新風膠囊連續灌胃對大鼠的毒性研究

姜輝，劉健，孟楣，戴敏，董六一

(1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院，合肥 230031；2.安徽中醫藥大學藥學院；3.安徽醫科大學基礎醫學院)

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·基礎研究·

新風膠囊連續灌胃對大鼠的毒性研究

姜輝1，劉健1，孟楣1，戴敏2，董六一3

(1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院，合肥 230031；2.安徽中醫藥大學藥學院；3.安徽醫科大學基礎醫學院)

[摘要]目的觀察新風膠囊連續灌胃6個月對大鼠的毒性反應。方法選用SD大鼠，雌雄各半，隨機分為新風膠囊(3.0 g浸膏/kg，9.0 g浸膏/kg，27.0 g浸膏/kg)組和溶媒對照組，每組20只。灌胃給予相應濃度藥物，每天1次，連續6個月。除觀察一般狀況外，于給藥后3個月、6個月、恢復15 d后檢測血液學、血液生化學相關指標，處死大鼠，摘取主要臟器，計算臟器系數，并進行臟器病理組織學檢查。結果與溶媒對照組相比，新風膠囊各劑量組大鼠一般狀況、體質量、攝食量均無明顯變化；血液學、血液生化學個別指標雖有所改變，但屬正常生理范圍的波動；肺臟、脾臟系數變化雖有統計學意義，但組織病理學檢查并未發現病理組織學改變。結論新風膠囊長期用藥對大鼠無明顯毒性。

[關鍵詞]藥物毒性;中草藥；關節炎,類風濕；大鼠,Sprague-Dawley

新風膠囊是在長期理論與臨床實踐基礎上，依據新安醫學“脾虛致痹，從脾治痹”理論創制而成的特色醫院制劑[1-2]，具有“益氣健脾，化濕通絡”之功效，主治類風濕關節炎，臨床運用十余年，療效確切[3-4]，但目前尚缺乏新風膠囊長期服用安全性評價研究。本實驗擬按照《中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則》要求[5]，觀察新風膠囊重復給藥的長期毒性，以期為其臨床應用及后期開發提供毒理學實驗依據。

1材料與方法

1.1動物SD大鼠，SPF級，80只，雌雄各半，體質量90～120 g，由安徽省實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(皖)2011-0002；SPF級實驗鼠料，由南京安立默科技有限公司提供。

1.2受試藥物新風膠囊浸膏粉，深褐色粉末，每克含7.143 g生藥，批號：20140704，由安徽中醫藥大學第一附屬醫院制劑中心提供。

1.3儀器電子天平JT12001，上海精天電子儀器廠；全自動高速冷凍離心機GL20A，湖南儀器儀表總廠離心機廠；Alcyon-300 型全自動生化分析儀，美國雅培公司；電子顯微鏡XDS-1B，重慶光電儀器總公司。

1.4動物分組與給藥大鼠適應性飼養1周后，按隨機數字表分為對照組、新風膠囊(3 g浸膏/kg、9g浸膏/kg、27g浸膏/kg)組，分別相當于臨床劑量的16.67倍、50倍、150倍，每組20只，雌雄各半。灌胃給予相應劑量藥物，對照組給予等量溶媒，每天1次，每周6天，連續6個月，停藥恢復15 d。

1.5觀察指標[6-8]

1.5.1一般狀況觀察給藥日每天上下午各觀察1次，非給藥日每天觀察1次。觀察并記錄每只動物的臨床癥狀、瀕死或死亡情況；如出現毒性反應，應適當增加觀察的頻率，詳細記錄毒性征狀起始時間、持續時間、嚴重程度等。

1.5.2體質量稱重隨機分組當日稱重1次，以后每周稱重1次，解剖前稱重1次。

1.5.3攝食量測定首次給藥后每周記錄1次每籠大鼠24 h所消耗的食物量，計算每只大鼠每天平均攝取量。

1.5.4血液生化學檢查給藥3個月、給藥6個月后每組分別處死8只大鼠、恢復15 d后每組處死4只大鼠，分別測定各組大鼠血液學和血液生化學指標。

1.5.5臟器指數及病理組織學檢查取相應器官，稱重，計算臟器指數，并進行病理組織學檢查。

1.6統計學處理采用SPSS18.0軟件進行統計，采用t檢驗進行組間比較，方差不齊時用t'檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1新風膠囊對大鼠一般狀況的影響 與對照組相比，新風膠囊低、中、高劑量組在連續灌胃給藥3個月、6個月、恢復15 d期間，大鼠一般活動、攝食、飲水正常，毛發光澤，眼、鼻、口無分泌物，未見異常情況。在給藥22周時，高劑量組有1只雄性大鼠死亡，在給藥24周和25周時，低劑量組分別有1只雄性大鼠死亡，死亡大鼠解剖均未發現臟器器質性病變，提示死亡原因與藥物無關，可能窒息所致。

