趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流產中的表達

李 萍，何國英，王鳳蓮，劉洪珍

（泰山醫學院附屬醫院，山東 泰安 271000）

趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流產中的表達

李 萍，何國英，王鳳蓮，劉洪珍

（泰山醫學院附屬醫院，山東 泰安 271000）

目的研究先兆流產者絨毛和蛻膜組織中人胸腺活化調節趨化因子17(CCL17)、基質細胞衍生因子(CXCL12)與CC趨化因子受體4(CCR4)的表達，探討先兆流產發生的相關免疫學機制。方法應用實時熒光RT-PCR法檢測早期妊娠先兆流產和正常早期妊娠行負壓吸引清宮術者各30例的絨毛和蛻膜組織中CCL17、CCR4、CXCL12-mRNA的表達水平。結果先兆流產組絨毛、蛻膜組織CCL17-mRNA的表達量為較對照組顯著升高差異有統計學意義(P＜0.05)；CXCL12-mRNA的表達量較對照組顯著降低(P＜0.05)；CCR4-mRNA的表達量為較對照組顯著升高差異有統計學意義(P＜0.05)。結論CCL17、CCR4、CXCL12可能參與在早期流產的發生，并在此過程中發揮了重要作用。

人胸腺活化調節趨化因子；CC趨化因子受體4；基質細胞衍生因子；流產

早期妊娠流產的病因眾多，大部分患者首先表現為先兆流產，大多數先兆流產患者首先表現為少量陰道流血或者出現超聲提示的宮腔內液性暗區，這兩種情況的出現一般是由于絨毛與蛻膜剝離、出血而造成的。該研究旨在探討趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12與早期妊娠先兆流產發生的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1～6月在泰山醫學院附屬醫院自愿要求終止妊娠的早期妊娠60例，年齡20～35歲，無稽留流產、胚胎發育不良、死胎、死產等不良孕產史，終止妊娠前半年內未使用過甾體激素類藥物，流產孕周均在6～9周，其中 30例術前有少量陰道流血，無妊娠物排出，婦科檢查無宮頸口擴張或妊娠物排出，B 超示孕囊周圍可見液性暗區或提示“先兆流產”，后行負壓吸引清宮術者為先兆流產組；B 超提示無任何異常行負壓吸引清宮術的正常早期妊娠婦女為對照組。所有對象婦科檢查均排除陰道炎癥、急慢性宮頸炎等其他炎性病變，簽署知情同意書后納入本研究。兩組研究對象的基本情況比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

（1）于負壓吸引清宮術中無菌條件下選取新鮮絨毛、蛻膜組織約0.3g，立刻用焦碳酸二乙酯水沖洗，然后投入液氮保存。（2）提取總RNA。（3）按RTPCR試劑盒說明進行逆轉錄，獲得cDNA，用實時熒光定量PCR儀（Roche公司）完成定量檢測；β-肌動蛋白由天津六合通生物技術有限公司合成，并作為內參；應用Gene runner軟件系統設計特異性引物和探針。引物序列如下: CXCL12: FW:AGATGCCCATGCCGATTCTTC RV:G C A C A C T T G T C T G T T G T T G T T C T T C; C C L 1 7: F W: G G G A G T G C T G C C T G G A G TA C R V: T A C A A A A A C G A T G G C A T C C C T；CCR4:FW: GCCTCCAAGACAGACTTCCTTG RV: GCGTTCGGTTCTAGTTTCCAC。

1.3 統計學方法

應用SPSS 13.0統計軟件分析處理，所得計量數據以“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組研究對象絨毛、蛻膜組織CXCL12–mRNA表達量的比較

先兆流產組絨毛組織中CXCL12–mRNA表達量均顯著低于對照組，先兆流產組蛻膜組織中CXCL12–mRNA表達量亦顯著低于對照組差異有統計學意義（P＜0.05)。詳見表1。

表1 兩組絨毛、蛻膜CXCL12–mRNA表達量比較（x+s）

2.2 兩組研究對象絨毛、蛻膜組織CCL17–mRNA表達量的比較

先兆流產組絨毛組織中CCL17–mRNA表達量顯著高于對照組，先兆流產組蛻膜組織中CCL17–mRNA表達量亦顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05)。詳見表2。

表2 兩組絨毛、蛻膜CCL17–mRNA表達量比較（x+s）

2.3 兩組研究對象絨毛、蛻膜CCR4–mRNA表達量的比較

先兆流產組絨毛組織中CCR4–mRNA表達量顯著高于對照組，先兆流產組蛻膜組織中CCR4–mRNA表達量亦顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05)。

3 討 論

研究表明[1]母胎界面免疫耐受異常是流產發生原因之一，免疫耐受平衡遭到破壞可以導致流產的發生。本研究結果顯示，趨化因子CCL17、CXCL12、CCR4-mRNA在人早期妊娠絨毛和蛻膜組織中均有的表達。CXCL12主要在滋養細胞的增殖、分化和侵蝕中發揮作用，并且可以趨化滋養細胞定向移動到蛻膜間質及血管，從而在囊胚的植入過程中發揮協助作用[2]；同時CXCL12還參與了蛻膜中CD16-CD56+NK細胞亞群的募集和遷移，而該細胞亞群對胚胎可以起到免疫耐受和營養作用。CCL17是Th2 細胞的特異性趨化因子，可以通過募集更多的CD4+CD25+Treg 到母胎界面，從而限制效應性T細胞或清除抗原特異性T 細胞使母胎免疫耐受成功發揮作用而維持正常妊娠[3]。CD4+CD25+T 細胞可大量表達CCR4，CCR4作為CCL17的高親和力受體，通過與CCL17 結合來完成趨化作用，二者結合后引起分子構象的改變，導致胞質內Ca2+濃度增高及蛋白激酶C活化，引起靶細胞效應，參與免疫細胞的調節分化，在滋養層細胞侵入、蛻膜化反應和血管重鑄等關鍵環節促成了局部免疫耐受狀態的建立和維持。

本研究結果表明先兆流產患者中CCL17、CXCL12、 CCR4的調節異常可能影響了母胎界面淋巴細胞表型，數量及功能，尤其使得巨噬細胞數量和免疫活性及功能發生異常，Th1/Th2平衡失調，NK細胞的功能異常，使得具有免疫排斥功能的CD16+CD56+NK細胞占優勢，從而不利于維持正常妊娠的母胎界面免疫微環境出現，利于正常妊娠維持的免疫耐受環境遭到破壞，誘發了母體對囊胚的排斥反應，導致先兆流產的發生。

總之，CCL17、CXCL12、CCR4是對正常妊娠維持非常重要的細胞因子，本研究發現CCL17、CXCL12、CCR4在先兆流產中的異常表達，可能參與了先兆流產的發生，但在流產發生中的具體作用機制我們尚不清楚，有待于進一步研究來驗證。

[1] Orie N. Children immunology, what can we learn from animals studies: decidual cells induce specific immune system of fetomaternal interface. J Toxicol Sci, 2009, 34(2):SP331-9.

[2] 顧 艷,張慧琴.趨化因子及其受體與復發性流產(J).生殖與避孕,2014,7(7):548-554.

[3] 劉玉昆,劉梅蘭,王蘊慧,等.母胎界面樹突狀細胞CCL17和CCL22表達在母胎免疫耐受中的作用[J].中國病理生理雜志,2012,28(6):1061-1065．

R714.21

A

ISSN.2095-8803.2016.12.017.02