根據中國人群血小板生物參考區間修改及驗證顯微鏡復檢規則

王　鳳，王　貞，王衍晶，張風華

(大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連 116011)

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·論著·

根據中國人群血小板生物參考區間修改及驗證顯微鏡復檢規則

王鳳，王貞，王衍晶△，張風華

(大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連 116011)

摘要:目的根據中國人群血小板生物參考區間的調整修改并驗證血小板顯微鏡復檢規則，探討其是否適合該院實驗室血細胞分析的需求。方法回顧性分析根據中國人群血小板生物參考區間的調整，修改該院實驗室Sysmex XE-5000全自動血細胞分析儀血小板顯微鏡復檢規則并比較規則修改前后推片復檢率、鏡檢血小板聚集陽性率的不同。結果血小板顯微鏡復檢規則修改前血小板推片復檢率為1.94%，復檢規則修改后血小板推片復檢率為3.99%，復檢規則修改后推片復檢率顯著增加，差異有統計學意義(P<0.05)。結論根據新版中國人群血小板生物參考區間，修改該院實驗室血小板復檢規則，能提高顯微鏡復檢率，有效避免血小板假性減少的漏檢，適合該實驗室血細胞分析的需求。

關鍵詞:血細胞分析儀；血小板聚集；血小板假性減少

全自動血細胞分析儀檢測血小板，由于受到檢測原理及樣本等各種不確定因素的限制，其計數的準確性備受關注[1]。EDTA依賴性血小板聚集等因素常導致血小板計數假性減少，若經顯微鏡復檢就會得到及時矯正。因此，合理的血小板復檢規則在血細胞分析中至關重要。本院實驗室參考國際血液學復檢專家組和中國血液學復檢專家組制定的標準[2-3],結合本院專家建議，曾制定過血小板復檢規則并嚴格執行。原衛生部頒布的行業標準明確規定了中國人群血小板參考區間，本院實驗室根據新版行業標準修改了血小板顯微鏡復檢規則，本研究試圖探討修訂后的血小板顯微鏡復檢規則是否適合本院實驗室血細胞分析的需求。

1材料與方法

1.1樣本來源收集大連醫科大學附屬第一醫院2013年3～12月門診和住院患者的EDTA-K2抗凝的血常規樣本。復檢規則修改前以血小板小于80×109/L的樣本設置為鏡檢規則，2013年3月1日至4月30日的血常規樣本總數為23 737例；修改后以血小板小于125×109/L的樣本設置為鏡檢規則，2013年9月1日至10月31日的血常規樣本總數為21 771例。

1.2儀器與試劑Sysmex XE-5000血液分析儀、SP-1000i自動推片染片機及配套試劑由希森美康公司提供；雙目顯微鏡由日本Olympus公司提供；瑞氏染液由珠海貝索生物技術有限公司提供；EDTA-K2真空抗凝管由陽普醫療公司提供。

1.3方法

1.3.1儀器的校準與調試嚴格按照Sysmex XE-5000操作手冊進行質控及樣本檢測。儀器按要求進行日常保養及維護，每天采用原廠配套高、中、低值質控物對儀器進行日常監測，確保儀器處于正常工作狀態，儀器性能符合規定要求。

1.3.2顯微鏡復檢SP-1000i自動推片染片機制成厚薄均勻，頭、體、尾分明的血涂片。依據《全國臨床檢驗操作規程》[4]，在顯微鏡油鏡下選擇血涂片體、尾交界處，按城垛狀移動觀察有無血小板聚集現象。

