TaqMan熒光定量PCR檢測新型隱球菌方法的建立

韓　慧,黃福達,張秀明,吳炳義

(1.中山大學附屬中山醫院/中山市人民醫院檢驗醫學中心，廣東中山 528403；2.南方醫科大學附屬南方醫院臨床醫學實驗研究中心，廣州 510515)

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·論著·

TaqMan熒光定量PCR檢測新型隱球菌方法的建立

韓慧1,黃福達1,張秀明1,吳炳義2△

(1.中山大學附屬中山醫院/中山市人民醫院檢驗醫學中心，廣東中山 528403；2.南方醫科大學附屬南方醫院臨床醫學實驗研究中心，廣州 510515)

目的建立TaqMan熒光定量PCR方法定量檢測新型隱球菌基因組DNA，為檢測隱球菌性腦膜炎提供重要方法。方法在國家生物技術信息中心(NCBI)查找新型隱球菌各亞型的ITS-rDNA序列，序列比對后設計特異性引物和探針，擴增片段為114 bp，構建質粒標準品，調整質粒濃度為1.42×108copy/μL ～ 1.42×10 copy/μL共8個濃度梯度，分別取2 μL作為模板，優化反應條件，建立標準曲線，進行敏感性、特異性、重復性評價，并檢測臨床確診的15例隱球菌腦膜炎感染菌株。結果建立的熒光定量PCR可以檢測2.84×102拷貝的質粒DNA，對臨床分離的各10例其他真菌、細菌、乙型肝炎病毒DNA和人類基因組DNA均無擴增曲線，重復性良好，3個濃度的批間變異系數分別為2.86%、1.48%、1.36%，可準確檢測15例新型隱球菌。結論成功建立檢測新型隱球菌的熒光定量PCR方法，敏感性和特異性較高，結果穩定可靠，可早期、快速診斷隱球菌性腦膜炎。

熒光定量PCR；新型隱球菌；基因組DNA

新型隱球菌是一種條件致病菌，主要通過呼吸道進入肺部，引起炎性或隱性感染。機體免疫功能降低，侵襲中樞神經系統，導致隱球菌性腦膜炎。由于該病早期無明顯癥狀和體征，腦脊液變化不典型，很難與其他疾病相鑒別，易被誤診而延誤治療。……