豬屎豆不同部位黃酮含量的測定及比較

郭艷峰， 黃 鈺， 劉 妍， 黃 冬　(中山火炬職業技術學院生物醫藥系 ，廣東中山 528436)

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豬屎豆不同部位黃酮含量的測定及比較

郭艷峰， 黃 鈺， 劉 妍， 黃 冬*(中山火炬職業技術學院生物醫藥系 ，廣東中山 528436)

摘要[目的]研究豬屎豆不同部位不同提取相的黃酮含量。[方法]采用乙醇回流提取作為豬屎豆黃酮的制備方法；以蘆丁為對照品，采用紫外-可見分光光度法作為黃酮的測定方法。[結果]葉片石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黃酮含量分別為14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，果實各萃取相黃酮含量分別為3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；豬屎豆葉片石油醚相、氯仿相和水相的黃酮含量顯著高于果實相應的黃酮含量，果實乙酸乙酯相的黃酮含量顯著高于葉片乙酸乙酯相的黃酮含量。[結論]豬屎豆葉片和果實可作為黃酮開發利用的重要來源之一。

關鍵詞豬屎豆；黃酮；不同部位；乙醇回流提取；紫外分光光度法

黃酮類化合物的基本結構構成為C-G-C 方式，屬于植物次級代謝產物。黃酮類化合物具有來源廣、生物活性多、毒副作用小等特點，目前廣泛應用于臨床，可影響心血管系統、抗炎調節免疫、抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫系統調節、神經系統、生殖系統、消化系統等[1]。近年來，植物源藥劑以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物更是以其光譜的藥理作用引人矚目，是當前藥品、功能食品和保健品開發的重點活性物質[2]。

黃酮類化合物廣泛存在于豆科植物中，但在豬屎豆屬植物中僅有少量分布，主要分布在該屬馬都拉豬屎豆(C.Madurensis)中[3]。豬屎豆(CrotalariapallidaAiton)是豆科(Leguminosae)豬屎豆屬(Crotalaria)多年生草本，是世界廣布種，原產于熱帶美洲，分布于大西洋海岸線、巴西、美洲、非洲及中國大部分地區，常見于路邊、河邊、沙地還有貧瘠的山坡[4-5]。豬屎豆具有較好的生物活性，全草有散結、清濕熱等作用，近年來試用于抗腫瘤效果較好，主要對鱗狀上皮癌、基底細胞癌有療效[5]。豬屎豆生長茂密、生長速度快、花期長、結實率高[4]，每年都能采集到大量的豬屎豆葉和莢果。已有研究顯示，豬屎豆葉片提取物總黃酮具有良好的抑菌活性[2]，能廣泛用于殺菌劑、保鮮劑等產品的開發，但至今對果實的研究及開發利用還很缺乏，造成了極大的資源浪費。該研究對豬屎豆不同部位不同提取相的黃酮進行了含量的測定，明確果實總黃酮含量的情況，以期為果實在黃酮類功能產品方面的開發以及豬屎豆植物的進一步開發利用提供依據。

1材料與方法

1.1試驗材料豬屎豆(CrotalariapallidaAit.)葉片和果實分別于2015年12月21日采自廣東省中山市陵崗村，經中山市森林資源中心蔣謙才高級工程師鑒定為豆科(Leguminosae)豬屎豆屬(Crotalaria)豬屎豆的葉片和果實。采集后的葉片和果實經80 ℃干燥后粉粹備用。

1.2儀器和試劑旋轉蒸發儀(RE-30L)，紫外可見分光光度儀(北京譜析TU-1901)，粉碎機(LD-800，粉粹細度30～200目)。蘆丁(上海江萊生物科技有限公司，優級純，規格100 mg)，乙醇、石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、氯仿試劑、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純。

1.3試驗方法

1.3.1豬屎豆葉片提取物的制備。分別精密稱取豬屎豆葉片和果實粉末200 g，分別置于1 000 mL的圓底燒瓶中，加石油醚300 mL，回流提取2 h，直至溶劑無色，揮發完樣品中的石油醚，加80%乙醇300 mL進行回流提取2 h，過濾后濾渣繼續用80%的乙醇回流提取1 h，合并濾液，將乙醇旋轉蒸發完，得浸膏。

1.3.2標準曲線的制作。參考王芳等[2]、余文新等[6]方法配置蘆丁標準溶液，選擇合適的測定波長(500 nm)進行吸光度測定，每濃度標準溶液連續測3次。繪制蘆丁的標準曲線，求出吸光度A與蘆丁的標準溶液濃度之間的線性回歸方程。

