痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結核感染診斷中的聯合應用

張　梅

(清遠市人民醫院檢驗科，廣東清遠 511518)

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·論著·

痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結核感染診斷中的聯合應用

張梅

(清遠市人民醫院檢驗科，廣東清遠 511518)

摘要:目的探討痰TB-DNA定性與血清抗結核抗體及痰抗酸染色檢測方法在肺結核感染診斷中的聯合應用價值。方法以2013年1月至2015年6月在清遠市人民醫院就診的肺結核患者278例為研究對象。另擇性別、年齡匹配的同期入院非肺結核病患者121例為對照組。 現通過收集該肺結核患者的TB-DNA定性和血清抗結核抗體及抗酸染色的檢測結果進行分析，探討痰TB-DNA定性與血清抗結核抗體檢測及抗酸染色在肺結核感染診斷中的聯合應用。結果結核病組中抗酸染色靈敏度為32.01%；血清抗結核抗體靈敏度為51.44%；TB-DNA定性靈敏度為48.56%；TB-DNA定性和血清抗結核抗體聯合檢出率為67.63%；TB-DNA定性和抗酸染色聯合檢出率為54.68%；血清抗結核抗體和抗酸染色聯合檢出率為57.55%；三者聯合檢出率為68.71%。結論血清抗結核抗體檢測對肺結核的診斷簡單、有效，靈敏度優于TB-DNA定性檢測及抗酸染色，但其特異度比較低。細菌學診斷是結核病診斷的“金標準”，但是痰涂片尋找抗酸桿菌的陽性率低，而TB-DNA定性檢測快速又準確。血清抗結核抗體及痰抗酸染色及痰TB-DNA定性檢測聯合應用于肺結核診斷效果更佳。

關鍵詞:結核抗體；抗酸染色；聚合酶鏈反應；肺結核

結核病是由結核分枝桿菌感染引起的可累及全身多系統多器官的疾病，是由單一致病菌感染導致病死率最高的人畜共患傳染病。其嚴重危害人民群眾的健康，而這最重要的原因，就是其早期診斷技術不理想。實驗室常用抗酸染色檢查痰中的結核分枝桿菌為金標法篩查肺結核[1-2],但其漏檢率高，目前一般采用的檢測血清抗結核抗體(PPD-IgG)的方法為膠體金法，此法快速、簡便、靈敏度高，是目前比較理想的篩查方法，但其特異度不高，如能結合痰TB-DNA定性檢測，則能提高其檢測的準確性。

1資料與方法

1.1一般資料2013年1月至2015年6月在清遠市人民醫院就診的以各方面綜合考慮為肺結核患者，入選病例包括診斷為肺結核的患者278例，男215例，女63例，最大年齡為95歲，最小年齡為14歲，平均年齡為54.8歲，納入肺結核病例組的嚴格遵照世界衛生組織(WHO)《肺結核診斷指南》診斷標準：(1)癥狀典型如有接觸病史、潮熱、盜汗、咳嗽、咯血；(2)體征典型如消瘦、貧血、肺上部濕啰音；(3)X線片表現典型(病灶位于上葉后或下葉背段，浸潤、增殖、空洞、鈣化多種性質病灶并存，同側或對側有播散病灶)或痰菌抗酸染色陽性或抗結核治療有效即可診斷。另擇性別、年齡匹配的同期入院非肺結核病患者121例，男79例，女42例，最小年齡為9歲，最大年齡為88歲，平均年齡56.6歲為對照組。排除標準：(1)本次入院前已存在嚴重的肝腎疾病、惡性腫瘤等嚴重的系統性疾病；(2)HIV的患者；(3)孕婦或哺乳婦女及對藥物過敏的患者。所有入選者在就診期間，取痰液送往檢驗科微生物室進行痰涂片，進行抗酸染色；另取痰液送往廣東省金域檢驗中心檢測痰液TB-DNA；空腹采集靜血3 mL，分離血清送往檢驗科免疫室檢測PPD-IgG。

1.2儀器與試劑日本OLYMPUS公司的光學顯微鏡(OLYMPUS-BX41)；美國伯樂公司的CFX-96熒光定量PCR儀。杭州天和微生物試劑有限公司的抗酸染液；上海奧普生物醫藥有限公司的結核分枝桿菌抗體診斷試劑盒；凱杰生物工程有限公司的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒。

