T-SPOT.TB在肺部疾病結核感染篩查中的應用

禹崇飛，番云華，王水花，金相倫

(云南省德宏傣族景頗族自治州人民醫院檢驗科 678400)

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·臨床研究·

T-SPOT.TB在肺部疾病結核感染篩查中的應用

禹崇飛，番云華，王水花，金相倫

(云南省德宏傣族景頗族自治州人民醫院檢驗科 678400)

目的 評價結核分枝桿菌(后簡稱結核桿菌)感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)診斷肺部疾病感染結核的價值。方法 回顧性分析405例肺部疾病患者資料，所有患者均行外周血T-SPOT.TB，血清結核抗體(TB-Ab)、痰液涂片抗酸菌檢測，結核DNA檢測，并對其檢測結果進行分析，比較各指標的陽性率。結果 T-SPOT.TB陽性率為39.26%，遠高于TB-Ab(10.86%)、痰液涂片(1.23%)、TB-DNA(3.95%)的陽性率。結論 T-SPOT.TB在結核病中具有較好的輔助診斷價值，其敏感性顯著高于其他檢測方法，可有效檢出結核潛伏感染，幫助臨床鑒別診治疾病，具有較高推廣應用價值。

肺部疾病； 潛伏性結核； T細胞斑點試驗； 結核分枝桿菌

結核病是由結核分枝桿菌(后簡稱結核桿菌)感染引起的慢性傳染病，可侵及許多臟器，以肺部結核感染最為常見。排菌者為其重要傳染源。人體感染結核桿菌后不一定立刻發病，當抵抗力降低或細胞介導變態反應增高時，才可能引起臨床發病。若能及時診斷并予合理治療，大多可獲臨床痊愈。結核桿菌的實驗室檢查有多種，常規采用痰液涂片查抗酸桿菌、血清檢測查結核抗體(TB-Ab)、痰液查結核DNA(TB-DNA)等，最新檢測方法為抗凝血提取淋巴細胞，用結核桿菌特異抗原刺激后檢查γ干擾素釋放情況，即結核桿菌感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)。筆者通過分析405例肺部疾病患者資料探討上述4種試驗對結核感染的篩查陽性率，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年9月至2015年12月德宏傣族景頗族自治州人民醫院收治的405例肺部疾病患者，均進行T-SPOT.TB、TB-Ab、TB-DNA和痰液涂片檢測，臨床診斷包括肺炎、肺部感染、肺占位性病變等；年齡1～87歲；女性155例，男性250例。

1.2 儀器與試劑 儀器：日本Sysmex XT1800i血細胞分析儀，美國ABI7500聚合酶鏈式反應(PCR)擴增儀。試劑：檢測試劑采用英國Oxford Immunotec公司T-SPOT.TB檢測試劑。

1.3 方法 所有研究對象清晨空腹，抽取外周靜脈血3 mL和肝素抗凝血5 mL，應用酶法檢測血清TB-Ab，應用T-SPOT.TB，PCR方法檢測痰液TB-DNA，痰液涂片抗酸染色查杭酸桿菌。

1.4 結果判讀標準 陽性結果：(1)空白對照孔斑點數為0～5個時，抗原A或抗原B孔的斑點數-空白對照孔的斑點數≥6。(2)空白對照孔斑點數為6～10個時，抗原A或抗原B孔的斑點數≥2×空白對照孔的斑點數，提示患者體內存在針對結核桿菌特異的效應T細胞，患者存在結核感染，但是否為活動性結核病，需結合臨床癥狀及其他檢測指標綜合判斷。陰性結果：上述標準不符合且陽性質控對照孔正常時檢測結果為“陰性”，提示患者體內不存在針對結核桿菌特異的效應T細胞。