1.4統計學處理采用SPSS17.0軟件包進行統計學分析，樣本率的檢驗采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1血小板顯微鏡復檢規則修改前后推片復檢率及血小板聚集陽性率比較2013年3月1日至4月30日的血常規樣本總數為23 737例，根據鏡檢規則其推片例數為461例，推片復檢率為1.94%,血小板聚集例數22例，陽性率為4.77%。血小板復檢檢規則修改后，2013年9月1日至10月31日的血常規樣本總數為21 771例，推片例數為868例，推片復檢率為3.99%，血小板聚集例數42例，陽性率為4.84%。兩者推片復檢率比較差異有統計學意義(P<0.05)，血小板聚集陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2血小板復檢規則修改后不同時間段血小板聚集陽性率比較血小板復檢規則修改后，2013年9月1日至10月31日推片例數為868例，陽性例數為42例，血小板聚集陽性率4.84%；2013年9月15日至12月20日推片例數為1 832例，陽性例數為107例，血小板聚集陽性率5.84%，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3血小板復檢規則修改后不同數值段血小板聚集陽性率比較復檢規則修改后，2013年9月15日至12月20日血小板為小于80×109/L的樣本中，推片例數為728例，血小板聚集例數為41例，陽性率為5.63%；血小板為(80～125)×109/L的樣本中，推片例數為1 104例，血小板聚集例數為66例，陽性率為5.98%，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.4血小板減少患者主要分布科室情況血小板減少患者主要分布在血液風濕免疫科、介入治療科、腎內科、消化科、心內科和神經內科等。其中以血液風濕免疫科(20.20%)復檢率最高，而鏡檢血小板聚集陽性率以血液風濕免疫科(1.9%)最低，以健康體檢部(20.5%)鏡檢陽性率最高。

3討論

全自動血細胞分析儀測定血小板的原理目前多為經典的電阻抗法。但該法的影響因素較多，計數存在誤差。為了確保血小板計數的準確性，Sysmex XE系列血細胞分析儀將電阻抗法和流式細胞術激光散射法有效地結合起來對血小板進行準確的測定。根據電阻抗計數原理，血細胞計數有一定的計數閾，血小板計數閾一般在血小板體積為2～30 fL，當血小板體積大于30 fL或小于2 fL時，這些血小板將不被納入血小板計數范圍，使血小板計數假性減低[5]；并且計數紅細胞和血小板都是在同一計數池內，當存在小紅細胞及其碎片時，由于其體積與血小板相似，儀器將部分小紅細胞及其碎片誤計為血小板而導致檢測結果偏高[6]。此類情況儀器將顯示其血小板直方圖的異常并報警。正常血小板直方圖通常主要集中在2～15 fL，一般在25～30 fL的某一點與橫坐標重合,直方圖是一條呈偏態分布的單峰光滑曲線。當大血小板增多時，曲線峰會右移，在大于30 fL的某一點與橫坐標重合。當存在小紅細胞的干擾，曲線峰的右側抬起并且尾部上翹。當存在聚集的血小板時，曲線峰會降低，如果以小于20 fL血小板聚集為主，曲線峰的右側會抬起并且呈現拖尾狀，不與橫坐標重合；如果以大于20 fL血小板聚集為主，曲線峰會變得低平右側無明顯抬起，并且，在白細胞直方圖上35 fL左右會有一個小峰出現[7]。通過血小板直方圖的觀察，可以初步了解血小板計數減少或增多的大致原因。Sysmex XE-5000的光學法測定血小板是在測定網織紅細胞的通道，通過反映細胞數量和表面體積的低角度散射光和反映核酸濃度的高角度散射熒光識別血小板。血小板內含有少量的核酸，而成熟的紅細胞內沒有核酸，所以血小板高角度散射光的強度比成熟紅細胞強，因此可以很好地將血小板和成熟紅細胞在散點圖上有效區分[8]。用光學法測定血小板可初步糾正因大血小板或巨大血小板、小紅細胞以及破碎的紅細胞等引起的血小板假性減少或增高，再經過血涂片顯微鏡復檢，觀察血小板大小、形態、數量及是否存在干擾及有無血小板聚集等現象[9]，與直方圖相對應以此驗證并及時糾正血小板數量。

原衛生部于2012年12月25日頒布了行業標準WS/T 405-2012《血細胞分析參考區間》，明確規定中國人群血小板參考區間為(125～350)×109/L，且要求大型三甲醫院必須盡快按照文件規定修改血細胞分析的參考區間。本實驗室在行標規定之前已制定血細胞分析的鏡檢規則，其中血小板小于80×109/L即進行推片復檢，在此行標基礎上，2013年5月份將血小板復檢界限值提升到125×109/L。