2.2新風膠囊對大鼠體質量的影響與對照組比較，新風膠囊高劑量組雄性SD大鼠在7～12周期間體質量顯著性增加(P<0.05或0.01)，而高劑量組雌性SD大鼠體質量在21周有一過性顯著降低。新風膠囊中、低劑量組大鼠體質量在實驗研究期間，與對照組基本一致，未見統計學意義，結果如圖1所示。

2.3新風膠囊對大鼠攝食量的影響 與對照組相比，新風膠囊低、中、高劑量組在灌胃給藥3個月、6個月、恢復期，大鼠攝食量均差異無統計學意義，結果如圖2所示。

2.4新風膠囊對大鼠血液學指標的影響與對照組相比，新風膠囊不同劑量灌胃給藥3個月、恢復期大鼠血液學指標差異無統計學意義；給藥6個月時，高、中、低劑量組雄性大鼠RBC和HGB水平顯著降低(P<0.05)，同期雌性大鼠RBC和HGB值與對照組比較差異無統計學意義，且各給藥組大鼠RBC和HGB值均在正常值范圍內，因此給藥6個月時雄性SD大鼠RBC和HGB值降低與藥物無關，可能屬于一過性的波動，結果見表1～3。

2.5新風膠囊對大鼠血液生化指標的影響與對照組比較，連續灌胃給予新風膠囊3個月后，雄性高、中、低劑量組、雌性中劑量組大鼠AST水平，雄性高劑量組大鼠ALT水平顯著降低；雄性中劑量組大鼠ALB和CHOL水平，雌性高、中、低劑量組大鼠TP和ALB水平出現一過性升高；雌性高劑量組大鼠TG水平，雌性高、中劑量組大鼠GLU水平顯著降低；但上述變化無劑量關系，且在正常范圍之內，屬不確定變化。其他血液生化學指標差異無統計學意義，見表4。

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注：RBC：紅細胞計數，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計數，WBC：白細胞計數，NE%：中性粒細胞百分比，NE#：中性粒細胞計數，LY%：淋巴細胞百分比，LY#：淋巴細胞計數

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注：RBC：紅細胞計數，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計數，WBC：白細胞計數，NE%：中性粒細胞百分比，NE#：中性粒細胞計數，LY%：淋巴細胞百分比，LY#：淋巴細胞計數;與同性別對照組比較，aP<0.05

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注：RBC：紅細胞計數，HGB：血紅蛋白、PLT：血小板計數，WBC：白細胞計數，NE%：中性粒細胞百分比，NE#：中性粒細胞計數，LY%：淋巴細胞百分比，LY#：淋巴細胞計數

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注：AST：天門冬氨酸轉氨酶，ALT：丙氨酸轉氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子;與同性別對照組比較，aP<0.05,bP<0.01

與對照組比較，連續灌胃給予新風膠囊給藥6個月后，雄性大鼠高、低劑量組BUN和CREA水平，雄性中劑量組大鼠GLU水平降低。其他血液生化學指標差異無統計學意義，見表5。

與對照組比較，恢復期各組大鼠血液生化學指標未見異常變化，結果見表6。

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注：AST：天門冬氨酸轉氨酶，ALT：丙氨酸轉氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子;與同性別對照組比較，aP<0.01,bP<0.05

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注：AST：天門冬氨酸轉氨酶，ALT：丙氨酸轉氨酶，ALP：堿性磷酸酶，TP：總蛋白，ALB：白蛋白，CHO：總膽固醇，TG：三酰甘油，TBIL：總膽紅素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：鉀離子，Na+：鈉離子，Cl-：氯離子

2.6新風膠囊對大鼠臟器系數的影響與對照組比較，連續灌胃新風膠囊3個月后，雄性高劑量組大鼠肺臟系數，雄性高劑量組和中劑量組、雌性高劑量大鼠脾臟系數顯著性降低，需病理組織學檢查以進一步評價；其他各臟器系數差異無統計學意義，結果見表7。

