兩種反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測HCV RNA的對比分析

唐章平

(四川省德陽市羅江縣人民醫(yī)院檢驗科　618500)

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兩種反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測HCV RNA的對比分析

唐章平

(四川省德陽市羅江縣人民醫(yī)院檢驗科618500)

目的探討常規(guī)反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)與高精度RT-qPCR檢測丙型肝炎病毒(HCV)RNA的差異，為醫(yī)院開展院內(nèi)感染監(jiān)控提供參考。方法對2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較兩種檢測方法RNA陽性率的表達(dá)差異。結(jié)果高精度RT-qPCR和常規(guī)RT-qPCR檢測HCV RNA的陽性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測HCV RNA陽性表達(dá)明顯高于常規(guī)RT-qPCR檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.326，P<0.05)。結(jié)論合理應(yīng)用高精度RT-qPCR對輸血前患者進(jìn)行HCV RNA檢測，可以提高對HCV RNA的檢出率，減少了醫(yī)源性感染，提高了對受血患者健康狀況的判斷能力。

丙型肝炎病毒；高精度實時熒光定量聚合酶鏈法；醫(yī)源性感染

丙型肝炎病毒(HCV)是單股正鏈RNA病毒，近年來，我國丙型肝炎患者逐漸增多，一般人群HCV陽性率為3.2%，可引起急性肝炎，或發(fā)展成慢性肝炎，嚴(yán)重者可發(fā)展成肝硬化，甚至肝癌[1]。實驗室檢查主要包括免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢測，反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)是目前采用較多的檢測HCV RNA方法，是表示傳染性及復(fù)制病毒最可靠的指標(biāo)，也是顯示HCV感染狀態(tài)及治療效果的重要指標(biāo)[2-3]。本研究采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較兩種檢測方法RNA陽性率的表達(dá)差異。

1資料與方法

1.1一般資料本院2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，其中男203例，女256例，年齡5～87歲，平均(33.6±15.1)歲。

1.2儀器與試劑熒光定量PCR法均采用羅氏LightCycler*480Ⅱ?qū)崟r熒光定量PCR儀，常規(guī)RT-qPCR采用上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HCV核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針法)，檢測的線性范圍：103～107IU/mL，高精度RT-qPCR采用羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針法)，檢測的線性范圍：1～15×108IU/mL，均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。每份陽性標(biāo)本均重復(fù)檢測2次。

1.3檢測方法均在輸血前抽取受血著靜脈血，同時進(jìn)行高精度RT-qPCR檢測及常規(guī)RT-qPCR檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS15.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

高精度RT-qPCR和常規(guī)RT-qPCR檢測HCV RNA的陽性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測HCV RNA陽性表達(dá)明顯高于常規(guī)RT-qPCR檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.326，P<0.05)。

3討論

丙型肝炎是由HCV感染引起的一種主要經(jīng)血液傳播的傳染性疾病，呈世界流行趨勢，其感染途徑可能有輸血感染、密切接觸、不良性行為和吸毒等。隨著《輸血法》的完善，供血中心已嚴(yán)格監(jiān)測血制品傳染性指標(biāo)，保障受血者的用血安全是各個血站的一項重要工作[4]。但是，近年來人們發(fā)現(xiàn)經(jīng)血液傳播的HCV傳染病越來越多見于非輸血人群，醫(yī)務(wù)人員對患者進(jìn)行各項診治工作時必須提高警惕，加強自身安全防護(hù)措施，而提高檢測技術(shù)對HCV監(jiān)測的靈敏度和特異度是最行之有效的解決醫(yī)院交叉感染和避免醫(yī)患矛盾的途徑之一。

自1989年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)HCV以來，已建立了針對HCV抗體、HCV RNA和HCV抗原的各種檢測方法，可定性和定量檢測HCV RNA，常見的方法有RT-PCR定性法、bDNA檢測技術(shù)、RT-qPCR定量法等，其中RT-qPCR的基本原理是通過引物擴增并檢測特異性mRNA 來證實HCV的存在，具有高效率、高靈敏度、高特異度的優(yōu)點，且操作簡便，是檢測HCV RNA 比較有效的方法，也是預(yù)測和觀察抗病毒效果的重要指標(biāo)[5]。常規(guī)RT-qPCR檢測HCV RNA的線性范圍為103～107IU/mL，而高精度RT-qPCR是(1～15)×108IU/mL[6]，后者靈敏度明顯高于前者，這是因為高精度RT-qPCR是采用COBAS HCV RNA二代定量試劑，增加了針對HCV基因型4 的探針和引物，即用靶基因特異的裂解雙重標(biāo)記寡核苷酸檢測探針檢測HCV RNA，提高了檢測靈敏度[7]。高精度RT-qPCR還采用一已知數(shù)量的HCV定量標(biāo)準(zhǔn)(QS)RNA分子，是一種非傳染性體外轉(zhuǎn)錄RNA(aRNA)，組成并含有與HCV靶RNA完全相同引物結(jié)合位點的HCV序列片段，是一種獨特的探針結(jié)合區(qū)，使HCV QS擴增子與HCV靶擴增子區(qū)分開，還有彌補抑制作用并控制制備和擴增過程，使每個標(biāo)本中HCV RNA的定量更加準(zhǔn)確[8]。

本研究采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較了高精度RT-qPCR與常規(guī)RT-qPCR檢測本院459例住院受血者HCV RNA陽性率的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高精度RT-qPCR與常規(guī)RT-qPCR檢測HCV抗體的陽性例數(shù)分別為17例(3.70%)、8例(1.74%)。高精度RT-qPCR對HCV抗體RNA陽性表達(dá)率明顯高于常規(guī)RT-qPCR，其檢測精度高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因此，采用高精度RT-qPCR對輸血前患者進(jìn)行HCV RNA檢測，可以提高對HCV RNA的檢測率，但是，高精度RT-qPCR的試劑盒價格昂貴，導(dǎo)致檢測費用大大高于常規(guī)RT-qPCR，因此，筆者認(rèn)為在臨床應(yīng)用中，監(jiān)測HCV RNA定量時，可以先用常規(guī)RT-qPCR定量試劑檢測，當(dāng) HCV RNA濃度下降到103以下時，再用高精度RT-qPCR定量檢測，是比較合理適用的檢測流程。

本研究資料表明，為了預(yù)防輸血引起的醫(yī)療糾紛，明確輸血事故的責(zé)任，杜絕和減少醫(yī)療機構(gòu)的損失，首先應(yīng)嚴(yán)格控制血液制品的質(zhì)量，同時認(rèn)真檢測患者輸血前血液傳染性指標(biāo)。合理應(yīng)用常規(guī)和高精度RT-qPCR，可明顯提高對HCV RNA的檢出率，有助于為醫(yī)療糾紛提高可靠舉證和防止院內(nèi)感染。

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[3]葉賢林，李活，許曉絢，等.核酸擴增技術(shù)在獻(xiàn)血者血液HBV DNA、HCV RNA及HIV-1RNA篩查中的應(yīng)用研究[J].中國輸血雜志，2010，23(1):6-10.

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2016-01-10修回日期：2016-03-15)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.064

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1673-4130(2016)12-1737-02