本文對修改前后鏡檢陽性率等的回顧性比較分析發現，血小板復檢規則修改后因血小板臨界值的改變，推片例數明顯增多，推片比例明顯較修改前增高,差異有統計學意義(P<0.05)，但血小板聚集陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。說明盡管閱片量增大，但真正發現因血小板聚集引起的假性血小板減少并未明顯增多，絕大多數患者血小板減少是真性減少。考慮復檢規則修改后工作人員的適應能力和執行情況，收集修改初期(2013年9月1日至10月31日)及修改后長期(2013年9月15日至12月20日)樣本比較分析，發現復檢陽性率間比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明顯微鏡復檢崗位人員已明確修改后復檢規則，執行情況良好。

本研究血小板小于80×109/L與血小板為(80～125)×109/L的血小板聚集陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明血小板假性減少的患者血小板數分布區間很廣泛，進一步證明了根據新版行標修改血小板復檢規則的必要性。

對血小板減少患者的分布科室情況分析，發現主要來源于血液風濕免疫科，占鏡檢樣本的20.20%，但鏡檢后發現血小板聚集的陽性率卻最低，僅為1.9%，這說明血液風濕免疫科的患者血小板減少多為真性減少，血小板假性減少的情況很少出現。相反，健康體檢部及其他科室鏡下血小板聚集陽性率較高，說明這些科室尤其是健康體檢人群存在血小板假性減少的現象，在平時血細胞復檢時更應嚴格執行血小板鏡檢規則，避免對血小板假性減少的漏檢，引起臨床誤診誤治。

通過本研究，筆者認為當全自動血細胞分析儀檢測發現血小板計數減少時，尤其是初診患者，一定要先排除抽血方法不當引起的凝集，再用儀器復查并同時做血涂片染色顯微鏡復檢，細致觀察是否有血小板之間彼此聚集成片的現象。當鏡檢發現存在血小板大小異常時，應用流式細胞術激光散射熒光染色法進行血小板檢測，此方法還可以有效避免小紅細胞或紅細胞碎片對血小板測定的干擾[10]。對因EDTA依賴性血小板聚集等引起的血小板假性減少，采用更換抗凝劑(用枸櫞酸鈉)抗凝或者是采用零添加抗凝劑試管，在儀器旁采血，選擇手動模式快速檢測來糾正。必要時也采用經典的計數盤人工顯微鏡計數方法，來準確計數血小板數量[4]。

綜上所述，根據中國人群血小板生物參考區間，將血小板復檢規則由血小板小于80×109/L修改為血小板小于125×109/L是正確的。提高的復檢率，適合本院實驗室血細胞分析的需求。修定的血小板復檢規則在提高復檢率的同時，保證了檢驗結果的正確性和可靠性。希望通過全新的血小板顯微鏡復檢規則，將更加準確可信的檢測結果反饋給臨床，更好地指導臨床診斷及治療。

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According to the platelet of Chinese people biological reference interval change the microscope review rules

WangFeng,WangZhen,WangYanJing△,ZhangFenghua

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China)

Abstract:ObjectiveTo discuss change the platelet counts by microscope rule by the platelet of Chinese people biological reference range in this laboratory blood analysis requirement.MethodsRetrospectively analyzed according to the platelet of Chinese people biological reference range change the lab Sysmex XE-5000 automatic blood cell analyzer platelet review rules.Change the platelet counts by microscope rules,the differences between the microscopy rate and the microscopic examination of the platelet aggregation rate.ResultsBefore change the platelet counts by microscope rules the microscopy rate was 1.94%.After change the platelet counts by microscope rules the microscopy rate was 3.99%,after change the platelet counts by microscope rules pushing blood piece rate increased significantly,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionAccording to the platelet of Chinese people biological reference range change the lab platelet review rules.We can increase the rate of microscopy,and effectively avoid the pseudothrombocytopenia and accurately guide clinical treatment.

Key words:hematology analyzer;platelet aggregation;pseudothrombocytopenia

(收稿日期：2016-01-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.014

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1190-03

作者簡介：王鳳，女，主管檢驗技師，主要從事臨床基礎檢驗及臨床血液檢驗研究。△通訊作者，E-mail：15541192550@163.com。