1.3方法抗酸染色在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結合成復合物，石炭酸復紅染色后，用鹽酸乙醇分色，當再加堿性美蘭復染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細菌及背景中的物質為藍色。涂片染色鏡檢嚴格按《結核病診斷實驗室檢驗規程》[3]和試劑說明書進行。鏡檢結果按以下方式報告：連續觀察300個不同視野，未發現抗酸桿菌為抗酸桿菌陰性(-)；否則為抗酸桿菌陽性(+)。PPD-IgG試驗步驟：在反應板的反應孔中間，依次加入2滴封閉液、40 μL 血清標本、6滴洗滌液、2滴金標液、6滴洗滌液，等待薄膜吸入。結果讀取，薄膜中間有紅圓點為陽性，否則為陰性。FQ-PCR檢測嚴格按試劑說明書進行。主要實驗操作包括樣本液化、DNA提取、擴增試劑準備、加樣和PCR擴增。反應條件：先在37 ℃擴增3 min；93 ℃再變性1 min；93 ℃退火5 s，最后在60 ℃延伸40 s，以20 μL的反應體系重復40個循環。

1.4統計學處理按涂片抗酸染色鏡檢結果及PPD-IgG、TB-DNA檢測結果均以陰性(-)、陽性(+)對檢測樣本進行分類。采用SPSS17.0統計學軟件，采用χ2檢測結核陽性率的比較，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1結核抗酸染色兩組檢測結果的靈敏度及特異度比較肺結核病例組血清結核抗體檢測的陽性率為32.01%，顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。在結核組別中，陽性89例，陰性189例，靈敏度為32.01%；在非結核組別中，全部為陰性結果，特異度為100.00%，約登指數為32.01%。

2.2血清抗結核抗體兩組檢測結果的靈敏度及特異度比較結果肺結核病例組血清結核抗體檢測的陽性率為51.44%，顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。在結核組別中，陽性為143例，陰性為135例，靈敏度為51.44%；在非結核組別中，陽性為41例，陰性為80例，特異度為66.12%，約登指數為17.56%。

2.3結核核酸定性兩組檢測結果的靈敏度及特異度比較肺結核病例組痰TB-DNA陽性率48.56%，顯著高于對照組(陽性率為0)，差異有統計學意義(P<0.05)。在結核組中陽性為135例，陰性為143例，靈敏度為48.56%；在非結核組別中，全部為陰性，特異度為100.00%，約登指數為48.56%。

2.4各種檢測方法的檢測結果檢出率比較各種檢測方法診斷肺結核感染中，由單一痰抗酸染色檢測方法檢出率為32.01%，血清抗體檢出率為51.44%，由痰PCR檢出率為48.56%；三者的聯合檢出率為68.71%。

3討論

結核病目前在我國發病率極高，其特點依然是流行性高、感染性高、患病情況嚴重、耐藥性高、病死率較高、疫情難以遞減。發現患者，實施治療和系統管理，直到傳染源完全消滅是結核病控制的最重要措施。發現患者主要屬于肺結核診斷問題，只有確診了才可以采取措施進行治療，及時診斷或延誤診斷都能夠影響到治療效果和預后問題，所以肺結核診斷對流行病學和臨床治療有非常重要的意義。呼吸系統疾病屬于常見肺結核疾病的臨床癥狀。通常在肺結核診斷中，痰和病變組織檢測結核桿菌屬于最為可靠的診斷方法，被認為是金標準。胸部X線片檢查通常無法確診肺結核，因為有其他類似肺部疾病，如肺炎、肺部腫瘤等疾病也能夠發生相似的肺部X線片影像學資料。所以，在大多數發展中國家，檢查痰中細菌學，通常可以作為診斷肺結核的唯一指標。但是，此種方法的檢出率比較低，若是只使用此痰結核菌檢查方法作為診斷的唯一標準，有可能導致大多數結核患者出現漏診。在全國肺結核流行病調查當中，痰菌呈現陰性的肺結核患者占總的結核病患者的 60%～70%。在實際臨床應用中，痰菌出現陰性且通過臨床綜合資料確診為肺結核病的患者占臨床診斷為肺結核病例的 70%～80%。因此，在臨床實際應用中，如果沒有得到病原學確診依據，菌陰肺結核的診斷依然需要按照臨床資料綜合分析進行確診避免發生誤診。

