甘青報春化學成分研究

張浩波， 段國建， 陳 暉， 彭曉霞，孫明霞

(甘肅中醫藥大學藥學院，甘肅蘭州 730000)

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甘青報春化學成分研究

張浩波， 段國建*， 陳 暉， 彭曉霞，孫明霞

(甘肅中醫藥大學藥學院，甘肅蘭州 730000)

[目的]研究報春花屬植物甘青報春的化學成分。[方法]采用柱層層析、制備薄層層析等分離手段，利用MS、1H NMR、13C NMR等技術，同時結合文獻數據和理化數據對所分離出的化合物進行結構鑒定。[結果]從甘青報春中分離并鑒定了5個化合物，其分別為2-苯基色原酮、柚皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素、芹菜素。[結論]該研究所分離的化合物均屬于黃酮類化合物。

甘青報春；化學成分；分離；理化性質；結構鑒定

甘青報春(Primulatangutica)屬于報春花科報春花屬植物，主要產于西藏東部、四川西北部、青海、甘肅南部等地區，多年生草本植物，為傳統的藏藥。其味微苦、澀，性微寒，無毒，具有安神止痛、退燒、清熱斂瘡、斂痛等功效，常用于治療神經痛、關節痛、高血壓、燙傷、瘡癤等疾病[1-2]。報春花科植物中主要化學成分有黃酮類、萜類、甾醇類、有機酸類、醌類等，已有很多學者對此屬植物進行了相關研究，并分離出相應化合物[3-4]。張雅媛[5]通過對報春花科植物過路黃干燥全草進行提取，得到金錢草水提物和金錢草醇提物，經過篩選，發現醇提取物具有良好的抗炎、解痙作用。報春花科植物中皂苷類成分抗腫瘤作用的靶點和途徑廣泛，除可直接殺傷和抑制癌細胞外，在增強機體免疫功能、抑制癌細胞的轉移、誘導癌細胞的再分化等方面具有良好的活性[6]。鑒于對甘青報春的研究相對較少，且該藥的藥理研究鮮見報道。筆者以甘青報春為研究對象，對其全草成分進行研究，通過運用現代分離 (柱色譜、HPLC、PTLC等)、分析技術(1H NMR、13C NMR、HRMS等) 對甘青報春提取物中的化學組分進行了分析鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材。甘青報春于2014年9月購于甘肅省碌曲縣，經甘肅中醫藥大學李成義教授鑒定為甘青報春。

1.1.2 藥劑。二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚 (60～90 ℃)、丙酮和甲醇等均為分析純。顯色劑為5%磷鉬酸-乙醇溶液及碘。

1.1.3 儀器。1H NMR由Bruker Avanced Ⅲ超導核磁共振儀測定，DMSO-d6作溶劑；薄層 (II C) 檢測用ZF-1三用紫外燈 (254和365 nm)。XMTD-8222型電熱恒溫鼓風干燥箱 (上海精宏實驗設備有限公司)；RE-52AA型旋轉蒸發器 (上海亞榮生化儀器廠)；SB-3200DTD型超聲波清洗機 (寧波新芝生物科技股份有限公司)；薄層色譜硅膠預制板 (煙臺市化學工業研究所)；柱層析硅膠(200～300目)、薄層層析硅膠 (硅膠H，GF 254) 均為青島海洋化工廠出品。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理及制備。干燥的甘青報春全草 (1.5 kg) 研磨后用85%乙醇室溫浸泡3次，每次7 d，浸出液經減壓蒸餾除去溶劑得浸膏50 g。浸膏用二氯甲烷 (500 mL) 溶解，過濾并減壓蒸餾除去溶劑得浸膏15 g，然后以硅膠拌樣，揮干溶劑后以200 g硅膠濕法裝柱，用洗脫劑 (石油醚∶乙酸乙酯=5∶1～2∶1，二氯甲烷∶甲醇=50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1) 梯度洗脫，經薄層檢測合并極性相近的餾分，得11個極性段 (A～K)。選擇合適的極性段化合物進行進一步純化，得到5種化合物。

1.2.2 測試。通過1H NMR、13C NMR等技術進行分析。

2 結構鑒定

2.1 化合物1 無色針狀晶體。1H NMR (400 MHz,Chloroform-d)δ:8.23 (dd,J= 7.9,1.7 Hz,2H),7.98～7.89 (m,4H),7.70 (ddd,J= 8.7,7.0,1.7 Hz,2H),7.60～7.47 (m,8H),7.42 (s,1H),7.42 (dd,J= 15.1,1.1 Hz,1H),6.83 (s,2H)。從該化合物的氫譜數據可以看到，除在δ6.83 ppm處有一個單吸收峰外，其余吸收峰均在δ8.5～7.0 ppm的低場區，以上數據與文獻[7]較為一致,故鑒定為2-苯基色原酮 (Flavone)。

2.2 化合物2 黃色粉末。1H NMR (CD3OD,400 MHz) δ：7.29 (d,J=8.5 Hz,2H),6.81 (d,J=8.5 Hz,2H),5.87 (s,2H),5.30 (d,J=10.2 Hz,1H),3.10 (d,J=10.2 Hz,1H),2.66 (dd,J=17.1,3.2 Hz,1H)。13C NMR (CD3OD,100 MHz)δ：197.0,168.3,165.5,164.9,159.0,131.0,129.0,116.3,103.3,97.0,96.1,80.4,44.0。從該化合物的核磁氫譜數據可以看到，在高場區(δ 2.66 ppm)只有一個吸收峰，而其他的吸收峰主要集中在苯環區，所以初步判斷此化合物屬于黃酮類化合物。結合核磁碳譜數據可知，在化合物中應該有一個羰基結構(δ 197.0 ppm)，另外在δ 160 ppm左右有4個吸收峰，可以判斷應屬于連有吸電子結構或元素的C ，這也符合黃酮類化合物的化學位移規律。以上數據與文獻[8]一致，故鑒定為柚皮素 (Naringenin)。