2結果與方法

2.1豬屎豆樣品不同提取部位的浸膏得率取干燥的豬屎豆葉片樣品200 g，分別利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取葉片得浸膏11 g，得率為2.75%；氯仿萃取葉片得浸膏13 g，得率為3.25%；乙酸乙酯萃取葉片得浸膏12 g，得率為3.00%；水相萃取葉片得浸膏13 g，得率為3.25%。

取干燥的豬屎豆果實樣品200 g，分別利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取果實得浸膏17 g，得率為4.25%；氯仿萃取果實得浸膏18 g，得率為4.50%；乙酸乙酯萃取果實得浸膏15 g，得率為3.75%；水相萃取果實得浸膏11 g，得率為2.75%。

2.2標準溶液濃度與吸光度值的回歸方程由圖1可見，蘆丁標準溶液濃度與吸光度之間的線性回歸方程為A=4.685 7x-0.010 5(R2=0.992 0)，表明蘆丁的質量濃度在0.01～0.05 mg/mL與吸光度有良好的線性關系。

2.3各萃取相黃酮含量按照標準曲線及其換算關系，計算豬屎豆葉片及果實提取物各部分黃酮含量，結果表明(表1)，石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相葉片的黃酮含量分別為14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，各萃取相果實黃酮含量分別為3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；石油醚相、氯仿相和水相葉片的黃酮含量顯著高于果實的黃酮含量(P< 0.05)，乙酸乙酯相果實黃酮含量顯著高于葉片黃酮含量(P<0.05)。

3結論

該試驗采用體積分數80%的乙醇，70 ℃回流提取豬屎豆葉片和果實中的有效成分，分別得到了石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黃酮含量。結果顯示，葉片石油醚相黃酮含量為14.63 mg/g，氯仿相黃酮含量為92.67 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量為8.29 mg/g，水相黃酮含量為98.80 mg/g；果實石油醚相黃酮含量為3.24 mg/g，氯仿相黃酮含量為30.54 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量為52.15 mg/g，水相黃酮含量為59.72 mg/g。比較而言，豬屎豆葉片石油醚相、氯仿相和水相的黃酮含量顯著高于果實相應的黃酮含量，果實乙酸乙酯相的黃酮含量顯著高于葉片乙酸乙酯相的黃酮含量。

參考文獻

[1] 王曉梅,曹穩根.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].宿州學院學報,2007,22(1): 105-107.

[2] 王芳,高瑾,毛宇，等.豬屎豆葉片提取物總黃酮含量及其抑菌活性研究[J].江西農業大學學報,2014,36(4): 861-867.

[3] YIN Z L.The study on distribution,pharmacology and analytical methods of isoflavone[J].Lishizhen Med Mat Medica Res,2003,14(3): 178.

[4] 郭艷峰,劉妍,蔣謙才，等.先鋒植物豬屎豆Crotalariapallida自花傳粉機制研究[J].廣西植物 (已接收).

[5] XU L R.Fabaceae (Leguminosae)[M]//Floral of China 10.Beijing：Science Press and St.Louis: Missouri Botanical Garden Press，2010：105-117.

[6] 余文新,鄧瑞云,林勵，等.檀香不同部位總黃酮含量比較[J].齊齊哈爾醫學院學報,2012,33(1): 3-4.

Comparison and Determination of Total Flavonoids in Different Parts ofCrotalariapallida

GUO Yan-feng, HUANG Yu, LIU Yan, HUANG Dong*

(Department of Biomedicine,Zhongshan Torch Polytechnic,Zhongshan,Guangdong 528436)

Key wordsCrotalariapallida; Flavonoids; Different parts; Ethanol reflux extraction; Ultraviolet spectrophotometry

Abstract[Objective] To research the flavonoids content in different parts ofCrotalariapallidaat different extraction phases.[Method] Flavonoids were prepared fromC.pallidaby ethanol reflux extraction.With rutin as the reference substances,UV-VIS spectrophotometry was used as the detection method of flavonoids.[Conclusion] Flavonoids contents inC.pallidaleaves in petroleum ether phase,chloroform phase,ethyl acetate phase and water phase were 14.63,92.67,8.29 and 98.80 mg/g,respectively.Flavonoids contents inC.pallidafruits were 3.24,30.54,52.15 and 59.72 mg/g,respectively.Flavonoids contents inC.pallidaleaves in petroleum ether phase,chloroform phase and water phase were significantly higher than those inC.pallidafruits.Flavonoids content inC.pallidafruits in ethyl acetate phase was significantly higher than that inC.pallidaleaves.[Conclusion]C.pallidaleaves and fruits were important sources for the development and utilization of flavonoids.

基金項目中山市公益研究項目(2015B2355)。

作者簡介郭艷峰(1984-)，女，山西汾西人，博士，從事植物功能產品開發研究。*通訊作者，教授，從事天然產物開發研究。

收稿日期2016-02-19

中圖分類號S 567.23+9

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)07-145-02