1.5 統計學處理 采用Excel工作表進行統計處理。

2 結 果

405例患者中，T-SPOT.TB陰性246例，TB-Ab陰性361例，痰液涂片陰性400例，TB-DNA<1 000 copy/mL 389例。T-SPOT.TB陽性159例，陽性率為39.26%；TB-Ab陽性44例，陽性率為10.86%；痰液涂片僅有5例陽性，陽性率為1.23%；TB-DNA陽性16例，陽性率為3.95%。在159例T-SPOT.TB陽性中，有25例TB-Ab陽性，4例痰液涂片陽性，16例TB-DNA陽性。在44例TB-Ab陽性中，有26例T-SPOT.TB陽性，1例痰液涂片陽性，6例TB-DNA陽性。在5例痰液涂片陽性中，有4例T-SPOT.TB陽性，1例TB-Ab陽性，1例TB-DNA陽性。在16例TB-DNA陽性中，有16例T-SPOT.TB陽性，6例TB-Ab陽性，1例痰液涂片陽性。T-SPOT.TB陽性率最高。

3 討 論

1882年，有學者證明結核桿菌為結核病病原菌。結核桿菌可侵犯全身各組織器官，但以肺部感染最多見。隨著抗結核藥物的不斷發展和衛生生活狀況的改善，結核的發病率和病死率曾一度大幅下降。20世紀80年代后，由于艾滋病和結核桿菌耐藥菌株的出現、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化。根據世界衛生組織統計，世界目前約有20億人感染結核桿菌，每年約有 880萬新發患者，200萬人因結核病而死亡[1]。在某些發展中國家，成人中結核桿菌攜帶率高達80%，其中約5%～10%攜帶者可發展為活動性結核病。

結核桿菌的檢測方法多，常用有結核桿菌素試驗、TB-Ab檢測、痰液涂片抗酸染色、結核桿菌DNA檢測等。結核桿菌素試驗是應用結核桿菌素進行皮膚試驗，測定機體對結核桿菌是否能引起超敏反應的1種試驗，受卡介苗接種影響大，感染初期、老年人、細胞免疫低下者會導致假陰性結果。感染結核桿菌后，體內可產生特異性抗體；將結核桿菌抗原包被在固相載體上，與待測血清反應，其與血清中相應抗體結合，再以膠體金(或酶)標記，顯示反應，可檢出血清中結核桿菌抗體。由于酶聯免疫吸附測定(ELISA)法缺乏對極低信號的檢測能力，結核特異的細胞免疫應答會被體內本身存在的固有免疫應答所稀釋，檢測的敏感性會受到影響，出現一定的假陰性、假陽性反應。痰結核桿菌陽性率較低，僅為30%～50%。TB-DNA檢測是1種敏感試驗，通過PCR方法擴增，可在短時間內檢出結核桿菌，但受限于標本取材和提取。

近年來，1種基于酶聯免疫斑點檢測(ELISPOT)，快速檢測結核病的血液診斷方法開始被應用[2]。國外已將ELISPOT作為常規檢測結核病，尤其是早期和潛伏結核感染的方法之一[3-4]。T細胞γ干擾素釋放分析是經結核特異性抗原刺激后釋放γ干擾素的定量檢測試驗，是用于診斷結核潛伏感染的最新手段。由于結核感染者體內存在特異的效應T淋巴細胞再次受結核抗原刺激時，會分泌多種細胞因子(包括γ干擾素)。T-SPOT.TB使用結核桿菌特異的RD1區編碼早期分泌靶向抗原ESAT-6和培養濾過蛋白CFP-10作為抗原刺激，不受卡介苗接種的影響，而絕大多數非結核桿菌缺乏RD1區基因[5]，特異性和敏感性均較高[6-7]，目前已成為歐洲國家篩查肺結核的主要方法[8]。

T-SPOT.TB檢測技術已經成為結核桿菌感染的快速診斷新工具，特別在潛伏性結核的篩查中有較高應用價值，臨床醫師可根據篩查結果，結合臨床資料綜合分析，對結核感染早診斷、早治療。

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[5]曾誼,馮梟,宋梅梅,等.酶聯免疫斑點試驗在菌陰肺結核診斷中的價值[J].中國防癆雜志,2012,34(2):100-102.

[6]雷建平.菌陰肺結核病診斷思考[J].中國防癆雜志,2011,33(12):820-821.

[7]陶學芳,王建華,李永興,等.結核感染T細胞酶聯免疫斑點試驗在肺結核及肺外結核診斷中的價值[J].浙江預防醫學,2012,24(11):4-7.

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.052

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1673-4130(2016)21-3073-02

2016-04-01

2016-06-10)