與對照組比較，連續灌胃新風膠囊6個月后，恢復期各組大鼠臟器系數差異無統計學意義，結果見表8，9。

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注：與同性別對照組比較，aP<0.05,bP<0.01

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注：與同性別對照組比較，aP<0.05

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2.7新風膠囊對大鼠臟器病理組學的影響大鼠解剖后，經肉眼觀察，各組大鼠胸腔、腹腔漿膜光滑，無胸水、出血、粘連等改變；各臟器的形態、大小、色澤均未發現肉眼可見的變化。光鏡下，連續灌胃新風膠囊3個月、6個月、恢復15 d后，各組大鼠腦、胸腺、肝臟、腎臟、腎上腺、脾臟、肺臟、心臟、附睪、睪丸、卵巢、子宮等臟器病理學檢查均差異無統計學意義。

3討論

新風膠囊由黃芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣等藥物組成，方中黃芪益氣養血固表、利水消腫、健脾化濕除痹，薏苡仁健脾利濕、舒筋除痹，共為君藥；雷公藤祛風除濕，活血通絡，消腫止痛，蜈蚣祛風止痙、通絡止痛、攻毒散結，共為臣藥。諸藥合用，共奏“益氣健脾，化濕通絡”之功，切中RA“脾虛濕困、氣血虧虛、痰瘀互結”的基本病機[9]。

本研究發現，新風膠囊連續灌胃3個月、6個月、恢復15 d后，各組大鼠一般狀況、攝食量、體質量均無明顯變化；實驗過程中，有3只大鼠死亡，但大體解剖均未發現臟器器質性病變，提示其死亡原因與藥物無關，可能是窒息所致。

血液學、血液生化學檢測發現，新風膠囊連續灌胃3個月、6個月、恢復15 d后，其各項血液學、血液生化學指標基本正常；雖有個別指標存在統計學上的差異，但差異無規律性，且未隨給藥周期的延長、給藥劑量增大而加劇。因此，考慮上述變化屬正常生理范圍的波動，并無毒理學意義[10]。

大鼠臟器系數檢測發現，灌胃給予新風膠囊6個月、恢復期各組大鼠臟器系數未見顯著變化；灌胃給藥3個月時，肺臟、脾臟系數雖有統計學差異，但6個月時恢復正常，同時結合大鼠剖檢和組織病理學檢查，并未發現到，肺臟、脾臟有外觀和相應的病理組織學改變。因此，考慮上述差異可能與解剖操作、放血不充分有關，而與新風膠囊本身無關。

綜上，新風膠囊無明顯的長期毒性，其臨床用藥量為安全劑量，為新風膠囊臨床應用提供了可靠的實驗數據。

(本文圖1～4見插圖1-2)

參考文獻

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Experimental study on long-term toxicity of Xingfeng capsules in ratsJiangHui*,LiuJian,MengMei,DaiMin,DongLiuyi(*TheFirstHospitalAffiliatedtoAnhuiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Hefei230031,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the long-term toxicity of Xinfeng capsules(XFC) by continuously oral administration on rats.MethodsSD rats were randomly divided into four groups: normal control group,XFC high-dose group,XFC medium -dose group and XFC low-dose groups.Different doses of XFC were administrated by gavage once a day for 6 months.The body weight and food intake were observed and calculated during the administration.The hematology,blood biochemistry were measured at the 3,6 months of the administration and 15 days after the end of administration,respectively.After that,all rats were executed and main organs were examined by pathological method.ResultsThe appearance and behavior,body weight and food intake of rats treated with XFC were no significant difference compared with the controls.Individual index of hematology,blood biochemistry such as RBC,HGB,AST had small change but were within the normal physiological range.In addition,XFC reduced the lung and spleen coefficients,but no significant change appeared in histopathologic morphology.ConclusionXFC has no obvious toxicity in rats for long-term administration.

[Key words]Drug toxicity;Drugs Chinese herbal;Arthritis,rhenmatoid;Rats,sprague-dawley

(收稿日期：2015-09-10)

Corresponding author:Liu Jian,Email: liujianahzy@126.com

中圖分類號:R595

文獻標識碼:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2016.01.024

作者簡介：姜輝,博士在讀,主管藥師,Email:jhanbing@163.com通信作者：劉健，主任醫師，博士生導師，Email: liujianahzy@126.com

基金項目：國家科技支撐計劃新安醫學傳承與發展研究子課題新安醫家名方驗方篩選研究(2012BAI23B03)；國家中醫藥重點學科臨床中藥學建設項目(國中醫藥人教發[2012]32號)