通過本研究發現，單獨使用一種檢測方法來診斷肺結核是非常不理想的，而使用3種檢測方法聯用對肺結核的靈敏度和準確度最高，和一些發表的研究文獻結果相一致[4]。PPD-IgG屬于肺結核基本診斷中比較傳統的方法，陽性者顯示患者已經感染了結核桿菌且存在抗結核桿菌的免疫力，但是并無法確定其就是結核病，其特異性也比較差。使用通常認為強陽性才能成為其診斷的標準，能夠避免過度誤診。本研究發現，痰結核分枝桿菌抗酸染色檢測、血清結核分枝桿菌抗體檢測、痰結核分枝桿菌核酸定性聯合檢測，檢測率為68.71%，明顯優于其他組合，可減少肺結核分枝桿菌感染的漏診率。

診斷中以痰TB-DNA作為檢測標準[5]，并不完善，容易漏診誤診，最好使用多種方法聯檢，確保得到最高檢出率以及最低的誤診率。本研究涉及的檢測方法如痰結核分枝桿菌抗酸染色檢測、PPD-IgG檢測、痰TB-DNA等都比較經濟、方便，可以快速確認，適合在基層醫院使用，有較高的價值[6]。

參考文獻

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[2]張梅,焦祖偉,聶渝瓊.我國結核病診斷方法現狀與進展[J].中國衛生檢驗雜志,2011,21(12):3018-3020.

[3]中國防癆協會基礎專業委員會．結核病診斷實驗室檢驗規程[M]．北京：中國教育文化出版社，2006：13-19．

[4]王成勇,李翠萍.三種檢測方法在菌陰結核病診斷中的價值[J].臨床肺科學雜志,2007,12(9):933-934.

[5]李振生，李德新．結核菌噬菌體生物擴增法與結核菌DNA聯合檢測對痰菌陰性肺結核診斷的價值[J]．河北醫科大學學報,2012,33(8):881-883.

[6]戴駿，徐玉嬋．TB-DNA、TB-DOT、BCG-PPD檢測在痰菌陰性肺結核診斷中的價值[J].山東醫藥,2009,49(50):50-52.

Combined detection of sputum smears,sputum TB-DNA and serum anti-PPD-IgG in diagnosis of tuberculosis

ZhangMei

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofQingyuanCity,Qingyuan,Guangdong511518,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the value of combined application of qualitative detection of TB-DNA serum anti-PPD-IgG and acid-fast staining methods in the diagnosis of tuberculosis infection.MethodsTotally 278 pulmonary tuberculosis patients and 121 non-pulmonary tuberculosis patients were collected from Qingyuan people′s hospital during the period from January 2013 to June 2015.Tuberculosis in patients with TB-DNA qualitative and serum anti-PPD-IgG and acid-fast staining test results was analyzed.Sputum TB-DNA qualitative and serum anti-PPD-IgG detection and joint application of acid-fast staining in the diagnosis of tuberculosis infection.ResultsSensitivities of acid-fast staining,TB-DNA and serum anti-PPD-IgG in the TB group were 32.01%,51.44% and 48.56% respectively.The detectable rate of combining TB-DNA with serum PPD-IgG was 67.63%.The detectable rate of combining TB-DNA with acid-fast staining was 54.68%.The detectable rate of combining serum anti-PPD-IgG with acid-fast combined rate was 57.55%.The detectable rate of combining three assays improved to 68.71%.ConclusionSerum anti-PPD-IgG detection in the diagnosis of tuberculosis is simple,effective,qualitative detection of acid-fast staining sensitivity better than TB-DNA,but it had a poor specificity.Bacteriologic diagnosis are tuberculosis diagnostic "gold standard",but the detectable rate for acid-fast bacilli is low.The qualitative of TB-DNA test had a better sensitivity and specificity than other two assay.Combining with three assays could increase detectable rate and improve diagnosis of tuberculosis disease.

Key words:tuberculosis antibody;acid fast stain;polymerase chain reaction;tuberculosis

(收稿日期：2015-10-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.030

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0504-02

作者簡介：張梅，女，主管檢驗技師，主要從事免疫學研究。