2.3 化合物3 黃色粉末。1H NMR (CD3COCD3,400 MHz) δ：12.36 (s,1H),8.01 (d,J=2.0 Hz,1H),7.57 (dd,J=8.4,2.0 Hz,1H),6.93 (d,J=8.4 Hz,1H),6.50 (d,J=2.0 Hz,1H),6.27 (d,J=2.0 Hz,1H),5.42 (d,J=7.2 Hz,1H),3.74 (dd,J=11.8,2.3 Hz,1 H),3.57 (dd,J=11.8,5.2 Hz,1H),3.46～3.20 (m,4H)。13C NMR (CD3COCD3,100 MHz) δ：180.1,165.9,163.9,159.8,158.9,149.9,145.8,134.2,123.7,117.1,116.8,105.6,99.2,94.2,78.7,77.9,75.9,70.8,62.9。從該化合物的核磁氫譜數據可以看到，在δ 3.8～3.2 ppm有明顯的吸收峰存在，且其峰型具有糖苷吸收峰的特點。結合核磁碳譜數據可知，在δ 180～140 ppm的吸收峰具有典型的黃酮類化合物特征。以上數據與文獻[9]基本符合，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷 (Quercetin-3-O-β-D-glucosicle)。

2.4 化合物4 黃色粉末。1H NMR (C5D5N,400 MHz) δ：8.31 (d,J=1.9 Hz,1H),8.21 (dd,J=8.4,1.9 Hz,1H),7.38(d,J=8.4Hz,1H),6.87 (d,J=1.9 Hz,1H),6.76 (d,J=1.9 Hz,1H),3.87 (s,3H)。13C NMR (C5D5N,100 MHz) δ：177.4,165.6,162.5,157.5,149.4,148.5,147.5,137.9,123.1,122.8,116.6,112.6,104.5,99.3,94.4,56.0。從該化合物的核磁氫譜數據可以看到，在δ 3.87 ppm處有一個明顯的單吸收峰出現，可以判斷此化合物結構中可能含有甲氧基結構。結合核磁氫譜與碳譜數據可以推斷此化合物應屬于典型的黃酮類化合物。以上數據與文獻[10]一致，故鑒定為異鼠李素 (Isorhamnetin)。

2.5 化合物5 淺黃色粉末。1H NMR (CD3COCD3,400 MHz) δ：12.95 (s,1H),7.91(d,J=8.8 Hz,2H),6.92 (d,J=8.8 Hz,2H),6.74 (s,1H),6.44 (d,J=1.6 Hz,1H),6.15 (d,J=1.6 Hz,1H)。13C NMR (CD3COCD3,100 MHz) δ：181.73,165.2,163.8,161.9,161.4,157.5,128.7,121.3,116.1,103.5,102.9,99.2,94.3。從該化合物的核磁氫譜數據可以看到，除在低場區有一個吸收峰外，其他吸收峰均集中在苯環區，與核磁碳譜數據相符合。但從核磁碳譜數據可以發現，在較為低場的δ 160 ppm處有5個吸收峰，說明相應C原子上應該連有吸電子基團，再結合化合物顏色可以初步推斷應屬于黃酮類化合物。以上波譜數據與文獻[11]基本一致，故鑒定為芹菜素 (Apigenin)。

3 結論

采用柱層層析、制備薄層層析等分離手段，利用MS、1H NMR、13C NMR等技術，結合文獻數據和理化數據對所分離出的化合物進行結構鑒定，研究報春花屬植物甘青報春的化學成分。結果表明，從甘青報春中共分離并鑒定了5個化合物，分別為2-苯基色原酮、柚皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素、芹菜素，這些化合物均屬于黃酮類化合物。

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The Study of Chemical Constituents onPrimulatangutica

ZHANG Hao-bo,DUAN Guo-jian*,CHEN Hui et al

(College of Pharmacy,Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou,Gansu 730000)

[Objective]To study the chemical constituents ofPrimulatangutica.[Method]The techniques of separation contain column chromatography(CC),preparative thin layer chromatography (PTLC) and so on.Through the results of H-Nuclear Magnetic Resonance (1H NMR),C-Nuclear Magnetic Resonance (13C NMR),High Resolution Mass Spectrum (HRMS),and combined with literature data,physicochemical data,the structures of the separated compounds were identified.[Result]Five flavonoids were obtained and elucidated as：flavone,naringenin,quercetin-3-O-β-D-glucosicle,isorhamnetin,apigenin.[Conclusion] All above compounds belong to flavonoids.

Primulatangutica;Chemical constituent; Separation; Physicochemical property; Structure identification

甘肅省高等學校科研項目(2013A-084)；甘肅中醫藥大學引進人才基金項目(BH2012-089)。

張浩波(1977- )，男，甘肅隴南人，副教授，博士，從事摩擦學及天然藥物化學研究。*通訊作者，副教授，博士，從事天然藥物分子的分離分析及全合成研究。

2016-10-12

S 567.23+9

A

0517-6611(2016)36-0154-02