的影響，促進實驗流動相與樣品進樣后實現完美融合。

3.2 輔料的干擾

通過對參與實驗的藥品樣本成分含量進行分析，我們可以得出輔料不具有干擾性，該方法具備極好的專屬性，且實驗結果的精確度較好。

3.3 方法的耐用性

通過更換液相色譜儀的種類和生產廠家進行反復試驗，執行對C8的測定工作，我們可以發現實現都可以得到質量較高的色譜行為，由此說明該試驗方法具有非常強的耐用性。

3.4 兩種測定方法結果的比較

使用容量法對去痛片中的四種藥物含量進行測定所得出的結果從總體上進行對比高于本文中分析的高效液相色譜法，然而對于除咖啡因外的其他是那種成分這兩種方法進行含量測定，其結果之間并不存在很大差異，而使用藥品樣本不同會對測定結果產生較大差異，由此可以得出使用容量法進行成分測定結果會受到一定干擾產生誤差，特別是在對咖啡因成分進行測定時。所以使用高效液相色普法對咖啡因成分進行測定可以實現對藥品質量進行嚴格控制的目標。

[1]楊直，侯思恩.HPLC-ELSD法測定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量[J].藥物分析雜志.2006（12）

[2]王桂芳，張守堯，賀巍.膠束動電毛細管色譜法分離測定去痛片中的4種組分[J].第一軍醫大學學報.2000（04）

R927.2

A

1672-5018（2016）11-243-01