乙型肝炎病毒核心抗體定量與定性測定比較

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乙型肝炎病毒核心抗體定量與定性測定比較

張青葉

關鍵詞：化學發光微粒子免疫檢測法；酶聯免疫法；乙型肝炎病毒核心抗體；定量；定性

乙型肝炎是嚴重危害人類健康的傳染病。乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性分布。我國是HBV感染的高發區，慢性感染者有1億多人[1]。HBV血清標志物的檢測對乙型肝炎的診斷、療效觀察及預后判斷具有非常重要的意義。乙型肝炎核心抗體檢測可提示當前或以往HBV感染，乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)濃度的高低可反映病毒感染的狀態，高濃度提示乙型肝炎急性感染。慢性乙型肝炎呈現抗-HBc持續高濃度[2]。抗-HBc在急性HBV感染出現乙型肝炎表面抗原(HBsAg)后不久便可在血清中檢測到，在HBsAg消失后和可檢測到乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)之前，都將持續存在。在缺乏其他HBV標志物相關信息的情況下，檢測到抗-HBc可能代表HBV活動性感染或感染可能已緩解。所以抗-HBc是HBV感染和潛在感染的唯一血清學標志物[3]。國內臨床實驗室最常用的HBV感染者的血清學標志物的檢測主要依靠酶聯免疫吸附試驗法。而有研究顯示，根據HBV抗原抗體模式難以準確地判斷病毒復制程度及其傳染性的強弱，因此也應對HBV血清標志物做定量分析。

1對象與方法

1.1對象選取住院乙型肝炎病人410例，分別進行酶聯免疫法和化學發光微粒子免疫檢測法。

1.2方法

1.2.1酶聯免疫法本研究采用的酶聯免疫法為酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，儀器為Addcare ELISA1100，試劑為上海科華生物工程股份有限公司抗-HBc試劑盒。其原理是利用自動化儀器與酶聯免疫法結合完成測定。它采用基因工程重組乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)包被反應板，加入待測樣本，同時加入抗-HBc-HRP,與抗原形成競爭結合。若待測樣本中抗-HBc含量高，則抗-HBc-HRP結合少，加入四甲基聯苯胺(TMB)底物時顯色淡，反之顯色深。

1.2.2化學發光微粒子免疫檢測法(chemiluminesent microparticle immuno assay,CMIA)采用的儀器為ARCHITECT i2000，試劑為ARCHITECT原裝抗-HBc試劑盒及質控品、校準品，其原理是利用重組乙型肝炎核心抗原包被微粒子以檢測Anti-HBc。采用兩步免疫測定法：首先利用待測樣本與項目稀釋液、樣本稀釋液和重組乙型肝炎核心抗原包被的順磁性微粒子混合，樣本中存在的抗-HBc與乙型肝炎核心抗原包被的順磁性微粒子結合，然后洗滌反應結合物，再加入抗-人吖啶酯標記結合物使其結合；再次洗滌后加入預激發液和激發液使其發生化學反應，測定產生的化學反應的相對發光單位(RLUS)。血清中抗-HBc含量與RLUS值成正比。通過比較反應中的化學發光信號和ARCHITECT抗-HBc校準生成的臨界值，確定血清中是否存在抗-HBc。化學發光信號大于或等于Cutoff信號可視為呈反應性。

2結果(見表1)

表1　兩種檢測方法的抗-HBc陽性結果　例(%)

3討論

表1結果顯示，410例樣本中抗-HBc濃度值1.00 S/CO ～8.00 S/CO時酶聯免疫法檢測率為0；>8.00S/CO時也有2例未檢出。因此，酶聯免疫法檢測率較低，很容易造成漏檢。這可能是由于其受到方法學的限制，不能用于定量測定，對于微量樣本的檢出有局限性；而且操作過程中受多種因素影響，如內源性補體、甲胎蛋白、類風濕因子、自身抗體和外源性物質的干擾，如乳糜、溶血血清，試劑盒質量，洗板的質量等，致使其檢測準確度降低，甚至出現假陰性結果，難以準確判斷病毒復制程度及其傳染性，無法判斷治療效果。但由于酶聯免疫法有著方法簡單、成本低廉、易于操作、適用于批量標本檢測的特點，目前仍被大量應用于對HBV血清學標志物定性或半定性分析。

化學發光微粒子免疫檢測法是新一代超微量分析法。由于其化學發光劑發光穩定、持續時間長[4]，可定量檢測血清中HBV抗原抗體的濃度，其原理先進、標記物簡單高效、線形范圍寬、特異性強、精密度高、自動化程度高、檢測速度快且結果準確，可以有效防止漏檢；能準確評估HBV蛋白合成水平，從而能評估HBV感染后病情轉歸及抗病毒治療效果等。樣本可以隨時測定，便于臨床更好、更快地掌握病人信息，以采取措施防止其發展成為乙型肝炎或慢性病毒攜帶者，同時也可為注射乙型肝炎疫苗提供指導。

參考文獻：

[1]楊旭,羅紅雨,張永紅,等.乙型肝炎病毒載量與抗原抗體模式的關系[J].中華肝臟病雜志,2002,10(4):269-271.

[2]Heijtink RA,Kruining J,Honkoop P,etal.Serum HbeAg quantitation during antiviral therapy for chronic hepatitis B[J].J Med Virol,1997,53(3):282-287.

[3]駱抗先.乙型肝炎基礎和臨床[M].第2版.北京:人民衛生出版社,2001:207-336．

[4]Nahed Ismail,Geoffrey E,Fish,etal.Smith laboratory evaluation of a fully automated chemiluminescence immunoassay for rapid detection of HBsAg,antibodies to HBsAg,and antibodies to hepatitis C virus[J].J Clin Microbiol,2004,42(2):610-617.

(本文編輯崔曉芳)

(收稿日期：2015-06-24；修回日期：2016-01-28)

作者簡介張青葉，副主任檢驗師，本科，單位：030001，山西醫科大學第一醫院。

中圖分類號：R47

文獻標識碼：C

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.06.052

文章編號：1009-6493(2016)02C-0766-02