微生物管碟法和濁度法測定硫酸鏈霉素的對比試驗

趙化芳

（新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆 烏魯木齊 830063）

微生物管碟法和濁度法測定硫酸鏈霉素的對比試驗

趙化芳

（新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆 烏魯木齊 830063）

對比管碟法和濁度法的試驗原理、儀器設備、菌種、培養基、緩沖液、培養條件、實驗結果等，找出他們的異同點和優缺點，更好地應用于實驗室檢測。

管碟法；濁度法；硫酸鏈霉素；對比試驗

目前在國際上，抗生素效價測定以管鐵法和濁度法共行，各國藥典均有采用[1]?！吨腥A人民共和國獸藥典》2010年一部，收載的91個抗生素品種中，有44個品種采用了微生物檢定法（其中有18個采用了濁度法），53個品種采用了高效液相色譜法。

1 原理不同

管碟法是將高低濃度的標準品和樣品溶液加入到牛津杯中，通過溶液的滲透與攤布在平板中的枯草芽孢桿菌相互作用形成抑菌圈，通過測量標準品和樣品形成的抑菌圈直徑來計算供試品含量。濁度法是在比色皿中按拉丁方排列，加入高低含量的標準品和樣品溶液1 mL，再加入含葡萄球菌的液體培養基9 mL，通過測定標準品和樣品的吸光度，來計算樣品含量。

2 試劑和材料的選擇不同

管碟法采用生素鑒定Ⅰ號固體培養基，濁度法采用抗生素檢定培養基Ⅲ號液體培養基，磷酸鹽緩沖液均為pH為7.8的磷酸鹽緩沖液，抗生素溶液的配置不同，管碟法配置標準品樣品的最終濃度為1.2 U/mL和0.6 U/mL的溶液，濁度法為含6 U/mL和9 U/mL的溶液。

3 菌種和菌懸液的制備不同

管碟法是取金黃色葡萄球菌的第三代培養菌，接種到營養瓊脂斜面培養基上，36 ℃培養24 h，用7 mL滅菌水將菌苔洗下制成菌懸液，當天使用。濁度法是取枯草芽孢桿菌的第三代培養菌，接種到營養瓊脂斜面培養基上，36 ℃培養7 d，用滅菌水7 mL將芽孢洗下，制成芽孢懸液，在65 ℃水浴內加熱30 min將繁殖菌體殺死，待冷后放冰箱4 ℃貯藏為濃菌液。

4 試驗方法不同

4.1 微生物管碟法

底層加20 mL滅菌的抗生素檢定Ⅰ號培養基，上層加入0.5%枯草芽孢桿菌菌懸液的抗生素檢定Ⅰ號培養基5 mL，凝固后每個平板中對角放入4個牛津杯，將每個平板的4個牛津杯中分別對角加入高低濃度的標準品和樣品各300 μ L，小心放入37 ℃培養箱培養16 h，在ZY-300Ⅳ多功能微生物自動測量儀，測量抑菌圈直徑，出具檢驗報告。

4.2 微生物濁度法

按拉丁方排列從某一標記處，沿壁精密加入1.0 mL抗生素溶液，再在標記稍上處精密加入9.0 mL帶菌培養基，將沾在試管壁上的抗生素充分沖入培養基內。同時制備含菌陽性對照管和無菌培養基空白對照管。將比色皿放入WBS-100微生物比濁法測定儀中，恒溫振搖培養，增加氧的供應，可促進生長，縮短培養時間，實時監控，智能判斷終點，在線快速讀數。

5 試驗結果的對比與分析

在上述試驗條件下，通過兩種不同的試驗方法，對注射用硫酸鏈霉素的測定效價、偏離平行、可信限率的實驗結果進行統計分析，結果如表1。兩種方法的效價測定結果相近，偏離平行均大于0.05，可信限率均低于5，精密度等均滿足實驗需要。但濁度法的測定效價的精密度較好于管碟法，可信限率低于3。并且管碟法需要較多的平行樣品，才能達到需要的可信限率，增加了工作量。

管碟法應用范圍廣，培養條件要求較寬，但實驗過程長，試驗結果易受瓊脂擴散性的影響。比濁法快速，試驗過程3～4 h，可當天獲得結果，無擴散因素的影響，試驗的靈敏度高，結果的精密度與準確度均較瓊脂擴散法好，但采用手工加樣時，過程較為繁瑣，對溫度控制精度和溫度均一性要求較高。

R927

A

1006-799X(2016)18-0106-01

趙化芳（1987-），女，新疆烏魯木齊人，助理獸醫師，主要從事畜牧獸醫和實驗室相關檢測工作。