異種家禽紅細胞對禽流感抗體檢測的影響

盧敏杰

（中山市南頭鎮農業服務中心，廣東 中山 528427）

異種家禽紅細胞對禽流感抗體檢測的影響

盧敏杰

（中山市南頭鎮農業服務中心，廣東 中山 528427）

為提高家禽對禽流感的免疫力，防治各種獸禽類傳染疫病對人體造成影響，加強家禽動物疫苗的檢測工作具有重大意義。通過對家禽抗體的檢測，了解家禽疫苗的效果，及時洞察家禽疫病狀況，并作出反應，本文就是在了解家禽紅細胞對禽流感抗體檢測影響前提下，提高家禽群體保護能力，避免禽流感對家禽養殖生產和人們身體健康造成影響。

禽流感；紅細胞；家禽；抗體檢測

根據多年來的實際案例得出，禽流感可通過家禽與人混合感染，繼而給人類的生命安全帶來嚴重威脅。為提高動物免疫力，避免高發致病性禽流感發生，許多疫苗被廣泛的應用于家禽養殖中，其中，目前使用最廣泛的方法就是血清學抗體檢測，通過提取家禽的血清進行試驗室檢測，對結果進行分析，了解家禽的健康狀況。這樣有利于養禽者及時了解家禽的免疫情況，并作出正確的判斷和決策，保證養禽業的健康持續發展。因此，加強家禽禽流感血清抗體的檢測技術，對我國養禽業的發展具有重大意義。

1 家禽血清抗體檢測試驗

一般在檢測家禽血清抗體實驗時，按照國家標準規定，在進行血凝、血凝抑制試驗時，用雞紅細胞懸液作為整個試驗的指示細胞。在以往的試驗中，如果使用不同種的家禽紅細胞懸液來進行試驗，會產生一種非特異性的凝集反應，但是，目前對于這種反應會不會造成檢測結果的偏差還不得而知，這個問題，也就是本文所要研究的重點。

1.1 材料準備

待檢血清：選擇廣東省8個大型鴨廠采集80份鴨血清，4個大型雞場采集40份雞血清。

試劑：禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原（哈獸研）。

器材準備：5離心管、燒杯、酒精棉、5～50 μl移液器、110°V型微量血凝板、ml注射器、V型槽。

家禽紅細胞懸液的處理和保存：按照國家的有關國標規定，采集的家禽血液試劑要求為健康沒有感染禽流感的公雞和公鴨血，3羽的數量，采集后用相同體積的阿氏液與其混合，然后以1 000 r/min離心10 mim的要求使用PH7.2、0.01 mol/L PBS液進行洗滌，共洗滌三次。之后會看見試劑上層有一層白細胞的薄膜，小心用吸管將這層薄膜和清液吸走干凈，最后在添加PBS按照1%的比例配成紅細胞懸液。完成后，在4 ℃的溫度中進行保存，作為之后試驗的重要試劑。

1.2 試驗步驟

血凝試驗步驟：在事先準備好的血凝板中每個孔中滴入25 μl的PBS，再在第一個孔加入標準抗原：25 pl，從第一個孔到十一孔都進行倍比稀釋，之后在每個孔再次加入25 pl的PBS，然后依次每個孔加入25 pl處理好的紅細胞。將配置試劑混合，放置室內，正常溫度40分鐘后讀取數值。

配置4個單位的禽流感病毒抗原，用于回滴試驗。

血凝抑制試驗步驟：準備好的血凝板，在最后一孔即十二孔內加入50 pl的PBS，剩余十一孔內分別加入25 pl PBS。然后再在1～11孔中加入待檢測的血清，在1～10孔進行血清倍比稀釋，再將4個單位的病毒抗原液均勻混入1～11孔中，室內放置30 min，在讀取試驗數值。

1.3 試驗結果分析

根據之前的試驗結果，可以知道在血凝抑制試驗中，用同種家禽的紅細胞檢測其血清時，都沒出現特異性凝集反應。比如，在用雞的紅細胞檢驗雞的血清時，檢測結果正常，沒出現特異性凝集反應，用鴨的紅細胞檢測鴨的血清時，結果也是正常的。但在用不是同一種類的家禽紅細胞檢測另一種家禽血清時，比如試驗中用雞的紅細胞檢驗鴨血清，用鴨的紅細胞檢驗雞血清時，都出現了不同程度的非特異性凝集反應。其中，這種非特異性凝集反應對試驗成果的影響有較大的差異，影響的重要因素也就是抗體的滴度，滴度較高時，對檢測結果的影響較小，但是滴度不夠時，對結果的影響明顯。因此，在進行異種家禽紅細胞對禽流感抗體檢測時，用同種家禽的紅細胞懸液進行血凝抑制試驗，能減少非特異性因子對結果的影響，使結果更貼近事實。

2 家禽禽流感抗體檢測分析

在之前血凝抑制試驗結果得出，為保證檢測結果的準確性，最好使用同種家禽紅細胞懸液來進行檢測，能減少非特異性因子的影響。這在科學界也是被普遍認同的原理，雞紅細胞懸液本就是為了檢驗雞的禽流感，它的研究也是根據雞的紅細胞生產出來，所以不同的生物物種禽流感檢測用不同的禽流感懸液是正確的。而異種家禽由于紅細胞結構的不同，在檢測時也會出現細微的變化，最終造成檢測結果的不一樣。對于上面我們做的異種家禽紅細胞懸液在面對血清時產生的非特異性凝聚反應，最后得出的結果是影響禽流感抗體的檢測結果，這也充分說明了用兩種紅細胞檢驗抗體時，同種紅細胞懸液是最有效的實驗體。在我們做研究的兩種紅細胞懸液中，雖然同種家禽紅細胞懸液和異種家禽紅細胞懸液的檢測只有在非特異性凝聚方面有著細微的差別，但是這些差別在抗體的研究中是非常重要的，這些細微的差別在家禽抗體產生時也許會發生巨大的變化，最終造成一些不可預測的結果，對于這種不可預測的結果，并不是我們在抗體研究中想看到的，這也證明了只有同種家禽的紅細胞懸液才能適用與抗體的研究。

3 總結

目前，我國關于異種家禽紅細胞懸液檢測抗體的研究相對較少，在家禽研究方面和國外的一些研究機構還是有差距的。但是在對于異種家禽紅細胞懸液對于抗體的檢測上面已經走出了一小步，我們對于家禽細胞以及抗體的研究已經證明我們的實力，文中提到的實驗中證明了異種家禽紅細胞懸液對于抗體還是有比較大的影響的，由于它的紅細胞的原因，在檢測時會產生非特異性凝聚反應，這對于整個實驗結果都有著比較大的影響，所以說，在檢測抗體時只有用同種家禽的紅細胞懸液才能達到最好的檢測效果。

［1］國家標準局.GB/T 18936-2003.高致病性禽流感診斷技術［S］.

［2］彭英波.山區家禽禽流感免疫抗體監測與分析［M］.中國畜牧獸醫文摘，2014，（5）.

文獻標識碼：A 文章編號：1006-799X（2016）08-0097-01

盧敏杰（1986-），男，廣東中山人，助理獸醫師，主要從事疫病監測、動物防疫工作。